资源描述
生态系统的结构,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,徐州京师未来实验学校 梁婧娴,土壤中分解尿素的细菌的分离与计数徐州京师未来实验学校 梁,1,学习目标,1,、,简述稀释涂布平板法分离微生物和进行微生物计数的实验原理,2,、,学会用稀释涂布平板法进行微生物数量测定的方法,学习目标1、简述稀释涂布平板法分离微生物和进行微生物计数,1,、了解尿素,尿素是一种由,C,、,H,、,O,、,N,组成的有机化合物，分子式为,CO(NH,2,),2,，它是动物体内蛋白质代谢的产物，在肝脏中合成后，随尿液排出。,1828,年，德国化学家维勒成功通过无机物的化学反应合成了尿素。此后，尿素走向工业化并广泛用于农业生产。,背景知识,1、了解尿素背景知识,尿素,不能直接,被农作物,吸收。,土壤中的某些细菌将尿素,分解成氨,之后才能被植物利用。,2,、尿素的利用,3,、细菌能分解尿素的原因,直接原因：能合成脲酶（分解尿素的酶,）,根本原因：具有合成脲酶相关的基因,CO,（,NH,2,）,2,+H,2,OCO,2,+2NH,3,脲酶,尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的某些细菌将尿素分解成氨之后,研究目的,1,、从土壤中分离出能够分解尿素的细菌。,2,、统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。,研究目的1、从土壤中分离出能够分解尿素的细菌。,筛选菌株原理,统计菌落数目,设置对照与重复,设计实验,研究思路,筛选菌株原理统计菌落数目设置对照与重复设计实验 研究思路,（一）筛选菌株,水生,耐热细菌,Taq,耐高温的,Taq,D,NA,聚合酶,选择培养基,在微生物学中，将,允许,特定种类的微生物生长，同时,抑制或阻止,其他种类微生物生长的培养基。,怎样筛选特定微生物呢,?,（一）筛选菌株水生耐热细菌Taq选择培养基怎样筛选特定微生物,思考：,在,此培养基中哪些作为碳源、氮源？,碳源：,葡萄,糖,氮源：,尿素,15.0g,琼脂,1.0g,尿素,10.0g,葡萄糖,0.2g,MgSO,4,7H,2,O,2.1g,NaH,2,PO,4,1.4g,KH,2,PO,4,加蒸馏水,定容,至,1000ml,思考：在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖,培,养基的,氮源为尿素,，只有能合成,脲酶,的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。,缺乏,脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。,培,养基选择分解尿素的微生物的原理？,请你来描述,培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿,1.,间接计数法（,活菌计数法,）,原,理：,在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。,每克样品中的菌落数,(CV)M,其中，,C,代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，,V,代表涂布平板时所用的稀释液的体积,(ml),，,M,代表稀释倍数。,2,、显微镜直接计,数,（二）,统,计菌落数,目,1.间接计数法（活菌计数法）每克样品中的菌落数(CV),设置对照的主要目的,是排除实验组中,非测试因,素,(,无关变量,),对,实验结果的影响，提高实验结果的可信度。,（三）设置,对,照与重复,同一稀释倍数设置三个重复，取其平均值，以减少误差，提高实验的准确性。,设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素(无关变量)对实验,1.,土,壤取样,2.,制,备培养,基,制备以,尿素,为唯一氮源的,选择培养基,。,（四）实验设计,1.土壤取样（四）实验设计,应在火焰旁称取土壤,10g,。,在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进,行。,（无菌环境下）,分离不同的微生物采用不同的稀释度,原因：不同微生物在土壤中含量不,同,3.,样,品的稀释,应在火焰旁称取土壤10g。分离不同的微生物采用不同的稀释,4.,取,样涂布,实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。,如果得到了,2,个或,2,个以上菌落数目在,30300,的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果,同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确,，需要重新实验。,4.取样涂布实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养,5.,微生物的培养与观察,培养不同微生物往往需要不同培养温度。,细菌：,30,37,培养,1,2d,。,放线菌：,25,28,培养,5,7d,。,霉菌：,25,28,的温度下培养,3,4d,。,5.微生物的培养与观察培养不同微生物往往需要不同培养温度。,1.,稀,释度是不是越高越好？,如果稀释度过高，菌落数少于,30,，计算结果偏低，误差大；如果稀释度过低，菌落数超过,300,，统计和计算结果都会有误,差。,2.,统计的菌落数与活菌实际数目相比偏大还是偏小？,思考：,1.稀释度是不是越高越好？如果稀释度过,为,增强实验说服力与准确性，设计实验时，需要,涂布至少三个平板,作为重复组。,分,析实验结果时，要考虑重复组,结果是否接近,，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验,。,为,防止培养时间不足导致菌落遗漏，在菌落计数时，每隔,24h,统计一次菌落数，选取菌落数稳定时的记录作为结果。,统,计的菌落数往往比活菌实际数,目,低。,因为当两个或多个细胞连在一起时，繁殖后形成的还是一个菌,落,注意事项,恰,当的稀释度,是成功统计菌落数目的关键,。,为了保证结果准确，一般选择,菌落数在,30,300,的平板上进行计数。,为增强实验说服力与准确性，设计实验时，需要涂布至少三个平,动动脑,利,用尿素作为唯一氮源的培养基分离出的微生物都是能分解尿素的微生物吗？,不,一定。因为有些微生物可以利,用其,他微生物,的代谢,产物进行生长繁殖。,拓展延伸,鉴定,在,以尿素作为唯一氮源的培养基中加入,酚红指示剂,，培养该细菌，如果,PH,升高，指示剂,变红,，可以初步鉴定该种菌能分解尿素。,动动脑 利用尿素作为唯一氮源的培养基分离出的微生物都是能分,课题小结,实验方案,土壤中尿素分解菌的分离与计数,分离筛选微生物的原理,有利于目的菌株生长,抑制或阻止其他微生物生长,人为,条件,微生物计数方法与原理,稀释涂布平板法,显微镜直接计数,对照设置与重复设置,实验设计,实验操作,结果与分析,课题小结实验方案分离筛选微生物的原理有利于目的菌株生长人为微,
展开阅读全文