传染病的免疫学检测-一-、伤寒、副伤寒血清学诊断课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2019-7-3,谢谢观赏,第八部分 传染病的免疫学检测,一、伤寒、副伤寒血清学诊断,（一）肥达（,Widal,）试验,方法：试管法,步骤：试管编号,稀释病人血清,+,菌液,混匀,放置,16-20,小时,观察结果。,结果判定:,以,出现,+,凝集,的血清最高稀释,倍数,为,该血清的,凝集抗体的,效价,1,谢谢观赏,2019-7-3,第八部分 传染病的免疫学检测1谢谢观赏2019-7-3,2,谢谢观赏,2019-7-3,2谢谢观赏2019-7-3,正常值：,O1:80,；,H1:160,临床意义,：,1.“,O,”和“,H”,均高于正常,值，,可考虑为伤寒,；恢复期较急性期增长,4,倍以上确定,诊断,。,2.“,O”,抗体（,IgM）,出现较早,，,“,H”,抗体（,IgG）,出现较晚,3.病程第2周以后，大多出现阳性反应，一般以第3、4周阳性率最高，病愈后，可持续数月。,3,谢谢观赏,2019-7-3,正常值：3谢谢观赏2019-7-3,（二）酶联免疫,（,ELISA,）,试验,方法：抗原,(,伤寒杆菌脂多糖或,Vi,抗原,),包被,+,待测,血清,+,第二抗体（酶标记）,底物显色,参考值：,1:20,临床意义：,1.,早期诊断,(,发病,1,周后即可升高）,2.,检测抗,Vi,抗体，可以诊断伤寒带菌者,4,谢谢观赏,2019-7-3,（二）酶联免疫（ELISA）试验4谢谢观赏2019-7-3,5,谢谢观赏,2019-7-3,5谢谢观赏2019-7-3,二、抗链球菌溶血素“,O”,测定,溶血抑制法,原理：抗链球菌溶血素“,O”,（,ASO,）存在于感染链球菌病人的血清中，可以和溶血素“,O”,特异性结合，使之失去溶血作用,方法：病人血清,倍比稀释,溶血素,+,红细胞,观察溶血现象,结果判定：无溶血现象的血清最高稀释倍数定为,ASO,的单位数。,参考值：,ASO400U,临床意义：,1.,链球菌感染,1,周，,ASO,，,4,6,周达高峰。,2.,风湿热：,ASO,。,6,谢谢观赏,2019-7-3,二、抗链球菌溶血素“O”测定6谢谢观赏2019-7-3,三、肝炎的免疫学检测,（一）甲型肝炎（,HAV,）的免疫学检查：,1.,粪便中,HAV,抗原的检测,ELISA,夹心法,方法：,标本处理：待测粪便,+,牛肉汤盐水,冻融,离心取上清,(,即待测抗原,),；,包被抗体；,加待测标本；,加酶标抗体,(HRP-,抗甲肝,IgG),；,加酶底物；,测定,OD,492,。,结果判断：,待测标本,OD,值,2.1,阳性,阴性对照,OD,值,7,谢谢观赏,2019-7-3,三、肝炎的免疫学检测7谢谢观赏2019-7-3,2,抗,HAV-IgM,的检测,抗体捕获,ELISA,法,方法：抗人,链包被,+,待检血清,(,含抗,HAV-IgM)+HAAg +HRP-,抗,HAV-IgG+,酶底物,测定,OD,492,。,结果判断：,待测标本吸光度值,2.1,阳性,阴性对照吸光度值,临床意义：发病,4,周后，几乎全部患者,抗,HAV-IgM,为阳性，,用于甲肝诊断。,检测,抗,HAV-IgG,可用于流行病学调查。,8,谢谢观赏,2019-7-3,2 抗HAV-IgM的检测8谢谢观赏2019-7-3,9,谢谢观赏,2019-7-3,9谢谢观赏2019-7-3,（二）,乙型肝炎的免疫学检测,1.HBsAg,的检测,反向间接血凝试验,方法：,致敏红细胞,(,抗,HBsAg,RBC),患者血清,(,含,HBsAg),凝集,10,谢谢观赏,2019-7-3,（二）乙型肝炎的免疫学检测10谢谢观赏2019-7-3,2.,抗,HBs,检测,ELISA,抑制法,方法：抗,HBs,包被,+HBsAg(,已知浓度,)+,待测标,本,+HRP-,抗,HBs +,酶底物,目测或测,定,OD,492,结果判定：,目测：阳性孔无色或浅黄,阴性孔桔黄色,OD,值测定：,0.5,待测孔,OD,值,阴性对照,OD,值,11,谢谢观赏,2019-7-3,2.