正常细胞癌变的原因及HPV病毒诱导的宫颈癌的分子机制

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,正常细胞癌变的原因和,HPV,病毒诱导宫颈癌的分子机制,一个正常的细胞如何变为一个癌细胞呢,?,癌症的本质？,癌症源于体细胞突变。,基因发生突变的体细胞，在与正常体细胞生存竞争的过程中，不断进化。最终变成永生不死的癌细胞。癌细胞无限制的增殖，进而导致肿瘤的发生。,癌变的原因,原癌基因突变,抑癌基因突变,癌细胞,物理致癌因子,化学致癌因子,病毒致癌因子,正常细胞,作用,肿瘤的发生是基因突变逐渐累积的结果,eg,:,已知的癌症危险因素,吸烟,肺癌、膀胱癌、食道癌、胰腺癌、肝癌、口腔癌、鼻腔癌还有很多其他癌症都与烟草的使用有关，据估计,90%,的男性肺癌死亡的原因可以归为吸烟。烟草所产生的烟雾是复杂的化学物质混合体。当这些物质被吸入肺部，它们可以在局部或远程引发,DNA,损伤并改变细胞生长和增殖状态。,已知的癌症危险因素,饮食,仅次于烟草的关键致癌危险因素，这些因素包括摄入的饮食类化学成分以及总体上能量的消耗。,14%20%,的癌症死亡率与超重和肥胖率有关；红肉已经证实与肠癌有关，可能由于防腐处理以及热处理的肉里含有亚硝胺,(,nitosamine,),和杂环胺,(heterocyclic amine),等致癌物。,职业,许多致癌物被鉴定是以人类触及因工业化而导致的癌症为代价的,致癌物的类型,物理致癌物,生化致癌物,化学致癌物,必须通过代谢激活为亲电性的中间物，与蛋白质、,RNA,或,DNA,形成共价加合物（化学致癌性的亲电性理论）,其与,DNA,结合而改变其完整性，导致突变。,物理致癌物,紫外线,（,主要是波长在,100400nm,）有足够的能量引起光化学损伤，导致皮肤癌的形成。,离子辐射,离子辐射的能量很高，足以从与其碰撞的原子或者分子上移除一个电子。,在,UV,辐射中，,DNA,是主要的靶标，,DNA,经过,UV,辐射后会形成嘧啶二聚体。当这些损伤没修复时，会产生,DNA,突变。标志性的损害时,C T,或者,CC GG,。,阳光辐射照成的基因突变有,a.p53(,如鳞状细胞癌，,squamous,cell,carcinama,SCC,；基底细胞癌，,basal cell,carcinoma,BCC,),b.p16(,如黑色素瘤,),c.PTCH(,如,BCC,，也可能导致,SCC),经过,UV,辐射，皮肤角质形成细胞中很多信号通路会改变，如生长停滞和,DNA,损伤应答基因,(,如,p53,，,GADD45,，错配修复基因,),、凋亡信号分子,(,如,bcl-2),和促细胞分裂信号,(,如,Ras,),生物致癌物,传染因子是仅次于烟草的潜在致癌物，,15%30%,的癌症与它相关。,传染因子引起癌症的机制有三大类：,a.,通过感染源引起持久的感染伴随慢性炎症，导致巨噬细胞在感染的位点形成活性的氧化和氮化物，这些活性分子能够损伤,DNA,、蛋白质和膜，导致肿瘤的形成。,b.,感染因子通过激活细胞的癌基因通道或者使一个抑癌基因失活，直接参与细胞的癌变。,c.,与人类免疫缺陷病毒（,human immunodeficiency,virus,HIV,）相关,感染可能导致免疫抑制，宿主免疫系统识别感染或癌变细胞的能力降低。,生物致癌物,化学致癌物,有机致癌物,苯（,Benzene,）,多环芳烃（,polycyclic aromatic,hydrocarbon,PAH,）,:PAH,可以被转变为苯环“湾区”的二醇环氧物（,diol,epoxide,）,这些环氧物可以与,DNA,形成共价的化合物。,黄曲霉素,B1,（,aflatoxinB1,AFB1,）,:,最强的肝癌致癌物。,无机致癌物,镉：能在体内积累，可能通过表观遗传的机制激活原癌基因，破坏细胞的正常过程。,砷：接触会产生活性自由基，导致,DNA,及蛋白质的损伤。,激素,己烯雌酚（,diethyl-,stilbestrol,DES,）,小鼠皮肤致癌的多步骤模型,原癌基因和抑癌基因及相关的癌症,HPV,诱发宫颈癌（,cervical cancer,）的过程,HPV,感染建立在鳞状上皮细胞损伤，表皮防护缺失的基础上，而同时,HPV,感染又阻碍了鳞状上皮细胞的修复，引起恶性循环,高危型,HPV,持续感染可引起宫颈上皮内瘤变,CIN,（,cervical intraepithelial,neoplasia,）和宫颈鳞癌。,HPV,感染经过漫长的过程发展为宫颈癌,宫颈不典型增生原位癌早期浸润癌宫颈癌,),HPV,诱发宫颈癌的分子机制,HPV,（,Human,Papillomavirus,HPV,）人类乳头瘤病毒，是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒,A,属，是球形,DN,A,病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖。目前已分离出,130,多种，该病毒只,侵,犯人类，对其它动物无致病性。,高危的,HPV-16,病毒,HPV16,基因组可分为三个不同区域：,a.,早期区域，编码参与病毒,DNA,复制、转录调节和细胞转化的蛋白（分别编码为,E1,、,E2,、,E3,、,E4,、,E5,、,E6,、,E7,、,E8,等,8,个早期蛋白）,b.,晚期区域，编码病毒大（,L1,）和小（,L2,）衣壳蛋白,c.,长控制区域，又称上游调节区域（,upstream regulatory,region,URR,）,不包括任何,OPF,，有顺式调节元件，包括起始子和重要的转录增强子,HPV16,基因及其蛋白作用,基因,碱基数,碱基序列,基因表达产物的作用,E1,954,bp,859,2 813,控制病毒,DNA,的复制,E2,1127,bp,2 725,3 852,负调节,E6,、,E7,，负责细胞周期和凋亡的调控,E4,287,bp,3 332,3 619,捆绑于细胞角蛋白，破坏并结合细胞角蛋白网,E5,236,bp,3 863,4 099,活化生长因子受体,E6,494,bp,65,559,捆绑于,p53,蛋白，抑制,p53,而阻断细胞凋亡,E7,314,bp,544,858,捆绑于,Rb,蛋白，抑制,pRB,而使细胞周期失控,L1,1628,bp,5 526,7 154,构成较大病毒壳体,L2,1523,bp,4 133,5 656,构成较小病毒壳体,URR,813,bp,7 155,7 904/0,64,内含启动子，构成反馈调节环,HPV,诱发宫颈癌的分子机制,E6,和,E7,的主要细胞靶点分别是肿瘤抑制蛋白,p53,和,pRB,。