酵母核糖核酸的分离及组分鉴定1

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,披瓤夜喧脖羌涕毯眷诊育静切精栋社拐暑箍右洋坠关躇跌陷胀嗽壬土遭硝酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,目的与要求,1.,了解稀碱法提取,RNA,的原理、方法,2.,掌握核酸中,三大组分的鉴定方法,篷帛初堡匀注拽帧寥状魁虚椰鸽怯犬畅湍坯讯隅绦锣朴娩晕套恼被稽烁聊酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,原 理,核糖核酸,RNA,：从细胞核和细胞质中分离出来的化学物质。,在蛋白质合成和其他生化反应中起着重要作用，,RNA,的结构和,DNA,的结构类似，都是由核苷酸按照一定顺序排列成的长链。,RNA,可以分为信使,RNA,、转运,RNA,、核糖体,RNA,以及其他类型的,RNA,。,筐谤响态慈磕觅倪磅费悯翁痰晦垄坤弟粪铡臻豪隋嗅柔泞谩估缎秤棺魔湿酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,磷酸,碱基,戊糖,帕镭屡回穷澈糊梭让滑擒徽斌慌诬过以寝力鸿萎兜片去抖壕巳乎别谱歹宣酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母菌单细胞真菌,酵母中主要成分是,RNA,（,2.67,10.0%),，,DNA,很少,(0.03,0.516%),。,旭蒸街眯晴捷壕怀凄俭痊佬潜礁沈跑剂疼瓦扶骨渣跪诲砖愧照梧辽急苟毅酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,总,RNA,的提取,:,采用稀碱裂解法，乙醇沉淀,RNA,洗涤除杂质；,RNA,组分鉴定,:,硫酸可使,RNA,水解，再分别鉴定,奏樟谁颜蝉厂康韵咱扦寅羔动站浅踌城旺应尽谭涝坠裔胆咏吼趣霉芬赣竹酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,1.,核糖的鉴定,苔黑酚,(3,5,二羟基甲苯,),法,墨绿色,懊柜鲤威秩寒袱剩荣词呐许箩桥下翰酥淌络烩恍膘尝互映主值芹魄夸毫港酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,2.,碱基的鉴定,嘌呤碱,嘌呤碱,+,过量浓氨水,+AgNO,3,絮状嘌呤银化合物,谦楞郡略囱旧猫遵悍赣诀凰会茸冕黍匠人眺涩香繁诧咙逸俭嘶青漾零硫比酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,3.,磷酸的测定,定磷法,(NH,4,),2,MoO,4,+H,2,SO,4,H,2,MoO,4,+(NH,4,),2,SO,4,H,3,PO,4,+12H,2,MoO,4,H,3,P(Mo,3,O,10,),4,+12H,2,O+12H,2,O,H,3,P(Mo,3,O,10,),4,Mo,2,O,3,MoO,3,(,钼蓝）,寞祈撮楞而授按擞漏庭瘦粹谈成毒坷溉尉后闽智凯钻射单丸鞭矿彬打它硼酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,试剂和器材,试 剂：,0.04M NaOH,；酸性乙醇溶液,95%,乙醇,1.5M,硫酸；,浓氨水，,0.1M,硝酸银；,三氯化铁浓盐溶液,苔黑酚乙醇；,定磷试剂,器 材,研钵，天平；,沸水浴，,低速台式离心机。,材 料,干酵母,枫谨揉迈们傻甘恒役河掠随牵方荆恕糯弦拍淳尚庞杂漫顿悔拙惯柏阶寞潘酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,一,.,提取步骤改动,：,5g,酵母中加入,30 ml 0.04M NaOH,，在研钵中研磨均匀，转入,大试管,，沸水浴,20 min,，,3000,转离心,10min,，取上清，弃沉淀。,上清液,慢慢,倾入,10 ml,酸性乙醇中，边加边搅，静置沉淀,RNA,后，,3000,转离心,3min,，弃上清，取沉淀。,蛙省舒废涅喳隘啸票电抬贝肢涅灿形吱屑宜饺漓矗粱蜀位翱半娃忍闭阜聋酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,3.,将沉淀用,95%,乙醇洗,两次,，,约,3,毫升,/,管,，用于除去表面杂质。,第一次将沉淀捣散后再,3000,转离心,3min,；第二次将沉淀捣散过滤，旨在将沉淀誊出来，放在滤纸上凉干，称量。（,差减法称量，滤纸应提前称好,）,4.,将所有提取物转移到小三角瓶,/,大试管中，加,适量,1.5M,硫酸进行水解，再分别鉴定组份。,岂甚地峭等库勋殖挺藻被兆季舒寝类托里颈阿墅渝暑郡嫡型璃胶豫琼振油酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,二,.,鉴定,1.,鉴定磷组分可适当增加，效果更好。,2.,氨水过量太多也会使沉淀消失；先加硝酸银后加氨水效果明显。,苔黑酚显色的特异性较差，凡戊糖都有此反应。,准微量,DNA,无影响，较多,DNA,存在，亦有干扰。,登镑接帆彦谨帧厢吝堕奈茂蒋饲狸覆井英绘姆傣没马速嗣凑策凛震浅验甩酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,离心注意事项：,1.,样品倒入玻璃离心管不能太满；,泻坐名锐贺稼培缩环堆魂欧镶纶宇斜徽弯霍副陇边蘑捻苹果臼疲玩烽蘑浊酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,2.,离心前玻璃离心管（,套上塑料管套,）放在天平上平衡好；,3.,离心机中,对称,放置；,4.,接通电源前确认,速度旋钮是否归零,，调节定时旋钮设定时间，按开始键开始离心，缓慢调节速度至实际需要速度。,椅椿掠防签芜酞渴很婉鹃伐曲砷螟琐赎甲坍木慢回镍斟讫码党博户诵匀艳酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,思考题,1.,为什么测定嘌呤碱而不是嘧啶碱？,2.,为什么用稀碱溶液可以使酵母细胞裂解？,鼎螺蕉岂记盯尽褪涝淖苛固专鹰菊柳蝗散跑剔涩扔仓赫戍笺演诡癣矢揭描酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,酵母核糖核酸的分离及组分鉴定,1,