生化实验05凯氏定氮法课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Designed by XK Wang,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1,实验,06,植物组织中总氮含量的测定 （微量凯氏定氮法）,1实验06 植物组织中总氮含量的测定,2,氮素代谢在植物新陈代谢中占有主导地位。测定氮素含量对于研究植物的氮素吸收、运输和代谢规律，以及确定农产品品质、营养价值等均具有一定意义。,动植物组织中的氮包括蛋白氮和非蛋白氮两大类，主要以有机氮形式存在。由于蛋白质的含氮量相对稳定，测定出样品中总氮含量，再乘上一个系数即可得出样品中,粗蛋白,含量。如要准确测定蛋白质含量，则需利用三氯乙酸将样品中蛋白质沉淀出来，再分别测定蛋白氮和非蛋白氮。,组织中含氮量常用凯氏定氮法测定。,2 氮素代谢在植物新陈代谢中占有主导地位。测定氮素含,3,一、原理,在催化剂（如,CuSO,4,、,K,2,SO,4,、硒粉等）存在的条件下，将植物材料与浓硫酸共热，有机物氧化分解成,CO,2,和,H,2,O,，其中的氮转变为氨，并进一步生成,(NH,4,),2,SO,4,，这个过程称为消化。在消化后的样品中加入过量的,NaOH,，经强碱碱化使之分解释放出,NH,3,通过蒸馏借蒸汽将,NH,3,导入过量的硼酸溶液中生成四硼酸铵；再用标准盐酸滴定，直到硼酸溶液恢复到原来的,H,+,浓度，根据盐酸的用量即可计算出样品中总氮的含量。,3一、原理在催化剂（如CuSO4、K2SO4、硒粉等）存在的,4,一、原理,以甘氨酸为例的化学反应式：,消化：,CH,2,NH,2,COOH+3H,2,SO,4,2CO,2,+3SO,2,+4H,2,O+NH,3,2NH,3,+H,2,SO,4,(NH,4,),2,SO,4,蒸馏,:(,NH,4,),2,SO,4,+2NaOH,2H,2,O+Na,2,SO,4,+2NH,3,2NH,3,+,4H,3,BO,3,(NH,4,),2,B,4,O,7,+5H,2,O,滴定：,(NH,4,),2,B,4,O,7,+2HCl+5H,2,O 2NH,4,Cl+,4H,3,BO,3,4一、原理 以甘氨酸为例的化学反应式：,5,材料：,面粉,仪器设备：,消化管、分析天平、微量凯氏定氮蒸馏装置、容量瓶、三角瓶、滴定管、移液管、消煮炉等。,试剂：,1.,浓硫酸（,AR,级）；,2.,30%,（,W/V,）,NaOH,；,3.30%H,2,O,2,；,4.,0.01mol/L HCl,标准溶液,；,5.,2%,硼酸溶液,；,6.,混合催化剂；,7.,混合指示剂,；,8.,标准,(NH,4,),2,SO,4,溶液,二、材料、仪器设备及试剂,5材料：面粉仪器设备：消化管、分析天平、微量凯氏定氮蒸馏装,6,凯氏定氮蒸馏装置,全自动凯氏定氮仪,6凯氏定氮蒸馏装置全自动凯氏定氮仪,7,三,、实验步骤,1.,样品消化（已完成）,准确称取,0.1-0.2g,样品（依其含氮量而定）至消化管中，加入,5mL,浓硫酸和,0.3-0.5g,混合催化剂，浸泡数小时后在管口盖一小漏斗，放在消煮炉上加热消化。开始时温度可稍低，加热至管口不再产生泡沫时可逐渐升温，使消化管内液体达到微沸，直到消化液褐色消失并全部变为清澈透明为止。,在消化过程中，可分数次加入少许,H,2,O,2,以加速有机物氧化。如发现在消化管上部有黑色颗粒，应小心转动消化管，用消化液将其冲洗下来。整个过程一般需,3-4,小时，均应在通风橱中进行。,7三、实验步骤1.样品消化（已完成）,8,2.,定容：,消化液冷却后，沿管壁仔细加入,10mL,左右无氨蒸馏水以冲洗管壁,冷却后转入,100mL,容量瓶，再用少量无氨蒸馏水冲洗消化管数次，洗涤液一并转入容量瓶,冷却后用无氨蒸馏水定容至刻度，混匀后备用。,3.,蒸馏（,1,）仪器洗涤：,在蒸汽发生器中加入,2/3,体积蒸馏水,关闭汽水分离器阀和进样漏斗、并使管道联通,打开冷凝管,打开电炉加热蒸汽发生器，用热蒸汽通入仪器各部分清洗,15min,。