动物细胞融合与单克隆抗体讲课

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,2.2,动物细胞工程,2.2.2,动物细胞融合与单克隆抗体,第一页，共三十二页。,植物细胞A,植物细胞B,去掉细胞壁,去掉细胞壁,原生质体A,原生质体B,原生质体融合,杂合的原生质体,再生出细胞壁,杂种细胞,细胞分裂,分化发育,愈伤组织,杂种植株,温故知新:,植物体细胞杂交过程,第二页，共三十二页。,材料1:1970年，有两位科学家做了一个人鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？,人-鼠(想像图),第三页，共三十二页。,一、动物细胞融合,1.概念：,动物细胞融合cell fusion也成细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为,杂交细胞,。,2、原理：,细胞膜的流动性,第四页，共三十二页。,3.融合过程：,诱导融合的方法？,第五页，共三十二页。,诱导方法：,物理方法：,化学法：,生物法：,灭活的病毒,电激等,聚乙二醇PEG),第六页，共三十二页。,为什么灭活的 病毒能作诱导剂,？,3.融合过程：,第七页，共三十二页。,灭活病毒诱导细胞融合的原理：,病毒外表含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜翻开，细胞发生融合。,灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。,P52生物技术资料卡,第八页，共三十二页。,植物细胞杂交与动物细胞融合的比较,比较项目,植物体细胞杂交,动物细胞融合,原理,融合前处理,使用的酶,诱导方法,主要用途,细胞膜的流动性细胞的全能性,细胞膜的流动性,纤维素酶、果胶酶,胰蛋白酶,物理方法,离心、振荡、电激,化学方法PEG,物理、化学方法,灭活的病毒,获得杂种植株,制备单克隆抗体,去除细胞壁后诱导原生质体融合,使细胞分散后诱导细胞融合,第九页，共三十二页。,4.意义：,突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交种间、属间、科间、动植物之间成为可能。,5.应用：,最重要的用途是,制备单克隆抗体,第十页，共三十二页。,动物细胞,融,融合,物理法：,化学法：,生物法：,诱导融合,的,的方法,原理：,细胞膜的,流,流动性,过程：,离心、震,动,动、电激,聚乙二醇,PEG),灭活的病,毒,毒,动、植物,细,细胞融合,的,的主要区,别,别,用途：,最重要的,用,用途是,制备单克,隆,隆抗体,第十一页,，,，共三十,二,二页。,思考,？,1.抗,体,体由何种,细,细胞产生,？,？,如何产生,？,2.抗,体,体,的化学本,质,质是什么,？,？,与抗原作,用,用的特点,？,？,主要分布,在,在哪里？,3.,用,用传统的,方,方法如何,获,获得抗体,？,(三)单,克,克隆抗体,第十二页,，,，共三十,二,二页。,第十三页,，,，共三十,二,二页。,思考,？,1.抗,体,体由何种,细,细胞产生,？,？,如何产生,？,2.抗,体,体,的化学本,质,质是什么,？,？,与抗原作,用,用的特点,？,？,主要分布,在,在哪里？,3.,用,用传统的,方,方法如何,获,获得抗体,？,(三)单,克,克隆抗体,第十四页,，,，共三十,二,二页。,抗体的传,统,统生产方,法,法,从血清中,别,别离抗体,该法制备,抗,抗体的特,点,点：,产量低、,纯,纯度低，,且,且抗体的,特,特异性差,、,、灵敏度,低,低。,多种效应B细胞,动物体内,多种抗体,抗原,第十五页,，,，共三十,二,二页。