第十八章 平面色谱法(五版）

单击以编辑母版标题样式,单击以编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,第十八章 平面色谱法,1,第一节 平面色谱法的分类和原理,一、平面色谱法的分类,薄层色谱法：,纸色谱法,2,二、平面色谱法参数,定性参数：,1.比移值Rf：,原点到斑点中心的距离,Rf=,原点到溶剂前沿的距离,l,=,l0,l,l,0,3,1K大，Rf小,2薄层板一定，对于极性组分,展开剂极性大，Rf大容易洗脱,展开剂极性小，Rf小 不容易洗脱,3Rf范围：0 Rf 1,组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离,Rf=0.20.8常用,0.30.5最正确,讨论：,4,2.相比照移值Rr：,原点到样品斑点中心的距离,Rr=,原点到参考物质斑点中心的距离,目的：消除系统误差,5,第二节 薄层色谱法,、分类和原理,6,二、吸附薄层色谱法,(一)吸附剂,1.硅胶：-SiOH,特点：(1)吸附力与含水量有关。含水量高吸,附力下降。,(2)微酸性,(3)别离酸性或中性物质，如有机酸、氨,基酸、甾体,7,种类：,硅胶H：,不含粘合剂，制板时需另加粘含剂。,硅胶G：,硅胶和煅石膏混合而成。,硅胶HF,254,：不含粘结剂含剂,而含萤光剂，在 254 nm紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。,8,2.氧化铝：,氧化铝G、,氧化铝H,、,氧化铝HF,254,等,9,10,二展开剂,展开剂选择的一般原那么:相似相溶,11,吸附剂和展开剂的选择,被别离物质的极性 吸附剂吸附性能 展开剂极性,小 强 小,大 弱 大,12,一)薄层板的制备,三、薄层色谱法操作方法,吸附剂涂铺均匀,薄层板要求:表面光滑,厚度一致,动画,13,1.载板的准备：,要求：外表光滑、平整清洁。,2.软板的制备：,直接将吸附剂置于玻板上并使成为一均匀薄层。,14,3.粘合薄层板硬板的铺制,(1)粘合剂：煅石膏,羧甲基纤维素钠CMC-Na,(2)硬板的铺制方法：,薄层板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂硅胶或氧化铝，200250目均匀地涂在长条形玻璃板上厚度0.150.5mm。枯燥后即可使用。,15,4.活化:,硅胶板先晾干，再在 105 110C 活化 0.51 小时。,冷却即可使用也可保存于枯燥器中备用。,16,二点样,1.样品溶液的制备：,应尽量防止用水作溶剂，,一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机溶剂溶解样品。,2.点样：用微量注射器或玻璃毛细管吸取一定量试样点在原点上。试样点的直径一般应小于4mm。可并排点多个试样同时展开。,17,注意：,点样线距底边1.5,2cm,处。,斑点面积越小越好。,18,三展开,上行法：用于硬板,屡次展开：用于硬板,径向展开：纸色谱,下行法：纸色谱,展开剂：,由一种或多种溶剂按一定比例组成。,19,注意：,点样线不能浸入展开剂中；,展开时要恒温、恒湿度；,展开槽和薄板须用展开剂蒸气饱和后再展开。,目的：消除边缘效应,20,边缘效应：,同一物质在同一薄层板上出现中间局部的Rf值比边缘的Rf值小。,21,四定位方法,1.显色法：喷洒显色剂进行显色反响使组分显色而定位。,通用型显色剂：碘,硫酸溶液,荧光黄,专用显色剂：,茚三酮 氨基酸,酸碱指示剂 羧酸,22,2.荧光法：,吸附剂中混有荧光剂，展开后，在紫外灯下，色斑在荧光背景上呈现暗斑。,23,一定性分析方法,定性分析的依据：,在固定的色谱条件下，,相同物质的Rf值 相同。,四.定性与定量分析,24,物对照法:样品与物对照品在同一薄层上展开，比较组分与对照品的Rf值。,25,二定量分析,1.洗脱测定法：,斑点定位斑点取下洗脱适当方法测定。,2.直接测定法：,目视比较法:比较样品斑点与对照品斑点的,颜色深度或面积大小,薄层扫描法:测量斑点的面积大小。,26,六.薄层扫描法简介,以一定波长的光照射展开后的薄层色谱板，侧定其对光的吸受或所发出的荧光，进行定量分析的方法。,27,双波长薄层扫描仪光路示意图,28,波长的选那么：,测定波长：斑点中化合物的 max,参比波长：斑点中化合物无吸收的波长,目的：消除背景吸收,29,图19-2 薄层色谱扫描曲线,30,测光方式,a.,透射法：只适用于透明薄板。,b.,反射法：,31,32,外标两点法：,m,样,=,a,+,b,A,样,b,=(,m,1,-,m,2,)/(,A,1,-,A,2,),a,=,m,1,-,b,A,1,33,七、薄层色谱法的应用,合成药物反响速度或反响完成程度的监控；,药物的杂质检查；,天然药物有效成分的别离、鉴定、含量测定；,少量物质的制备、提纯等。,34,判断合成反响进行的程度：,例：判断普鲁卡因合成反响的终点。,色谱条件：,固定相：硅胶-CMC,展开剂：环己烷-苯-二乙胺(8:2:0.4),显色剂：碘化铋钾,35,1 2 3 4 5,1：盐酸普鲁卡因,2：肖基卡因,3：还原 2,h,取样,4：还原 3,h,取样,5：还原 4,h,取样,复原2h，原料点完全消失，反响达终点。,36,第三节 纸色谱法,一.根本原理,以纸作为载体的色谱法，属于分配色谱。,固定相：纸纤维上吸附的水分或其的它物质,流动相：有机溶剂,37,定性参数：,R,f,值：同薄层色谱,影响R,f,值的因素：,1.组分的性质：组分的极性强，R,f,值小。,2.色谱条件,展开剂的极性,展开剂,的,蒸气,展开时的温度,38,CHO CHO CHO,HC-OH OH-CH CH2,HO-CH OH-CH HC-OH,HC-OH HC-OH HC-OH,HC-OH HC-OH HC-OH,CH2OH CH3 CH3,极性：最强 其次 最小,R,f,：小 中 最大,39,二.实验方法,1.色谱滤纸的选那么：,质地均匀平整无折痕，有一定的机械 强度。,纸质的松紧适宜。,纸质纯，无明显的荧光斑点。,动画,40,2.点样方法：同薄层色谱法,3.展开剂：水饱和的正丁醇、正戊醇、,酚等。,41,5.定位方法：同薄层。,但不能用硫酸,6.定性方法：同薄层。,7.定量方法：同薄层。,42,