,蒸汽,发生器,安全管,反应管,隔热套,冷凝管,收集瓶,导管,汽水分离器,进样漏斗,密封阀,82.定容：消化液冷却后，沿管壁仔细加入10mL,9,3.,蒸馏（,1,）仪器洗涤,冲洗完毕，从加样漏斗向蒸馏反应管加入无氨蒸馏水，清洗蒸馏反应管,打开汽水分离器阀、夹紧蒸汽发生器与蒸馏反应管之间的橡皮管,，由于冷却减压使得反应瓶中废液被虹吸进入隔热套中,打开隔热套下端的活塞阀排出废液。如此清洗,2-3,次。可将冷凝管下口浸入硼酸,-,指示剂混合液中检测清洗效果，当硼酸,-,指示剂混合液不变色时，表明蒸馏装置清洗干净。,93.蒸馏（1）仪器洗涤 冲洗完毕，从加样漏,10,3.,蒸馏（,2,）样品蒸馏,在三角瓶中装入,20mL,硼酸,-,指示剂混合液（此时应为紫红色，如变为蓝色，应倒出重装或清洗三角瓶）承接在冷凝管下端出口，将出口浸入在溶液中,打开隔热套下端的活塞,准确吸取,10mL,样品消化液通过加样漏斗加入蒸馏反应管中,通过漏斗加入,10mL NaOH,溶液,用少量无氨蒸馏水重复冲洗漏斗,3,次,塞紧漏斗塞，再在漏斗中加入少量蒸馏水密封漏斗,关闭隔热套下端活塞和汽水分离阀，打开蒸汽发生器与蒸馏反应管之间的橡皮管夹,，开始蒸馏,观察硼酸,-,指示剂混合液颜色变化，从颜色变绿起再蒸馏,3-5min,后，将三角瓶液面移离冷凝管下口约,1cm,继续蒸馏,1min,左右，结束蒸馏。,103.蒸馏（2）样品蒸馏 在三角瓶中装入,11,3.,蒸馏（,3,）空白蒸馏,用未加植物样品的消化液（其余试剂都加入并按同样方法进行消化）为空白液，按样品消化液的蒸馏方法进行蒸馏。,4.,样品及空白滴定,样品和空白蒸馏完毕后，分别用,0.01 mol/L,盐酸标准溶液滴定，直到硼酸,-,指示剂混合液变回淡紫红色即为滴定终点，记录滴定样品和空白蒸馏液的盐酸用量。（,滴定空白蒸馏液的盐酸用量一般为,0.2mL,）,113.蒸馏（3）空白蒸馏 用未加植物样品,12,W=g,（根据样品管编号在讲台上查表获得）；,V,T,=mL;Vs=mL;A=mL,；,B=,0.2,mL,四、数据记录,五、结果计算,样品总氮含量（,%,）,=,面粉,粗蛋白含量（,%,）,=,样品含氮量（,%,）,5.70,（,C,：滴定时标准盐酸溶液浓度（,0.0100mol/L,）,；,V,T,：消化液定容总体积（,mL,）；,W,：样品质量（,g,）；,V,s,：蒸馏时取样体积（,mL,）；,A,：滴定样品所用盐酸体积（,mL,）；,B,：滴定空白所用,盐酸体积（,0.2 mL,）,）,12W=g（根据样品管编号在讲台上查表获得）；四、,13,为了熟悉蒸馏和滴定的操作技术和检验实验的准确性及误差，常用已知浓度的标准硫酸铵溶液测试,3,次；,每次蒸馏前均需清洗蒸馏反应管；,在蒸馏过程中，,不能同时关闭汽水分离阀和蒸汽发生器与蒸馏反应管之间的橡皮管夹；,定氮仪各连接处不能漏气。,注意事项：,13为了熟悉蒸馏和滴定的操作技术和检验实验的准确性及误差，常,14,实验,07,抗坏血酸（,Vc,）含量的测定 （滴定法）,14实验07 抗坏血酸（Vc）含量的测定,15,一、原理,Vc,具有很强的还原性，染料,2,6-,二氯酚靛酚具有较强的氧化性，且在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。用草酸提取,Vc,，然后用蓝色的碱性,2,6-,二氯酚靛酚溶液对其进行滴定时，,Vc,可将,2,6-,二氯酚靛酚还原成无色。但当,Vc,被消耗完后，再滴入少许,2,6-,二氯酚靛酚就会使溶液呈现红色，借此可指示滴定终点。根据标准,2,6-,二氯酚靛酚的用量，可以计算出被测样品中,Vc,的含量。,抗坏血酸又称为维生素,c,（,Vc,），在一般水果、果蔬中含量较高。测定,Vc,含量，可作为衡量果蔬品质指标之一。