第五章黄酮类化合物课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,天然药物化学,天然药化教研室,第五章 黄酮类化合物,（Flavonoids）,1,天然药物化学 第五章 黄酮类化合物,第三节 提取与分离,一、提取与粗分,苷元,：,用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等回流提取,。,苷及极性大的苷元：,用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加热提取。,提取黄酮苷类成分时，应避免发生水解，可按一般,苷的提取方法先破坏酶的活性。,(1)溶剂萃取法（系统分离法）,-极性,(2)碱提取酸沉淀法,-酸性,(3)炭粉吸附法,2,第三节 提取与分离一、提取与粗分 苷元：用氯仿、乙醚、乙酸,第三节 提取与分离,一、提取与粗分,（一）溶剂萃取法,利用化合物的极性,药材,水或醇-水，加热提取,提取液,浓缩，加34倍量醇,（水提醇沉法）,醇水液,沉淀（水杂）,浓缩，回收醇，加水混悬,水混悬液,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,石油醚层,(,叶绿素胡萝卜素脂溶性成分,),氯仿层,(,黄酮苷元,),乙酸乙酯层,(,极性大苷元极性小的苷,),正丁醇层,(,黄酮苷,),水 层,(,多糖蛋白质,),（系统溶剂萃取）,3,第三节 提取与分离一、提取与粗分（一）溶剂萃取法 利用,在,60-70下,用浓盐酸调至,pH3-4,，静置,1hr,，抽滤,第三节 提取与分离,一、提取与粗分,（二）碱提取酸沉淀法,利用化合物的酸性,原理,：,黄酮 碱 成盐（溶于水）沉淀,加酸,槐花米粗粉,加水，搅拌下加入石灰乳至,pH8-9,，微沸,30min,，趁热抽滤,残渣,滤液,滤液,沉淀,（粗制芦丁）,芦丁,4,在60-70下用浓盐酸调至pH3-4，静置1hr，抽滤第三,第三节 提取与分离,一、提取与粗分,（二）碱提取酸沉淀法,利用化合物的酸性,碱,：,Ca(OH),2,水溶液,、,Na,2,CO,3,水溶液或稀,NaOH,溶液,（即,石灰乳或石灰水,）,使含酚羟基化合物成盐溶解,使含,COOH,的果胶、粘液质、蛋白质等杂质形成沉淀而除去,提取时，碱性不宜过强，以免破坏黄酮母核；,酸化时，酸性不宜过强，以免形成盐而溶解。,5,第三节 提取与分离一、提取与粗分（二）碱提取酸沉淀法,第三节 提取与分离,一、提取与粗分,（三）炭粉吸附法,主要用于黄酮苷的精制,药材甲醇提取物,分次加入活性炭，搅拌，静置，直至上清液无黄酮反应，过滤,吸苷炭末,滤液,依次用沸水、沸甲醇、,7%,苯酚/水、,15%酚,/醇溶液进行洗脱,沸水洗脱液,沸,甲醇洗脱液,7%,苯酚/水洗脱液,15%酚,/醇洗脱液,浓缩，加乙醚萃取,乙醚层（酚）,水层（黄酮苷）,6,第三节 提取与分离一、提取与粗分（三）炭粉吸附法 主要,第三节 提取与分离,二、分离,化合物的性质,极性,硅胶,酸性,pH梯度萃取、离子交换树脂,形成氢键的能力,聚酰胺,分子大小,葡聚糖凝胶,特殊结构,金属盐络合,（如邻二酚羟基）,7,第三节 提取与分离二、分离化合物的性质极性 硅胶酸性,第三节 提取与分离,二、分离,（一）柱色谱法,1、硅胶柱色谱,主要用于分离弱极性和中等极性的化合物，应用最为广泛。