微生物实验二三培养基制作及灭菌

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验二、三 培养基制作及灭菌,实验二、三 培养基配置和灭菌、无菌检测,一、实验目的,1.,掌握微生物学实验中常用的玻璃器皿的包扎方法与棉塞的制作,2.,了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤,3.,了解加压蒸汽灭菌的原理，并掌握其具体操作方法,二、实验原理,（,1,）微生物学常用的玻璃仪器,培养皿，试管，三角瓶（锥形瓶）、吸量管，（大小）,（,2,）培养基的分类,按物理状态分、按组成成分分、按用途分,配置培养基时注意的事项：,pH,（,不能回调,），,T,（,3,）培养基的灭菌,培养基配置好后应立即灭菌，且不能再次灭菌,化学灭菌,(,甲醛，洁尔灭、升汞），,物理灭菌（干热，紫外线等、过滤除菌）、,湿热灭菌,干燥箱,细菌过滤器,用于滤过除菌的各式滤器,手提式灭菌锅,坐式灭菌锅,高压蒸汽灭菌器,卧式灭菌锅,三、实验器材,1.,药品及试剂：,1,牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）,牛肉膏,3g,、蛋白胨,5g,、氯化钠,10g,、琼脂,1520g,、,pH7.07.2,水,1000mL 121,灭菌,20min,。,2,高氏（,Gause,）,1,号培养基（培养放线菌用）,可溶性淀粉,20g,、硝酸钾,1g,、氯化钠,0.5g,、磷酸氢二钾,0.5g,硫酸镁,0.5g,、硫酸亚铁,0.01g,、琼脂,20g,、水,1000mL,、,pH7.2-7.4,配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至,1000mL,。,121,灭菌,20min,。,2.,仪器及其它,试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、,pH,试纸,(5.5-9.0),、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、干燥箱、培养皿、涂布棒、吸管（,1ml,）、玻璃珠,四、实验方法和步骤,微生物常用玻璃仪器的包扎和棉塞的制作,a.,培养皿的包装每,10,套一包，用旧报纸包扎（或放在特制铁皮圆筒里，加盖扣严）。,b.,吸管的包装首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用长纸条包扎、打结。,c.,玻璃涂布棒的包装方法同吸管的包装。,d.,三角瓶的包扎,2.,培养基的制备与分装,（,1,）三角瓶固体培养基的制备,a.,称量按培养基配方比例依次准确地称取药品，放入在瓷缸内。,（注意药品称量顺序）,b.,加入定量的琼脂、水，煮沸，溶解,c.,完全溶解后，补充水分，调,pH,值（,不要调过头,）,d.,分装置三角瓶中，,注意装液量,e.,加棉塞，包扎，,高压蒸汽灭菌,121,0.10Mpa,20min,（,2,）试管斜面固体培养基的制备,a.,称量按培养基配方比例依次准确地称取药品，放入在瓷缸内。,（注意药品称量顺序）,b.,加入定量的琼脂、水，煮沸，溶解,c.,完全溶解后，补充水分，调,pH,值,d.,在培养基未融化之前，用,10mL,移液管快速加入试管内，每根,7-8mL,，塞上棉塞，包扎，灭菌，灭菌完后摆斜面。,3.,培养基、无菌水、器皿的灭菌,a.,将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内，湿热灭菌。,b.,灭菌完毕，将试管培养基搁成斜面。,c.,器皿放入干热灭菌箱内，加热灭菌。,思考题,1.,培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养菌是无菌的？,2.,加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？,3.,干热灭菌应该注意哪些事项？,4.,管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？为什么？,实验报告注意事项,1.,上课前必须写好预习实验报告,2.,实验报告内容必须填写完整，如 实验课程，实验时间，指导教师等,3.,本次实验结束后必须记录好原始记录，由老师签完名后方可离开,4.,值日生打扫卫生,5.,实验成绩占期末总评成绩的,20%,