,单克隆抗,体,体的制备,单克隆,抗体:单个细胞,克,克隆产生,的,的化学,性,性质单,一,一特异性,强,强的抗体,利用效应B细胞产,生,生抗体的,功,功能,利用肿瘤,细,细胞无限,增,增殖的特,性,性,利用细胞,融,融合的技,术,术将两种,细,细胞融合,获,获得杂交,瘤,瘤细胞,利用动物,细,细胞培养,技,技术大量,培,培养杂交,瘤,瘤细胞,设计方案,：,：,第十六页,，,，共三十,二,二页。,1、过程,注射抗原,已免疫的B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,细胞融合,、,、,筛选,杂交瘤细胞,细胞培养,筛选,，继续培养,足够数量,的,的、能产,生,生特定抗,体,体的细胞,群,群,体外培养,注射到小鼠腹腔,单克隆抗,体,体,第十七页,，,，共三十,二,二页。,单克隆抗,体,体的制备,第十八页,，,，共三十,二,二页。,骨髓瘤细胞,免疫小鼠,单克隆抗体,筛选,克隆、,筛选,体内培养,体外培养,B淋巴细胞,选择培,养,养基,抗体检,测,测,细胞融合,杂交细胞,第十九页,，,，共三十,二,二页。,1、只,考,考虑两两,融,融合融,合,合细胞几,种,种类型？,2、本过,程,程中进行,了,了两次筛,选,选，目的,分,分别是什,么,么？第1,次,次筛选要,淘,淘汰哪些,细,细胞？,3、杂交,瘤,瘤细胞有,何,何特点？,4、本过,程,程利用的,哪,哪些技术,？,？,思考以下,问,问题：,第二十页,，,，共三十,二,二页。,2、,单克隆抗,体,体的优点,特异性强,、,、灵敏度,高,高,第二十一,页,页，共三,十,十二页。,3、,单克隆抗,体,体的应用,1作,为,为诊断试,剂,剂最,广,广泛应用,准确、高,效,效、简易,、,、快速,如同位,素,素标记单,克,克隆抗体,，,，可诊断,肿,肿瘤、心,血,血管畸形,等,等,第二十二,页,页，共三,十,十二页。,2运,载,载药物,生物导弹=单克隆,抗,抗体+药,物,物，治疗,肿,肿瘤,(“生物,导,导弹,单抗导,向,向，药物,为,为弹头),第二十三,页,页，共三,十,十二页。,看书上53页图，,分,分组讨论,，,，单抗制,备,备过程分,哪,哪几步？,请用箭,头,头把以,下,下代表,单,单克隆,抗,抗体制,备,备过程,步,步骤的,图,图解的,字,字母按,正,正确顺,序,序连接,起,起来。,顺,顺序是,？,？,第二十,四,四页，,共,共三十,二,二页。,有梦想,，,，才会,有,有创造,！,！,已成功,的,的动物,细,细胞融,合,合实例,有,有很多,，,，如人,小鼠,、,、人,兔,兔、人,鸡、,鼠,鼠兔,、,、鸡,鼠,鼠等上,百,百种融,合,合细胞,。,。甚至,已,已成功,完,完成了,酵,酵母菌,鸡,、,、人,胡,胡萝卜,等,等细,胞,胞的融,合,合。,想了解,更,更多信,息,息，可,通,通过网,络,络、电,视,视、杂,志,志等途,径,径关注,细,细胞融,合,合和单,克,克隆抗,体,体的最,新,新信息,。,。,生物种,间,间杂交,想像图,第二十,五,五页，,共,共三十,二,二页。,1、科,学,学家用,小,小鼠骨,髓,髓瘤细,胞,胞与某,种,种细胞,融,融合，,得,得到杂,交,交细胞,，,，经培,养,养可产,生,生大量,的,的单克,隆,隆抗体,，,，与骨,髓,髓瘤细,胞,胞融合,的,的是,A.经,过,过免疫,的,的B淋,巴,巴细胞B.,没,没经过,免,免疫的T淋巴,细,细胞C.经,过,过免疫,的,的T淋,巴,巴细胞D.,没,没经过,免,免疫的,淋巴,细,细胞,A,巩固练,习,习,2.动,物,物细胞,融,融合与,植,植物体,细,细胞杂,交,交的比,较,较中，,正,正确的,选,选项是,诱导融,合,合的方,法,法完全,相,相同B.所,用,用的技,术,术手段,根,根本相,同,同,C.,操,操作步,骤,骤根本,相,相同D.,都,都能,形,形成杂,种,种细胞,D,第二十,六,六页，,共,共三十,二,二页。,3.,单,单克隆,抗,抗体制,备,备过程,中,中培育,的,的杂交,细,细胞是,A.