,吸附规律：极性大的物质易于被吸附,一般洗脱顺序：苷元单糖苷双糖苷多糖苷,8,第三节 提取与分离二、分离（一）柱色谱法1、硅胶柱色谱 主,第三节 提取与分离,二、分离,2、聚酰胺柱色谱,吸附原理：氢键缔合,洗脱顺序规律：（先后）,（1）苷元相同，三糖苷双糖苷单糖苷苷元,（2）,母核上羟基增加，洗脱速度减慢,（,3,）,羟基数目相同，有缔合羟基无缔合羟基,（4）不同类型黄酮化合物，异黄酮二氢黄酮醇,黄酮黄酮醇,（5）分子中芳香核、共轭双键多则易被吸附，故查耳,酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。,9,第三节 提取与分离二、分离2、聚酰胺柱色谱 吸附原理：氢键,用醇水系统时相当于反,相,色谱：,Rf ,符合前述规律,用氯仿甲醇系统,相当于正相色谱,：Rf ,“双重色谱”（了解）,如：A 苷元 B 单糖苷 C 二糖苷,10,用醇水系统时相当于反相色谱：Rf ,符合前述规,下列黄酮化合物：,（1）用聚酰胺柱色谱，含水甲醇梯度洗脱，,（2）用硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，,分别写出洗脱顺序,D,练习：,A,B,C,E,聚酰胺：,D,E,C,B,A,硅胶：,A,B,C,D,E,11,下列黄酮化合物：D练习：ABCE聚酰胺：D E C,第三节 提取与分离,二、分离,3、葡聚糖凝胶柱色谱,常用型号：,Sephadex LH-20,分离原理：,黄酮苷,分子筛,，,按分子量由大到小的顺序流出柱体。,黄酮苷元,吸附作用,，取决于游离酚羟基的数目（与位置无关），,苷元的羟基数越多,越难洗脱。,问题:黄酮苷与游离黄酮的洗脱顺序？,12,第三节 提取与分离二、分离3、葡聚糖凝胶柱色谱 常用型号：,第三节 提取与分离,二、分离,黄酮类化合物在,Sephadex LH-20,(,甲醇,),上的,V,e,/V,0,黄酮类化合物,取代图式,V,e,/V,0,芹菜素,5,7,4,-,三羟基,5.3,木樨草素,5,7,3,4,-,四羟基,6.3,槲皮素,3,5,7,3,4,-,五羟基,8.3,杨梅素,3,5,7,3,4,5,-,六羟基,9.2,山奈酚,-3-,半乳鼠李糖,-7-,鼠李糖苷,三糖苷,3.3,槲皮素,-3-,芸香糖苷,双糖苷,4.0,槲皮素,-3-,鼠李糖苷,单糖苷,4.9,苷元的羟基数越多，越难以洗脱；,苷的分子量越大，连接糖的数目越多，越容易洗脱。,13,第三节 提取与分离二、分离黄酮类化合物在Sephadex,第三节 提取与分离,二、分离,3、葡聚糖凝胶柱色谱,常用洗脱剂：,（,1,）醇或含水醇，如 甲醇、甲醇-水、乙醇 等。,（,2,）,其它溶剂：如 丙酮-水、氯仿-甲醇 等。,进行洗脱剂更换时，要注意不同溶剂对填料的溶胀度差别不能过大。,14,第三节 提取与分离二、分离3、葡聚糖凝胶柱色谱 常用洗脱剂,7,4,-二OH,7-或4,-OH,一般酚OH,5-OH,第三节 提取与分离,二、分离,（二）梯度pH萃取法,适于分离酸性强弱不同的黄酮苷元,酸性：,溶于,NaHCO,3,中,溶于,Na,2,CO,3,中,溶于,不同浓度,NaOH,中,15,7,4-二OH 7-或4-OH 一般酚O,第三节 提取与分离,二、分离,（二）梯度pH萃取法,样品乙醚液,5%NaHCO,3,碱液,（,7,4,-二羟基黄酮,）,乙醚液,5%Na,2,CO,3,碱液,（,7或4,-羟基黄酮,）,乙醚液,0.2%NaOH,碱液,（,一般,羟基黄酮,）,乙醚液,4%NaOH,碱液,（,仅含3-OH或5-OH黄酮,）,乙醚液,（脂杂）,16,第三节 提取与分离二、分离（二）梯度pH萃取法样品乙醚液5,第三节 提取与分离,二、分离,（三）根据分子中某些特定官能团进行分离,如：醋酸铅沉淀法,（目前已不使用）,具有邻二酚羟基，可被醋酸铅沉淀,不具有邻二酚羟基，可被碱式醋酸铅沉淀,17,第三节 提取与分离二、分离（三）根据分子中某些特定官能团进,