微生物检测专题知识讲座

,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,微生物检测专题知识讲座,微生物检测专题知识讲座,第1页,微生物因为体积小,、,质量轻、适应性强等特点，在自然界中分布很广。但环境条件不一样，微生物种类和数量也不一样。,微生物检测专题知识讲座,第2页,第一节 土壤中微生物,一、土壤是微生物生活良好环境,土壤中生态环境条件,营养（有机质丰富）、水分（有一定含量）、空气（含氧气）、酸碱度（,pH5.55.8,，,适宜）、渗透压（,0.3,0.6,MPa,，等渗或低渗环境,）、温度条件（较恒定）和表面保护层。,故土壤是微生物大本营，也是人类最丰富“菌种资源库”。,微生物检测专题知识讲座,第3页,二、土壤中常见微生物类群,土壤中微生物主要种类有：,细菌（占,70,90,）,10,8,放线菌,10,7,丝状菌,10,6,酵母菌,10,5,藻类,10,4,原生动物,10,3,微生物检测专题知识讲座,第4页,三、土壤中微生物数量与分布,不一样类型土壤中微生物种类和数量是不相同。调查结果表明，有机质含量丰富黑土、草甸土、磷质石灰土等微生物数量多；栗钙土、盐碱土、红壤土、砖红壤土微生物数量较少。（见表,1,）,不一样土层深度土壤中微生物数量和种类也不一样。普通土壤表层微生物数量最多，伴随土层加深，微生物数量逐步降低。,微生物检测专题知识讲座,第5页,表,1,我国各主要土壤含菌量,(,万,/,克干土,),土类 地点细菌放线菌真菌,暗棕壤 黑龙江呼玛,2,32761213,棕壤 辽宁沈阳,1,2843936,黄棕壤 江苏南京,1,4062716,红壤 浙江杭州,1,1031234,砖红壤 广东徐闻,5073911,磷质石灰土 西沙群岛,2,2291,10515,黑土 黑龙江哈尔滨,2,1111,02419,黑钙土 黑龙江安达,1,0743192,棕钙土 宁夏宁武,140 11 4,草甸土 黑龙江亚沟,7,8632923,嵝土 陕西武功,9511,0324,白浆土 吉林皎河,1,598553,滨海盐土 江苏连云港,466410.4,微生物检测专题知识讲座,第6页,1,、取土样,选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。先除去表层约,2cm,土壤，将铲子插入土中数次，然后取,2,10cm,处土壤。,盛土容器应是无菌。将,5,点样品约,1kg,充分混匀，除去碎,石、植物残根等。土样取回后应尽快投入试验，同时取,10-,15g,，称重后经,105oC,烘干,8h,，置于干燥器中冷却后再次称重，,计算含水量。,四、土壤微生物分离和计数,微生物检测专题知识讲座,第7页,2,、倒平板,熔化已灭菌上述,4,种培养基并冷却至,45oC,左右倒平,板，凝固待用，每种培养基每个稀释度各三只平板。,微生物检测专题知识讲座,第8页,3,、编号,取,5,支无菌空试管（,15150mm,）依次编号为,10,-3,、,10,-4,、,10,-5,、,10,-6,、,10,-7,。,4,、分装无菌水,按无菌操作用,5mL,移液管分别吸收,4.5mL,无菌水于编号,各无菌空试管中。,微生物检测专题知识讲座,第9页,5.,制备土壤稀释液,称土样,1g,于盛有,99mL,无菌水或无菌生理盐水并装有玻,璃珠三角瓶中，振荡,10,20min,，使土样中菌体、芽孢,或孢子均匀分散，此即为,10-2,浓度菌悬液。用无菌移液,管吸收悬液,0.5mL,于,4.5mL,无菌水试管中，用移液管吹吸三,次、摇匀，此即为,10-3,浓度。一样方法，依次稀释到,10-,7,。稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行，整个稀释,过程如图。,微生物检测专题知识讲座,第10页,微生物检测专题知识讲座,第11页,6,、混菌法接种,细菌分离分别准确吸收,10-7,，,10-6,，,10-5,三个稀释度,菌液,1mL,；放线菌分离分别吸收,10-5,，,10-4,，,10-3,三个稀,释度菌液,1mL,；霉菌分离分别吸收,10-4,，,10-3,，,10-2,三个,稀释度菌液,1mL,；酵母菌分离分别吸收,10-6,，,10-5,，,10-4,三个稀释度菌液,1mL,，对号加在已凝固平板上，同时做,空白对照，空白对照只加培养基，不接种菌液。