分解纤维素的微生物的分离 演示文稿

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,分解纤维素的微生物的分离,1,、纤维素,2,、纤维素酶的组成及作用？,（,3,）分布：,_,是自然界中纤维素含量最高的天然产物。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。,（,1,）组成：纤维素酶是一种,_,，一般认为它至少包括三种组分，即,_,、,_,和,_,。,一、纤维素和纤维素酶,（,1,）基本组成单位,_,。,（,2,）含量：是地球上含量最丰富的,_,类物质。,（,2,）作用：,纤维素（）纤维二糖（）葡萄糖。,（,3,）实验验证,试管,滤纸条,醋酸醋酸钠,缓冲液,PH=4.8,纤维素酶,（,7080,）,U/,mL,条件,结果,1,1cm,6cm,10mL,（）,将两支试管固定在,50mL,锥形瓶中，在摇床上以,140r/min,的转速振荡反应,1h,（）,2,1cm,6cm,（）,（）,1mL,完全,分解,11mL,基本,无变化,二、纤维素分解菌的筛选,1,、纤维素分解菌的筛选方法,刚果红染色法,：这种方法能够通过,颜色反应,直接对微生物进行筛选。常用的有两种，一种是先,培养微生物,，再加入,刚果红,进行颜色反应，另一种是在,倒平板,时就加入,刚果红,。,思考：,这两种方法各有哪些优点与不足,染色法,优 点,缺 点,方法一,颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用,操作繁琐,刚果红会使菌落之间发生混杂,方法二,操作简便,不存在菌落混杂问题,产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。,2,、纤维素分解菌的筛选方法的原理,刚果红是一种染料，它可以与,纤维素,形成,红色,复合物，但并不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后刚果红,纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以,纤维素分解菌,为中心的,透明圈,。这样我们可以通过,是否产生透明圈,来筛选纤维素分解菌,练一练：,1,、下列关于纤维素酶的说法，错误的是,A,、,纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种,B,、,纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖,C,、,纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁,D,、,葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖,2,、利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是,A,、,刚果红能与纤维素形成红色复合物,B,、,刚果红能与纤维二糖形成红色复合物,C,、,刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物,D,、,若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌,三、实验操作,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,挑选产生透明圈的菌落,实验方案流程图,土壤取样,1,、,取样的环境是怎样的？,生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土壤中获得目的微生物的几率要高于普通环境。,2,、,为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？,选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。,3,、将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？,人工设置适宜环境，使纤维素分解菌相对聚集。将纸埋于深约,10cm,的腐殖土壤中。,选择培养,1,、,实验流程中“选择培养”的培养基类型是什么？该培养的目的是什么？,液体选择培养基。其目的是增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物,2,、制备选择培养基,参照课本,29,页旁栏中的比例配置，回答下列问题,a,、,旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？,b,、,这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具 有，是如何进行选择的？,c,、,你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用,是液体培养基，原因是配方中无凝固剂,有选择作用，本配方中的碳源是纤维素，所以能分解纤维素的 微生物可以大量繁殖。,用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,3,、操作方法：,将土样加入装有,30ml,选择培养基,的锥形瓶中，将锥形瓶固定,在摇床上,，在一定温度下震荡培养,1,2,天，,直至培养液,变浑浊,。也可重复选择培养。（具体看课本,29,页）,思考：,为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？,在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用,梯度稀释,按照课题,1,的稀释操作方法，将选择培养后的菌种进行等比稀释，稀释最大倍数到,10,6,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,1,、制备培养基,:,参照旁栏中的比例,2,、涂布平板：将稀释度为,10,4,10,6,的菌悬液各取,0.1ml,涂布在培养基上，,30,倒置培养。,挑选产生透明圈的菌落,参照课本,刚果红染色法,，挑选产生透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。,思考：,本实验流程与尿素分解菌的分离实验流程有哪些异同？,尿素分解菌的分离实验流程是将土样制成的菌悬液直接涂布在选择培养基上；本课题通过选择培养使细菌增殖后，再涂布在鉴别培养基上。其它操作基本基本共同。,练一练,1,、在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合下列哪一生物学观点？（）,A,、,生物结构与功能相适应的观点,B,、,生物结构与功能整体性观点,C,、,生物与环境相适应的观点,D,、,生物发展进化的观点,2,、从土壤中分离获得某种微生物的步骤是（）,土壤取样 梯度稀释 选择培养 菌悬液涂布平板 挑选出单个菌落,A,、,B,、,C,、,D,、,3,、有关选择培养正确的叙述是（）,A,、,可以增加纤维素分解菌的浓度,B,、,可以减少纤维素分解菌的浓度,C,、,所用培养基是固体培养基,D,、,所用培养基是平板培养基,C,B,A,四、结果分析与评价,（,一）培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落,（二）分离的结果是否一致,设置对照，若对照的培养基在培养过程中无菌落生长则说明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。,如果不同，分析产生不同结果的原因。,五、课题延伸,本课题对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选，但是这只是分离纯化的第一步。为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行,发酵产纤维素酶,的实验，纤维素酶的发酵方法有,液体,发酵和,固体,发酵。纤维素酶的测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的,葡萄糖,进行定量的测定。,