由,小,小鼠能,产,产生抗,体,体的B,淋,淋巴细,胞,胞与肝,细,细胞融,合,合,B.由,小,小鼠一,个,个B淋,巴,巴细胞,诱,诱导融,合,合而成,C.由,小,小鼠一,个,个B淋,巴,巴细胞,与,与肌瘤,细,细胞诱,导,导融合,而,而成,D.由,小,小鼠一,个,个B淋,巴,巴细胞,与,与骨髓,瘤,瘤细胞,诱,诱导融,合,合而成,D,4.只,能,能使动,物,物细胞,融,融合的,常,常用诱,导,导方法,是,是,APEGB,灭,灭活的,病,病毒C电,刺,刺激D,离心,B,第二十,七,七页，,共,共三十,二,二页。,5.,单,单克隆,抗,抗体制,备,备过程,中,中，骨,髓,髓瘤细,胞,胞和B,淋,淋巴细,胞,胞诱导,融,融合后,，,，要用,特,特定培,养,养基筛,选,选出杂,交,交瘤细,胞,胞，在,这,这种培,养,养基上,不,不能存,活,活增殖,的,的细胞,是,是,淋巴,细,细胞,小鼠,骨,骨髓瘤,细,细胞,B,淋,淋巴细,胞,胞自身,融,融合细,胞,胞,小鼠,骨,骨髓瘤,细,细胞自,身,身融合,细,细胞,杂交,瘤,瘤细胞,A.,B.,C.,D.,C,6.“,生,生物导,弹,弹是,指,指,A.单,克,克隆抗,体,体,B.杂,交,交瘤细,胞,胞,C.产,生,生特定,抗,抗体的B淋巴,细,细胞,D.在,单,单克隆,抗,抗体上,连,连接抗,癌,癌药物,D,第二十,八,八页，,共,共三十,二,二页。,A、B,细,细胞为,动,动物细,胞,胞,请,据,据图答,复,复以下,的,的问题:,A细胞,B细胞,C细胞,D细胞,(1),假,假设A,细,细胞为,骨,骨髓瘤,细,细胞B,细,细胞为,淋,淋巴细,胞,胞,那,么,么D细,胞,胞称为,细,细胞,D细,胞,胞具有,两,两个亲,本,本细胞,的,的特征,一方,面,面因具,有,有骨髓,瘤,瘤细胞,的,的,性,性,质,质,通,过,过,方,方式,产,产生大,量,量细胞,我们,称,称之为,过,过,程,程;另,一,一方面,能,能分泌,大,大量的,抗,抗体,我,我们把,该,该过程,分,分泌的,抗,抗体称.,杂交瘤,连续分,裂,裂,有丝分,裂,裂,单克隆,单克隆,抗,抗体,练一练,第二十,九,九页，,共,共三十,二,二页。,(2)D细胞,中,中产生,的,的抗体,其,其化学,本,本质是,合成,该,该物质,的,的场所,是,是,它是,由,由,控制合,成,成的,合,合成过,程,程包括,和,两个重,要,要步骤.,球蛋白,核糖体,基因,转录,翻译,(3)D细胞,中,中产生,的,的抗体,具,具有,作用,与,与血清,抗,抗体相,比,比其优,越,越之处,在,在于,强,高.,免疫,特异性,灵敏度,第三十,页,页，共,三,三十二,页,页。,(4),假,假设A,为,为人细,胞,胞,B,为,为鼠细,胞,胞,用,同,同位素,标,标记A,细,细胞膜,上,上的蛋,白,白质,B不标,记,记,在C细胞,时,时,检,测,测结果,发,发现整,个,个细胞,一,一半有,放,放射性,另,另一半,没,没有.,在,在D细,胞,胞时,检,检测结,果,果发现,整,整个细,胞,胞都有,放,放射性,请解,释,释原因.,构成细胞膜,的,的蛋白质分,子,子大都可以,流,流动,第三十一页,，,，共三十二,页,页。,内容总结,2.2,动,动物细胞工,程,程。那么，,如,如何实现人,鼠细胞的,融,融合，动物,细,细胞融合后,还,还有什么用,途,途呢。动物,细,细胞融合cellfusion也成细,胞,胞杂交，是,指,指两个或多,个,个动物细胞,结,结合形成一,个,个细胞的过,程,程。灭活是,指,指用物理或,化,化学手段使,病,病毒或细菌,失,失去感染能,力,力，但并不,破,破坏这些病,原,原体的抗原,结,结构。利用,细,细胞融合的,技,技术将两种,细,细胞融合获,得,得杂交瘤细,胞,胞。1,作,作为诊断试,剂,剂最广,泛,泛应用。看,书,书上53页,图,图，分组讨,论,论，单抗制,备,备过程分哪,几,几步。有梦,想,想，才会有,创,创造,第三十二页,，,，共三十二