脓汁和粪便标本中病原菌的检测-2课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,器材准备,浓汁标本1支，粪便标本1支；碘酒棉球1瓶，酒精棉球,1瓶，眼科镊子2把；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板5个。,自然界中的微生物,已经发现的微生物超过13万5千种，被认为非常危险的有600种，在人间传染的病原微生物380种。它们存在于地球的各个角落，从寒冷的极地到炎热的赤道，从4.2千米地层深处到85千米高空（芽孢）,均有它们的踪迹。,空气、水、土壤、人体的体表以及与外界相通的腔道，均有不同种类和数量的微生物存在。,存在于人体消化道的,细菌,超过800种，数量可达100万亿（10,14,），菌体重量11.5公斤。,医学微生物学实验综合性实验三 Comprehensive Experiment NO:3,Environmental flora and Normal Bacterial flora on Skin,空气的细菌学检查P,38,手指皮肤的细菌学检查P,41,实验方法(自然沉降法):根据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养基表面，培养以后，计数菌落形成单位（colony forming unit，CFU），可了解空气的污染情况。,实验步骤：每组1个营养琼脂平板，选择采样地点（实验室、卫生间或任选地点），,将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边，平板暴露于空气中15分钟，,然后平板倒扣盖上，作标记。37温箱培养24小时，观察结果。,CFU/m,3,50000N,AT86N(直径7cm平板）。,N：平板上的菌落数。,A：平板面积(平方厘米)。,T：采样时间(分钟)。,平板盖打开，盖朝下放在平板旁边，平板暴露15分钟。,空气的细菌学检查 暴露法（Exposure Method),组号,采样地点,采样时间(min),菌落形成单位(CFU),1,实验室,15,2,卫生间,15,3,门诊大厅,15,4,呼吸科走廊,15,5,呼吸科病房,15,6,呼吸科ICU,15,7,外科走廊,15,8,外科病房,15,9,外科ICU,15,10,外科治疗室,15,手指皮肤的细菌学检查P41,在日常生活中，手的接触范围广，使用频率高，受到污染的机会也最多。一只外观比较“干净”的手，可携带10万个细菌、200多种病毒。经手传播的疾病，包括肠道传染病、部分呼吸道传染病、皮肤传染病，以及一切可经手传播的疾病。,常住菌：,存在于皮肤表面、毛囊和皮脂腺。种类和数量比较恒定。附着在皮肤上比较牢固，用一般洗手方法，常不易去除。,暂住菌：,存在于皮肤表面经常暴露的部位。暂住菌是外来的非正常菌群，种类和数量不定。引起人类致病的通常是暂住菌。,常规的洗手方法,（甲和丙操作）,将手充分浸湿，涂抹肥皂或洗涤液。,反复搓揉双手，搓揉时间不少于 30秒。,用流水冲洗干净，整个洗手过程不少于1分钟。,能有效地去除大多数暂住菌。,1.掌心对掌心搓擦 2.手指交错掌心对手背搓擦 3.手指交错掌心对掌心搓擦,4.两手互握互搓指背 5.拇指在掌中转动搓擦 6.指尖在掌心中搓擦,脓汁和粪便标本中病原菌的检测,实验流程(6次课12学时）,培养基的制备,细菌的分离培养,细菌的纯培养,细菌的形态学检查,细菌的生化试验等,细菌的血清学试验、结果分析实验论文撰写,接种环烧灼灭菌。,取标本36ul。,晃动平板，当看到平板表面象镜面有反光的时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，以便控制划线。,接种环与平板呈3040度角，在平板表面上方，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条。,烧掉接种环上多余的标本。,转动平板，通过第一区57次，使接种环重新沾上少量细菌，,同样的方法划第二区。,转动平板，接种环通过第二区1次，划第三区。,转动平板，接种环通过第三区1次，划第四区。,划第五区。,每区划线不少于30条，整个平板划线不少于150条线。上下两条线重叠不影响分离结果。第一区划线不得超过1/5平板，,Flame loop,cool.,Pick up 1 loopful of specimens,under sterile precaution,.,Start streaking.One should make as many separate lines as possible without overlapping,.Streak at least 30 lines each area.,Flame loop,cool.,Turn plate,and continue streaking,Turn plate,continue streaking,Turn plate,continue streaking,Turn plate,continue streaking,Streak at least 150 lines each plate,flame loop.,第一区占1/2平板，,划线稀疏，,没有典型单菌落。,第一区划线正确。第二区?第三,五区？,划线分离失败！,划线分离成功,平板上有许多典型单菌落可供挑选。,线段划得越密集，细菌分布前区密集后区稀疏，获得典型菌落越多,。,小组实验分工,甲脓汁标本营养琼脂平板(nutrient agar plate),乙脓汁标本营养琼脂平板(nutrient agar plate）,丙粪便标本伊红美蓝平板,(eosin methylene blue plate）,丁、戊粪便标本伊红美蓝平板(EMB plate）,甲 乙,4,丙 丁,甲 乙,3,丙 丁,甲 乙,2,丙 丁,甲 乙,1,丙 丁,甲 乙,5,丙 丁,甲 乙,8,丙 丁,甲 乙,7,丙 丁,甲 乙,6,丙 丁,甲 乙,10,丙 丁,甲 乙,9,丙 丁,讲,台,左,右,接种环烧灼灭菌 Flame Loop,使用,前,，直接在酒精灯上烧灼灭菌，把环和金属丝,烧红即可,，,接种环,35秒钟冷却。,使用,后,，先在火焰,背面,将,把环上标本烤干，再烧灼灭菌，以免标本汽化，爆烈四溅，污染环境。,金属杆快速通过火焰2,3次，杀灭表面微生物。,酒精灯无菌操作区,外焰:又称氧化焰,火焰呈淡紫色,温度较高。,无菌操作区:火焰周围1020cm范围内。,无菌取材基本步骤,Transfer of Bacteria:Aseptic Technique,在火焰旁边，左手斜持标本管下端，右手小指夹住试管棉塞上端，缓慢拔出棉塞并,夹持之,（,棉塞下端,不得接触到管口外任何物体,）,管口迅速通过火焰3次,取标本,管口通过火焰三次，塞棉塞。,Inoculating procedures,接种环和平板的握持方法,How to hold agar plate and inoculation loop,三级生物安全防护,思考题,为何取链球菌作为空气的卫生指标之一?,为什么金黄色葡萄球菌是医院内感染常见的重要病原菌?,为什么接种环使用前后必须烧灼灭菌？忽略了有什么危害?,做细菌培养时，平板为什么要倒置?,培养细菌的常用方法有哪些?,从临床标本中分离病原菌，应注意哪些事项?,实验内容,空气的细菌学检查P,38,营养琼脂平板(1组1个）,手指皮肤的细菌学检查P,41,营养琼脂平板(2人1个 划分8格,）,平板划线分离法P,8,甲脓汁标本营养琼脂平板,乙脓汁标本营养琼脂平板,丙粪便标本伊红美蓝平板,丁粪便标本伊红美蓝平板,实验器材 整齐有序,微生物学器材柜-2（边台东侧中段）,酒精棉球,碘酒棉球,镊子,电炉、石棉网,手套,消毒器材收拾入柜 依次摆整齐,