高危型,HPV,游离基因通过非同源重组整合至宿主,DNA,后，主要的改变是原癌基因,E6,和,E7,的高水平稳定表达分别导致抑癌基因,p53,和,Rb,失活,小,DNA,肿瘤病毒（如多瘤病毒，腺病毒，癌症相关的,HPV,病毒）有一个普遍的机制：编码的致癌蛋白能够和关键的细胞调节蛋白相互作用。,病毒癌蛋白的主要癌变活性，各自与,pRB,形成复合物，并将相应的“口袋蛋白”失活，激活转录因子,E2F,家族控制的基因，导致细胞增殖。,HPV,诱发宫颈癌的分子机制,E6,与,p53,的相互作用是非直接的，受一个细胞蛋白,E6-,相关蛋白（,E6-associated protein,E6AP,）的调节，,E6AP,是一种泛素蛋白连接酶，当存在,E6,时，其直接参与,p53,泛素化，多泛素化的,p53,被识别后被,26S,蛋白酶体降解，破坏了,p53,转录激活和抑制特性，干扰野生型,p53,在,DNA,损伤应答中调节细胞周期阻滞的能力。,HPV,诱发宫颈癌的分子机制,分化的上皮细胞早已退出细胞周期,E7,与,pRB,结合，释放转录因子,E2F,家族，刺激细胞增殖并驱使细胞进入,S,期，重新激活细胞周期的,DNA,复制。,E7,与细胞周期蛋白依赖性激酶（,CDK,）的抑制因子相互作用,E7,蛋白在正常的人类细胞中引起基因组的不稳定性，诱导,G1/S,和有丝分裂细胞周期检验点缺陷，导致错误分离和非整倍体。,HPV,诱发宫颈癌的分子机制,分化的角质细胞是,HPV,感染的正常宿主,分化的角质层细胞早已退出细胞周期,G1,期是唯一可以接受外界传入的细胞增殖和抑制增殖信号的周期,HPV,诱发宫颈癌的分子机制,HPV16,病毒,E6,和,E7,基因片段是,HPV16,转化正常细胞的关键早期基因。,E2,基因存在于,HPV,病毒基因上，其表达的蛋白,E2,蛋白是一种特殊的,DNA,结合蛋白，它抑制病毒感染细胞从而抑制病毒周期，进一步抑制了病毒,DNA,的复制，促进了基因维护，使病毒转录降低。正常情况下，,E2,蛋白起到抑制,HPV16,的启动子的作用，减少了病毒基因,E6,或,E7,的转录，从而下调,E6,或,E7,的表达，促进了正常细胞的衰老死亡。,病毒基因整合的一个重要作用就是解除病毒,E6,、,E7,的表达控制。当,E2,基因断裂时，病毒蛋白,E2,表达下降，丧失了对,E6,，,E7,基因的抑制，病毒基因,E6,、,E7,过表达，,E6,，,E7,蛋白产生过多，刺激细胞，使其复制，随着复制的逐渐增多，宫颈病变持续加重，最终恶变。因此常将,E2,开放阅读框架的断裂作为,HPV,病毒整合到宫颈癌宿主细胞的重要标志。,共表达,E6,和,E7,就足以使原代人类细胞永生，最显著的是使原代人类角质化细胞永生，其为,HPV,病毒正常的宿主。与,HPV-16,和,HPV-18,中,E6/E7,蛋白具有使细胞永生的特性相反，低风险的病毒里,E6/E7,蛋白没有活性或活性很低。,Nucleotide Deficiency Promotes,Genomic Instability in Early,Stages of Cancer Development,SUMMARY,Chromosomal instability in early cancer stages is caused by stress on DNA replication.We studied the replication dynamics in cells in which a regulator of S phase entry and cell proliferation,the Rb-E2F pathway,is aberrantly activated.Aberrant activation of this pathway by HPV-16 E6/E7 or,cyclin,E,oncogenes,significantly decreased the cellular nucleotide levels in the newly transformed cells.Exogenously supplied nucleosides rescued the replication stress and DNA damage and dramatically decreased,oncogene,induced transformation.Increased transcription of nucleotide biosynthesis genes,mediated by expressing the transcription factor,c-myc,increased the nucleotide pool and also rescued the replication-induced DNA damage.Our results suggest a model for early,oncogenesis,in which uncoordinated activation of factors regulating cell proliferation leads to insufficient nucleotides that fail to support normal replication and genome stabilit