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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,遗传学实验二,果蝇唾腺染色体的制备与观察,遗传学实验二果蝇唾腺染色体的制备与观察,1,一、实验目的,1.练习,剖取,果蝇三龄幼虫唾腺的方法；,2.掌握制作果蝇唾腺染色体标本的技术；,3.观察果蝇唾腺染色体的形态特征。,一、实验目的1.练习剖取果蝇三龄幼虫唾腺的方法；,2,二、实验原理,双翅类昆虫(摇蚊、果蝇等)幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为,唾腺染色体,(salivary chromosome)；,这种染色体比普通染色体大得多，宽约5m，长约400m，相当于普通染色体的100-150倍，因而又称为,巨大染色体,；,唾腺染色体经过多次复制而并不分开，大约有1000-4000根染色体丝的拷贝，所以又称,多线染色体,(polytene chromosome)；,二、实验原理双翅类昆虫(摇蚊、果蝇等)幼虫期的唾腺细胞很大，,3,唾腺细胞中同源染色体互相靠拢呈现联会状态,体联会,；,各染色体的异染色质多的着丝粒部分互相靠拢形成,染色中心,(chromocenter)；,唾腺染色体经染色后，出现深浅不同、密疏各别的,横纹,(band)，其数目和位置是恒定的，代表着种的特征；,如果染色体有缺失、重复、倒位、易位等畸变，很容易在唾腺染色体上识别出来，因此唾腺染色体是,研究染色体畸变的好材料,。,唾腺细胞中同源染色体互相靠拢呈现联会状态体联会；,4,三、实验材料,黑腹果蝇的三龄幼虫,为了得到更好的染色体标本，需要在2025和营养良好的条件下饲养幼虫。选择行动迟缓、肥大，爬上管壁的三龄幼虫（化蛹之前）做标本最佳。,三龄幼虫照片,三、实验材料黑腹果蝇的三龄幼虫三龄幼虫照片,5,四、实验仪器与试剂,.器具：双筒体视解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸等。,.试剂：改良苯酚品红溶液、生理盐水、1N盐酸。,四、实验仪器与试剂,6,五、实验步骤,实验前知识准备：,果蝇三龄幼虫的唾腺位于幼虫的头部附近，可以看看显微照片中的位置,（点击图片观察放大图）,五、实验步骤实验前知识准备：（点击图片观察放大图）,7,实验开始,1.唾腺剖取,把载玻片置于双筒镜下。载玻片上滴加生理盐水1-2滴，取三龄幼虫放在其中，操作者两手各握一枚解剖针，左手的解剖针压住幼虫后端1/3处，固定幼虫。右手的解剖针按住幼虫头部，用力向右拉，把头部从身体拉开，唾腺随之而出，唾腺是一对透明的棒状腺体。用针剔除脂肪组织。,图示,实验开始1.唾腺剖取图示,8,解离：,在载玻片上除去幼虫其它部分，用吸水纸吸去生理盐水，然后在腺体上加 1-2滴1NHCl溶液，作用5-10 min。,冲洗：,用吸水纸吸去HCl，滴加蒸馏水于腺体上进行冲洗（两次）。,染色：,吸去蒸馏水，加1-2滴苯酚品红溶液，染色10min。,5.压片观察：用镊子加盖玻片，压片。镜检。,解离：,9,六、实验结果,1.先用低倍物镜观察，找到好的染色体图像后，放到视野中心，再用高倍镜观察。,2.黑腹果蝇染色体是2n=24=8,（,图一,）,，但由于体细胞配对，又因短小的第4染色体和X染色体的着丝粒在端部，所以染色体的一端在染色中心上，看上去，各自只形成一条线状和点状染色体。只有第2和第3染色体的着丝粒在中央，它们从染色中心以V字形向外伸出（2L，2R，3L，3R），因此共有6条,（,图二,）,。,六、实验结果1.先用低倍物镜观察，找到好的染色体图像后，放到,10,在显微镜下，短小的第4染色体有时不易观察到，所以最容易识别的是5条,（,图三,）,。,雄果蝇的Y染色体几乎包含在染色中心里，因为是异染色质，看起来染色可能深些。有经验的人可以发现雄果蝇的X染色体比雌果蝇X染色体要细些，因为雄性只有一条X染色体。,在显微镜下，短小的第4染色体有时不易观察到，所以最容易识别的,11,3.唾腺染色体上的横纹宽窄、深浅是一定的，但在果蝇的特定发育时期，它们会出现不连续的膨胀，这称为疏松区（puff），目前人们认为这是这部分基因被激活的标志。,3.唾腺染色体上的横纹宽窄、深浅是一定的，但在果蝇的特定发育,12,七、绘图,绘制你所观察到的清晰的果蝇唾腺染色体的图像。,七、绘图 绘制你所观察到的清晰的果蝇唾腺染色体,13,八、实验分析与讨论,1、根据实验的观察可以确定果蝇的染色体数目吗？,2、制备果蝇唾腺染色体需注意哪几个关键步骤？,3、利用果蝇唾腺染色体可以进行哪些遗传学研究？,八、实验分析与讨论1、根据实验的观察可以确定果蝇的染色体数目,14,九、参考文献,张贵友，普通遗传学实验指导，,北京：清华大学出版社，2003,卢龙斗、常重杰，遗传学实验技术，,合肥：中国科学技术大学出版社，1996,刘祖洞、江绍慧，遗传学实验，,北京：高等教育出版社，1987,九、参考文献张贵友，普通遗传学实验指导，,15,实验结束,实验结束,16,果蝇三龄幼虫,下一张,果蝇三龄幼虫下一张,17,果蝇三龄幼虫,下一张,果蝇三龄幼虫下一张,18,果蝇三龄幼虫,返 回,果蝇三龄幼虫返 回,19,果蝇唾腺位于头部附近,返 回,果蝇唾腺位于头部附近返 回,20,果蝇唾腺位于头部附近（放大图）,返 回,果蝇唾腺位于头部附近（放大图）返 回,21,1、两手各握一枚解剖针，左手解剖针压住幼虫后端1/3处，固定幼虫；右手的解剖针按住幼虫的头部用力向右拉，把头部从身体拉开，唾腺随之而出。,2、已剥离出的唾腺染,色体一对透明的棒状腺体。,下一张,1、两手各握一枚解剖针，左手解剖针压住幼虫后端1/3处，固定,22,返 回,得到完整的果蝇唾腺,返 回得到完整的果蝇唾腺,23,果蝇唾腺染色体显微照片（一）,下一张,果蝇唾腺染色体显微照片（一）下一张,24,果蝇唾腺染色体显微照片（二）,返 回,果蝇唾腺染色体显微照片（二）返 回,25,黑腹果蝇染色体核型,返 回,黑腹果蝇染色体核型返 回,26,2L,4,3L,2R,X,3R,黑腹果蝇唾腺染色体模式核型,返 回,2L43L2RX3R黑腹果蝇唾腺染色体模式核型返 回,27,
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