,7.,培养,将涂布后平板上倒置于恒温箱中，细菌在,37oC,下培,养,24,48h,，霉菌在,28oC,下培养,3,5d,，放线菌在,28oC,下培,养,5,7d,，酵母菌,30oC,下培养,2,3d,观察结果。,微生物检测专题知识讲座,第12页,8.,计数,选菌落分散、菌落数适量且各平行皿菌落数靠近稀,释度平皿计数，通常细菌和放线菌选取菌落数在,30,300,之间平皿，霉菌选菌落数在,10,100,之间平皿，最终换,算成每克干土所含菌数。,同一稀释度平均菌落数,稀释倍数,每克干土含菌数,=,1,土壤含水量,微生物检测专题知识讲座,第13页,第二节 水体中微生物,一、水体是微生物天然生境,不论是海水还是淡水水体中，都有着微生物生长所必需营养，有如土壤所具备条件。,微生物检测专题知识讲座,第14页,二、水体中微生物数量和分布,1.,污染淡水,处于城镇等人口聚集地域湖泊、河流等淡水。,10,8,10,9,个,/mL,水,主要是一些能分解各种有机物腐生菌，如芽孢杆菌、生孢梭菌、变形杆菌、大肠杆菌、粪链球菌等。有甚至还含有伤寒、痢疾、霍乱、肝炎等人类病原菌。,微生物检测专题知识讲座,第15页,2.,清洁淡水,（,1,）溪流及贫营养湖,10100,个,/mL,水,以自养型种类为主。常见细菌有绿硫细菌、紫色细菌、蓝细菌、柄细菌、赭色纤发菌、球衣菌和萤光假单胞菌等。另外，还有许多藻类（如绿藻、硅藻等）、原生动物（如钟虫及其它固着型纤毛虫、变形虫、鞭毛虫等）和后生动物（如枝角类、桡足类等）。,（,2,）地下水、自流井、山泉及温泉,有机物和微生物都极少,石油岩石地下水含分解烃细菌，含铁泉水有铁细菌，含硫温泉有硫磺细菌。,微生物检测专题知识讲座,第16页,3.,影响微生物在淡水水体中分布原因,水体类型、污染程度、有机物含量、溶解氧量、水温、,pH,及水深等。,4.,海水,除了一些从河水、雨水及污水等带来暂时种类外，绝大多数是耐盐、嗜冷、耐高渗透压和耐高静水压力种类。海水中常见微生物有假单胞菌属、弧菌属、黄色杆菌属、无色杆菌属及芽孢杆菌属等。普通在港口，每毫升海水含菌量为,1,10,5,个，在外海每毫升含菌为,10250,个。,微生物检测专题知识讲座,第17页,江、河、湖泊、池塘等水体中有机物含量比较多，微生物种类数量也比较多。微生物在水体中表现为水平分布和垂直分布规律。另外，相同水域不一样时期微生物含量及分布也不一样。,微生物检测专题知识讲座,第18页,生活饮用水细菌卫生标准是：细菌总数,100,个,/mL,，大肠菌群值,3,个,/L,。,微生物检测专题知识讲座,第19页,（一）细菌总数测定,菌落总数,需氧情况下，,37,培养,48h,，能在普通营养琼脂平板,上生长细菌菌落总数,.,作用：判定食品被细菌污染程度及卫生质量优劣，对被检样品,做出适当卫生学评价。,基础操作普通包含：,样品稀释倾注平皿培养,48,小时计数汇报。,三、水细菌学检测,微生物检测专题知识讲座,第20页,1,、样品处理和稀释,操作要求：,“无菌操作”落实一直。,充分振摇或研磨,25g,或,25ml,检样,225mL,稀释液,含有玻璃珠灭菌玻璃瓶或乳钵,1,：,10,稀释液。,1ml,1ml,1ml,9ml,稀释液,1,：,100,9ml,稀释液,1,：,1000,9ml,稀释液,1,：,10000,微生物检测专题知识讲座,第21页,降低误差：每递增稀释一次即换用,1,支,1ml,灭菌吸管，将吸管内液体沿管壁流入，,勿使吸管尖端伸入稀释液内，而且稀释液应充分振摇。,环境要求：,琼脂平板在工作台暴露,15,分钟，每个平板不得超出,15,个菌落。,代表性：,取固体样品时需多采几个部位，且经过均质或研磨；,液体样品须经过振摇，以取得均匀稀释液。,微生物检测专题知识讲座,第22页,2,、稀释样品取样和倾注平皿,每个稀释度,做两个平皿,将凉至,46,营养琼脂培养基注入平皿约,15ml,，并转动平皿，混合均匀。