,15一、原理Vc具有很强的还原性，染料2,6-二氯酚靛酚具有,16,材料：苞菜或其他果蔬仪器设备：蒸发皿、天平、容量瓶、研钵、碱式滴定管、漏斗、移液管等试剂：,1.2%,草酸；,2.,碱性,2,6-,二氯酚靛酚溶液（蓝色）；,3.0.1mg/mL,标准,Vc,溶液（,用草酸配制,）,二、材料、仪器设备及试剂,2,6-,二氯酚靛酚溶液,（蓝色）,16材料：苞菜或其他果蔬仪器设备：蒸发皿、天平、容量瓶、研,17,三,、实验步骤,1.,样品提取,准确称取,3g,左右样品放入研钵中，加入,2%,草酸,溶液约,5mL,研磨,匀浆液转入,50 mL,容量瓶，用,草酸,洗涤研钵,3,次，洗涤液一并转入容量瓶中,用,草酸,定容至刻度,过滤，收集滤液，备用。,2.,空白滴定,取,2%,草酸,10 mL,至蒸发皿中，用,2,6-,二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色，并在,30s,内不褪色为滴定终点，记录染料用量。,17三、实验步骤1.样品提取2.空白滴定,18,三,、实验步骤,4.,样品滴定,取滤液,10 mL,至蒸发皿中，用,2,6-,二氯酚靛酚溶液,滴定至粉红色，并在,30s,内不褪色为止。记录染料用量。,3.,染料标定,取,10 mL,标准,Vc,溶液至蒸发皿中，用,2,6-,二氯酚靛酚溶液,滴定至粉红色，并在,30s,内不褪色为滴定终点。计算,1mL,染料相当于,Vc,的,mg,数，即,滴定度（,A,）,。,18三、实验步骤4.样品滴定3.染料标定,19,W=g,；,V,1,=mL;V,0,=mL,；,V,T,=mL;V,s,=mL,四、数据记录,五、结果计算,样品,Vc,含量（,mg/100g,）,=,（,A,：滴定度（,mg/mL,）；,V,标,：染料标定所用染料体积（,mL,）；,V,1,：滴定样品所用染料的,mL,数；,V,0,：滴定空白所用染料的,mL,数；,V,T,：样品液定容总体积（,mL,）；,V,s,：滴定时取样品溶液的体积（,mL,）；,W,：样品质量（,g,）,滴定度（,mg/mL,）,A=,19W=g；V1=mL;V0=,生化实验05凯氏定氮法课件,11,醉翁亭记,1,反复朗读并背诵课文，培养文言语感。,2,结合注释疏通文义，了解文本内容，掌握文本写作思路。,3,把握文章的艺术特色，理解虚词在文中的作用。,4,体会作者的思想感情，理解作者的政治理想。一、导入新课范仲淹因参与改革被贬，于庆历六年写下岳阳楼记，寄托自己“先天下之忧而忧，后天下之乐而乐”的政治理想。实际上，这次改革，受到贬谪的除了范仲淹和滕子京之外，还有范仲淹改革的另一位支持者北宋大文学家、史学家欧阳修。他于庆历五年被贬谪到滁州，也就是今天的安徽省滁州市。也是在此期间，欧阳修在滁州留下了不逊于岳阳楼记的千古名篇醉翁亭记。接下来就让我们一起来学习这篇课文吧！【教学提示】结合前文教学，有利于学生把握本文写作背景，进而加深学生对作品含义的理解。二、教学新课目标导学一：认识作者，了解作品背景作者简介：欧阳修,(1007,1072),，字永叔，自号醉翁，晚年又号“六一居士”。吉州永丰,(,今属江西,),人，因吉州原属庐陵郡，因此他又以“庐陵欧阳修”自居。谥号文忠，世称欧阳文忠公。北宋政治家、文学家、史学家，与韩愈、柳宗元、王安石、苏洵、苏轼、苏辙、曾巩合称“唐宋八大家”。后人又将其与韩愈、柳宗元和苏轼合称“千古文章四大家”。关于“醉翁”与“六一居士”：初谪滁山，自号醉翁。既老而衰且病，将退休于颍水之上，则又更号六一居士。客有问曰：“六一何谓也？”居士曰：“吾家藏书一万卷，集录三代以来金石遗文一千卷，有琴一张，有棋一局，而常置酒一壶。”客曰：“是为五一尔，奈何？”居士曰：“以吾一翁，老于此五物之间，岂不为六一乎？”写作背景：宋仁宗庆历五年,(1045,年,),，参知政事范仲淹等人遭谗离职，欧阳修上书替他们分辩，被贬到滁州做了两年知州。到任以后，他内心抑郁，但还能发挥“宽简而不扰”的作风，取得了某些政绩。醉翁亭记就是在这个时期写就的。目标导学二：朗读文章，通文顺字,1,初读文章，结合工具书梳理文章字词