实验四、细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别2

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验四,细菌的生理生化试验及肠杆菌科的鉴别、理化因素及生物因素对微生物的影响,一、目的要求,掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理、方法、结果判定以及在诊断中的运用,熟悉大肠杆菌和沙门菌主要培养特性和常 规微生物学诊断方法,通过本实验加深理化因素及生物因素对微生物的影响的概念,二、实验材料,菌种：大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巴氏杆菌,培养基：葡萄糖高层琼脂、普通琼脂斜面、水琼脂斜面、氧化,-,发酵培养基（小生化管）、普通平板、麦康凯平板、淀粉平板、三糖铁斜面、各类生化反应管等,器械：砂轮、试管架、接种环、接种针、灭菌吸管、灭菌刻度移液管、灭菌棉签、胶头、灭菌液体石蜡、酒精灯、废报纸等,三、实验内容,1,、细菌对,空气（氧气）,的需要,菌种：大肠杆菌、枯草杆菌,方法：用吸管将两种菌各加入两支己溶化的葡萄糖深层琼脂管中，,培养基：葡萄糖深层琼脂（己溶化）,2,、细菌对,营养,的要求,菌种：大肠杆菌、巴氏杆菌,培养基：斜面（水琼脂、普通琼脂）,方法：划线的方法,（一）细菌的生理生化试验,3,、细菌,氧化型与发酵型（,O/F,）,的测定,菌种：大肠杆菌、枯草杆菌,培养基：加有葡萄糖和指示剂（,1%,溴麝香草酚蓝）的微型发酵管,方法：用接种针将两种菌各加入两支发酵管中，从不同菌里各取一管加入灭菌的液体石蜡，,37,正置培养。,产酸（,浅绿色,黄色,）,4,、,淀粉水解,试验,菌种：大肠杆菌、枯草杆菌,培养基：普通营养琼脂平板,方法：一块平板上，一边划大肠杆菌，一边划枯草杆菌，第二天长出菌后，在菌落上滴加碘液。,5,、,触酶,（过氧化氢酶）试验,菌种：大肠杆菌、枯草杆菌,培养基：普通营养琼脂平板,方法：一块平板上，一边划大肠杆菌，一边划枯草杆菌，第二天长出菌后，在菌落上滴加,H,2,O,2,（,二）肠杆菌科的鉴别（大肠杆菌,&,沙门菌）,肠杆菌科的生化试验,1,、麦康凯琼脂平板,（乳糖、胆盐、指示剂：,1%,中性红）,方法：划线，分解乳糖 菌落变,红,2,、三糖铁琼脂斜面,（葡萄糖、蔗糖、乳糖、硫酸亚铁铵、指示剂：,0.5%,酚红）,方法：先划斜面再穿刺,3,、糖分解试验,微量发酵管：葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖,方法：用接种针挑取菌种后接入发酵管内，用报纸包好口，置培养箱培养。发酵糖产酸：指示剂溴甲酚蓝由,紫色,黄色,4,、吲哚（靛基质）试验,培养基：蛋白胨水微量管,原理：细菌分解蛋白质中的色氨酸产生吲哚，吲哚与对位二甲基氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而成,红色,。,方法：接种针接种，培养,12-24 h,后，加入试剂显色,5,、甲基红（,MR,）试验,培养基：葡萄糖蛋白胨水,原理：甲基红试验：分解葡萄糖产生丙酮酸，进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸等使,pH,下降，含甲基红指示剂的培养基变,红,6,、,VP,试验：葡萄糖蛋白胨水,原理：某些菌发酵葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经多脱羧、氧化等反应生成二乙酰，其与蛋白胨中精氨酸胍基作用产生粉,红色,化合物,7,、枸橼酸盐（柠檬酸盐）利用试验,培养基：,Simmon,氏枸橼酸钠微量发酵管,原理：细菌若能以枸橼酸钠为唯一碳源，磷酸铵为唯一氮源，则可利用枸橼酸钠产生碳酸盐，与利用铵盐产生的,NH,3,反应，形成,NH,4,OH,，使培养基变碱，,pH,升高，指示剂溴麝香草芬蓝由,草绿色,变为,深蓝色,。,8,、脲酶,培养基：尿素微量发酵管（指示剂：酚红）,原理：细菌分解尿素产生,2,分子,NH,4,，使,pH,升高，指示剂变,红,。,9,、硫化氢试验,培养基：营养琼脂中含,FeSO,4,的,微量反应管,原理：凡细菌能分解含硫氨基酸，产生,H,2,S,者，其所产生的,H,2,S,会使培养基中的醋酸铅或,FeCl,3,形成,黑色,的硫化铅或硫化铁。,10,、运动力试验,培养基：半固体琼脂微量反应管,方法：穿刺接种,（三）理化因素及生物因素对微生物的影响,1.,紫外线与杀菌试验,菌种：大肠杆菌、枯草杆菌,方法：取营养琼脂平板,2,个，一个涂大肠杆菌，另一个涂枯草杆菌。在其涂有细菌的表面贴上以剪出不同图案的硬纸片，然后在紫外灯下距离,30,厘米照射,20,分钟，照射完毕将硬纸片取走盖回原来平皿盖，于,37,培养,24,小时观察结果。,2.,药敏试验：圆纸片扩散法,菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌,培养基：营养琼脂平板,方法：,3.,消毒剂抑菌和杀菌试验,菌种：大肠杆菌、枯草杆菌,方法：与药敏试验方法是一样的（纸片扩散法）,将以上接好细菌的培养基置,37,培养箱培养。,经,1824h,培养观察细菌生长情况。有一些生化管,则,需要加试剂后观察其颜色变化，做好实验结果记录并记录,抑菌圈大小,。,肠杆菌科细菌的鉴别,三糖铁琼脂斜面,斜面,/,底层,产气；,H,2,S,糖发酵,葡萄糖,乳糖,蔗糖,甘露醇,MR,VP,靛基质,枸橼酸盐,脲酶,麦康凯,H,2,S,运动力,试验,结果,菌种,大肠杆菌,沙门菌,K /A,+(-);-,A=,产酸（黄）,K=,产碱（红）,+-+,