,1.,取样,倾注平皿,1,：,10,稀释液,225mL,无菌水,1mL,1mL,9mL,稀释液,1,：,100,9mL,稀释液,1,：,1000,1mL,1mL,1mL,1mL,1mL,1mL,1mL,1ml,无菌水,25g,或,25ml,检样,微生物检测专题知识讲座,第23页,3,、培养及计数,培养条件：倒置于,36,1,温箱内培养,48,2h,计数时间：抵达要求培养时间，应马上计数。假如不能马上计数，应将平板放,置于,0,4,，但不得超出,24h,。,菌落总数汇报方式,计平皿中菌落数：,肉眼观察，必要时用放大镜检验。记下各平板菌落总数，求出同稀,释度各平板平均菌落数。,规律：不一样稀释度菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度二个平板菌落,数应基础靠近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈,多。,如出现逆反现象，则应视为检验中差错（有食品有时可能出现逆反现,象，如酸性饮料等），不应作为检样计数汇报依据。,微生物检测专题知识讲座,第24页,当计数平板内菌落数过多（即全部稀释度均大于,300,时），但分布很均匀，可取平板二分之一或,1/4,计数。再乘以对应稀释倍数作为该平板菌落数。,当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长菌落之间无任何显著界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不一样起源链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长每一个菌落分开计数。如有片状菌落生长，该平板普通不宜采取，如片状菌落不到平板二分之一，而另二分之一又分布均匀，则能够半个平板菌落数乘,2,代表全平板菌落数。,微生物检测专题知识讲座,第25页,菌落总数汇报方式,计数标准：,选平均菌落数在,30300,之间者进行计算,2.,若有,2,个稀释度平均菌落数在,30300,之间时，则按二者菌落总数之比来决,定，若比值小于,2,应汇报二者平均数；若大于,2,则汇报其中较小菌落总数。,3.,若全部稀释度平均菌落数均大于,300,，以稀释度最高平均菌落数乘以稀释倍,数汇报之。,4.,若全部稀释度平均菌落数均小于,30,，则应按稀释度最低平均菌落数乘以稀,释倍数汇报之。,5.,若全部稀释度平均菌落数均不在,30300,之间，则以最靠近,300,或,30,平均菌,落数乘以稀释倍数汇报之。,6.,若全部菌落数匀为“无法计数”时，应注明水样最大稀释倍数。,7.,在求同稀释度平均数时，若其中,1,个平板上有较大片状菌落生长时，则不宜,采取，而应以无片状菌落生长平板作为该稀释度平均菌落数。若片状菌落约,为平板二分之一，而另二分之一平板上菌落分布很均匀，则可按半平板上菌落计数，,然后乘以,2,作为整个平板菌落数。,1.,仅,1,个稀释度平均菌落数在此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数报,告之。,微生物检测专题知识讲座,第26页,汇报标准,菌落总数汇报方式,例次,不一样稀释度平均菌落数,两个稀释度菌落数之比,菌落数,(,个,/mL),汇报方式(个/mL),10,-1,10,-2,10,-3,1,1365,164,20,16400,16000,或,1.610,4,2,2760,295,46,1.6,37750,38000,或,3.810,4,3,2890,271,60,2.2,27100,27000,或,2.710,4,4,无法计数,4650,513,513000,510000,或,5.110,5,5,27,11,5,270,270,或,2.710,2,6,无法计数,305,12,30500,31000,或,3.110,4,7,无法计数,10,-3,无法计数,微生物检测专题知识讲座,第27页,4,、,菌落总数汇报方式,菌落数汇报，按国家标准方法要求菌落数在,1100,时，按实有数字汇报，如大于,100,时，则汇报前面两位有效数字，第三位数