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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,一、课题背景,1,、尿素的利用,尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。,2,、细菌利用尿素的原因,土壤中的细菌分解尿素是因为它们,能合成脲酶,一、课题背景1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。,1.,从土壤中分离出,能够分解尿素的细菌,2.,统计,每克土壤,样品中究竟含有,多少这样的细菌,课题目的,1.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌课题目的,二,.,研究思路,.,筛选菌株,(,分离,出能够分解尿素的细菌）,.,统计菌落数目,.,设置对照（排除实验中非测试因素对结果 的影响）,二.研究思路.筛选菌株(分离出能够分解尿素的细菌）.统计,1,、实例：,启示：,寻找目的菌种时要根据它对生存环境的,要求，到相应的环境中去寻找。,原因：因为热泉温度,70,80,0,C,，淘汰了绝大多,数微生物，只有,Taq,细菌被筛选出来。,DNA,多聚酶链式反应,是一种在体外将,少量,DNA,大量复制,的技术，此项技术要求使用,耐高温（,93,0,C,）的,DNA,聚合酶。,.,筛选菌株,美国黄石国家公园的热泉,1、实例：启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的原因,要筛选分离出一种菌株，必须根据该菌的特点，,包括营养、生理、生长条件等，配制合适的培养基。,方法：,（,1,）抑制大多数微生物生长,（,2,）造就有利于该菌生长的环境,结果：,培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。,2,、实验室中微生物的筛选原理：,人为提供有利于,目的菌株,生长的条件,(,包括营养、温度、,pH,等,),，同时,抑制或阻止其他微生物,生长。,要筛选分离出一种菌株，必须根据该菌的特点，包括营养、,培养基添加,尿素,，只有能合成,脲酶,的微生物才能分解尿素，,以尿素作为氮源,。,缺乏,脲酶,的微生物由于不能分解尿素，,缺乏氮源而不能生长发育繁殖,，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。,4,、筛选分解尿素的微生物,培养基添加尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作,15.0g,琼脂,1.0g,尿素,10.0g,葡萄糖,0.2g,MgSO,4,7H,2,O,2.1g,NaH,2,PO,4,1.4g,KH,2,PO,4,5,、,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：,从物理性质看此培养基属于哪类？从用途上,属于哪类培养基？,固体培养基,在此培养基中哪些作为碳源、氮源？,碳源：,葡萄糖、尿素,氮源：,尿素,选择培养基,15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4,1,、显微镜直接计数：,.,统计菌落数目：,不能区分死菌与活菌；,个体小的细菌在显微镜下难以观察；,缺点,1、显微镜直接计数：.统计菌落数目：不能区分死菌与活菌；缺,2.,间接计数法（,活菌计数法）,（,1,）常用方法：稀释涂布平板法。,（,2,）原理：在稀释度足够高时，微生物在,固体培养基,上所形成的,一个菌落，来源于,样品稀释液中的,一个活菌,，即,1个菌落1个活菌,每克样品中的菌落数,(CV)M,其中，,C,：平均菌落数，,V,：涂布平板时所用的体积,(ml),，,M,：稀释倍数。,2.间接计数法（活菌计数法）每克样品中的菌落数(CV),注意事项,一般选择菌落数在,30300,的平板上进行计数。,同一稀释度加到,三个或三个以上,的平皿中，经涂布，培养计算出菌落,平均数,。,统计的菌落往往比活菌的,实际数目低,。,统计结果一般,用菌落数,而不是活菌数来表示,注意事项,例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为,10,6,的培养基中，得到以下两种统计结果。,1,、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为,230,。,2,、乙同学在该浓度下涂布了,A,、,B,、,C,三个平板，统计的菌落数分别为,21,、,212,、,256,，该同学以这三个平板上菌落数的平均值,163,作为统计结果。,你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？,?,甲：没有重复实验（至少涂布,3,个平板）,乙：,A,组结果误差过大，,表明实验不精确，需要重新实验。,例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数,主要目的,是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,.,设置对照：,控制单一变量原则,主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结,实例,：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌,落数目的实验时，,A,同学从对应的,10,6,倍稀释的培养基中筛选出大约,150,个菌,落，但是其他同学在同样的稀释度下,只选择出大约,50,个菌落。分析其原因。,原因：（,1,）土样不同，,（,2,）培养基污染,（,3,）操作失误，混入了其他的含氮物质,实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌原因：（1）土样不同，,三,.,实验的具体操作,.,土壤取样,从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土,3cm,左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。,取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。,.,制备培养基：,制备以尿素为唯一氮源的,选择培养基,。,三.实验的具体操作,应在火焰旁称取土壤,10g,。,在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行,三,样品的稀释,应在火焰旁称取土壤10g。三样品的稀释,.,取样涂布,分离不同的微生物采用不同的稀释度,稀释倍数,目的,细菌,10,4,、,10,5,、,10,6,保证获得菌落数在,30,300,之间、适于计数的平板,放线菌,10,3,、,10,4,、,10,5,真菌,10,2,、,10,3,、,10,4,原因：不同微生物在土壤中含量不同,实验时要对,培养皿作好标记,。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。,.取样涂布分离不同的微生物采用不同的稀释度稀释倍数目的细,.,微生物的培养与观察,在菌落计数时，每隔,24h,统计一次菌落数目。,选取菌落数目稳定时的记录作为结果，,以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。,培养不同微生物往往需要不同培养温度。,细菌：,30,37,培养,1,2d,放线菌：,25,28,培养,5,7d,霉菌：,25,28,的温度下培养,3,4d,。,.微生物的培养与观察在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数,关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。,关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地,关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。,关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地,关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。,关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地,四,.,课外延伸,在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果,PH,升高，,酚红指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。,测定饮水中含有,大肠杆菌,的方法是利用,伊红美蓝,培养基进行培养，大肠杆菌菌落变成深紫色，并有金属光泽。,四.课外延伸 测定饮水中含有大肠杆菌的方法是利用伊红美蓝,
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