抗HBs检测待测孔OD值阴性对照OD值11谢谢观赏201,12,谢谢观赏,2019-7-3,12谢谢观赏2019-7-3,血中,HBV,标志物检查法及其阳性意义,标志物 常用检测法 阳性意义,HBsAg ELISA,夹心法 正在或曾经感染,抗,-HBs ELISA,抑制法 曾感染或疫苗注射,抗,-HBc(IgM,类,),抗体捕获,ELISA,发病期，慢性恶化期,抗,-HBc(IgG,类,)ELISA,抑制法 曾感染，急性恢复期,HBeAg ELISA,夹心法,RPHA HBV,复制，感染性强,抗,-HBe ELISA,抑制法，,PHA,急性感染，趋向恢复,HBV-DNA PCR,法,HBV,复制,前,S,2,Ag ELISA,夹心法,HBV,复制,抗,-,前,S2 ELISA,抑制法 提示预后良好,13,谢谢观赏,2019-7-3,血中HBV标志物检查法及其阳性意义1,四、梅毒血清学检查,1.,未灭活血清反应素试验,(unheated serum reagin test,USR),玻片凝集法,方法：病人血清和脂质抗原,(,心磷脂、卵磷脂和胆固醇混合物）各一滴,玻片上,混合振动,4min,观察结果,结果判断：,（阴性）无凝集,（弱阳性）小凝集块,(,阳性,),中或大凝集块,14,谢谢观赏,2019-7-3,四、梅毒血清学检查14谢谢观赏2019-7-3,2.,快速血浆反应素试验,(,rapid plasma reagin test,RPR),方法：,病人血清,RPR,抗原,(,活性炭结合类脂质,Ag),观察凝集颗粒或絮片,结果判断：阴性 无黑色凝集,阳性 明显黑色凝集颗粒或絮片,临床意义：,1.,梅毒患者,USR,阳性者，,70,90,；,RPR,阳性者，,80,95,。,2.,某些麻风、,SLE,、硬皮病、类风湿性关节炎等也可出现,USR,假阳性。,15,谢谢观赏,2019-7-3,2.快速血浆反应素试验(rapid plasma reag,3.,荧光密螺旋体抗体吸收实验,(FAT-ABS),方法：病人血清,(56,30min),加非致病螺旋,体抗原吸收,滴加于抗原,(,梅毒螺旋体,),片,+FITC-,抗人,IgG,荧光显微镜检,查。,结果判定：,+,+,阳性,+,可疑,-,阴性,16,谢谢观赏,2019-7-3,3.荧光密螺旋体抗体吸收实验(FAT-ABS)16谢谢观赏,17,谢谢观赏,2019-7-3,17谢谢观赏2019-7-3,五、获得性免疫缺陷综合征,(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),的相关检测技术,1.,抗,HIV,抗体的检测：,酶联免疫吸附试验（,ELISA,）,明胶颗粒凝集实验,(PA),免疫荧光检测法（,IFA,）,免疫印记法（,western blot,）,放射免疫沉淀法（,RIP,）,应用：,、,和,用于筛查；,和,用于确定诊断。,18,谢谢观赏,2019-7-3,五、获得性免疫缺陷综合征(acquired immunode,2.HIV,病毒检测：,细胞培养分离病毒,检测,HIV,抗原。,3.,细胞免疫功能：,检测,T,细胞功能,a.CD4T,淋巴细胞计数,b.,迟发变态反应皮试,c.,有丝分裂原刺激反应,检测,B,细胞功能,a.,循环免疫复合物,b.,免疫球蛋白,19,谢谢观赏,2019-7-3,2.HIV病毒检测：19谢谢观赏2019-7-,1.,血清中抗,HIV,抗体检测 间接免疫荧光法,方法：淋巴细胞,(,感染,HIV),涂片,待检血清,(16,稀,释,FITC-,抗人,IgG,观察结果,结果判定：阳性 胞浆出现弥漫性荧光,20,谢谢观赏,2019-7-3,20谢谢观赏2019-7-3,2.,血清中抗,HIV,抗体检测 免疫印记法,方法：,HIV-1,蛋白抗原裂解物,SDS-PAGE,电泳,转移至硝酸纤维膜,+,待测血清,+HRP-,抗人,IgG +,酶低物,观察结果。,结果判定：,阴性 无可见显色条带,阳性 可见显色条带，根据显色带对应的,抗原的分子量判定,HIV,感染，如：,P24,、,P31,和,gP41,或,gP160/120,显色,可确定为感染阳性，缺少,P24,或,P31,为可能阳性，只有其一为可疑。,21,谢谢观赏,2019-7-3,2.血清中抗HIV抗体检测 免疫印记法21谢谢观赏20,22,谢谢观赏,2019-7-3,22谢谢观赏2019-7-3,