梅毒的实验室检测与技术规范

梅毒的实验室检查与技术规范,朱穗兰,2013年3月2日,主要内容,梅毒,概述,梅毒血清学检测方法,梅毒检测技术规范,梅毒概述,（一）,性接触是主要的传染途径,未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性,随着病期的延长，传染性越来越小,到感染后2年，通过性接触一般无传染性,母 婴 传 播,在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者，虽已无性传播（病期2年），但妊娠时仍可传染给胎儿,病期越长，传染性越小;,梅毒概述,（二）,一期梅毒,硬下疳和(或),腹股沟淋巴结肿大,二期梅毒,可有一期梅毒史，病期在2年以内有多形性皮疹、扁平湿疣等,三期（晚期）梅毒,可有一期或二期梅毒史，病期在2,年以上,皮肤黏膜损害等，包括神经梅毒、心血管梅毒,隐性（潜伏）梅毒,早期：病期在2年以内；晚期：病期在2年以上。无任何梅毒性的症状和体征,胎传（先天）梅毒,早期：在2岁前发生；晚期：在2,岁以后发病。胎传隐性梅毒：无临床表现,梅毒概述,（三）,疑似病例、确证病例诊断依据：,病史,症状,实验室检查,梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义,梅毒实验室检测技术,病原学检测,血清学检测,梅毒血清学检测方法,梅毒血清学检测分类,(1) 非梅毒螺旋体抗原血清学试验,（非特异性梅毒抗体）,(2) 梅毒螺旋体抗原血清学试验,（特异性梅毒抗体）两类方法。,为什么梅毒实验室诊断需要两类血清学检测方法？,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,原理,人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体,在3周-4周产生,类脂质抗体（反应素）。主要是,IgM和IgG混合抗体。,抗体的作用,无保护作用，治疗监测。,未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。,临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测法,？,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,所有非梅毒螺旋体抗原血清试验的抗原基本成分都是一样,方法包括：,（1）快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR),（2）,甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）,（,3）性病研究实验室试验 (VDRL)等。,基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇,抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见,上述方法的敏感性和特异性都基本相似,试验特点,原理和成,分,分与试验,相,相同,血清不需,要,要灭活,不需要显,微,微镜观测,结,结果,可,作,作,定,定,量,量,试,试,验,验,有,现,现,成,成,的,的,试,试,剂,剂,盒,盒,携,携,带,带,方,方,便,便,操,作,作,简,简,单,单,价,格,格,便,便,宜,宜,操,作,作,要,要,点,点,仪,器,器,：,：水,平,平,旋,旋,转,转,仪,仪,。,。,定,性,性,实,实,验,验,加,样,样,：,：,吸,吸,取,取,5,0ul,血,血,清,清,(,浆,),放,在,在,卡,卡,片,片,圈,圈,中,中,，,，,并,并,均,均,匀,匀,地,地,涂,涂,布,布,在,在,整,整,个,个,圈,圈,内,内,加,抗,抗,原,原,：,：,将,将,抗,抗,原,原,轻,轻,轻,轻,摇,摇,匀,匀,，,，,用,用,9,号,针,针,头,头,加,加,1,滴,抗,抗,原,原,反,应,应,：,：,将,将,卡,卡,片,片,置,置,水,水,平,平,旋,旋,转,转,仪,仪,旋,旋,转,转,8,分,钟,钟,，,，,立,立,即,即,在,在,亮,亮,光,光,下,下,观,观,察,察,结,结,果,果,3.,定,量,量,试,试,验,验,稀,释,释,夜,夜,准,准,备,备,：,：,在,在,圈,圈,内,内,加,加,入,入,50uL,生,理,理,盐,盐,水,水,（,根,根,据,据,需,需,要,要,确,确,定,定,稀,稀,释,释,度,度,）,）,，,，,勿,勿,将,将,盐,盐,水,水,涂,涂,开,开,。,。,加,样,样,：,：,吸,吸,取,取,50uL,血,清,清,（,（,浆,浆,）,）,与,与,各,各,圈,圈,中,中,盐,盐,水,作,作,系,系,列,列,稀,稀,释,释,，,，,并,并,涂,涂,布,布,整,整,个,个,圈,圈,内,内,。,。,下,同,同,定,定,性,性,试,试,验,验,。,。,非,梅,梅,毒,毒,螺,螺,旋,旋,体,体,抗,抗,原,原,血,血,清,清,学,学,试,试,验,验,结,结,果,果,判,判,断,断,RPR,TRUST,非,梅,梅,毒,毒,螺,螺,旋,旋,体,体,抗,抗,原,原,血,血,清,清,学,学,试,试,验,验,临,临,床,床,意,意,义,义,早,期,期,梅,梅,毒,毒,硬,硬,下,下,疳,疳,出,出,现,现1,周,周-2,周,周,后,后,，,，,血,血,清,清,可,可,呈,呈,阳,阳,性,性,。,。,经,治,治,疗,疗,后,后,血,血,清,清,滴,滴,度,度,可,可,下,下,降,降,并,并,转,阴,性,性,，,，,故,故,可,可,作,作,为,为,疗,疗,效,效,观,观,察,察,、,、,判,判,愈,愈,、,、,复,复,发,发,或,或,再,再,感,感,染,染,的,的,指,指,征,征,。,。,为什么要做,定,定量检测？,非梅毒螺旋,体,体抗原血清,学,学试验临床,意,意义,一期梅毒1,年,年后转为阴,性,性,二期梅毒2,年,年后转为阴,性,性。,晚期梅毒,治,治疗后血,清,清滴度下降,缓,缓慢，2年,后,后约50%,病,病人血清反,应,应仍为阳性,。,。,TRUST,结,结果解释示,意,意图,假阳性问题,假阳性,：非梅毒患,者,者的血清反,应,应呈阳性,技术性假阳,性,性,由于标本的,保,保存不当（,如,如细胞污染,或,或溶血）、,试,试剂质量差,或,或过期、或,实,实验室操作,错,错误所造成,。,。,生物学假阳,性,性,是由于患者,有,有其他疾病,或,或生理状态,发,发生变化，,使,使梅毒血清,试,试验出现阳,性,性,某些疾病：,结,结核、疟疾,、,、肝病、红,斑,斑狼疮、流,感,感、肺炎、,类,类风湿性关,节,节炎、风湿,性,性心脏病、,风,风疹、系统,性,性硬化症等,，,，疾病发展,过,过程中释放,心,心磷脂到血,液,液中,呈,假阳性。,老年人。,生理机能发,生,生变化：少,数,数孕妇也可,发,发生生物学,假,假阳性。,梅毒假阳性,反,反应的处理,技术性假阳,性,性反应一般,是,是由于操作,错,错误引起的,假,假阳性反应,，,，经过重复,试,试验即可除,外,外。,对生物学假,阳,阳性反应，,应,应做,TPHA（TPPA）,等,等试验进行,排,排除。,前带现象,指非梅毒螺,旋,旋体抗原血,清,清试验中，,有,有时血清中,存,存在高浓度,的,的抗体时出,现,现的弱阳性,、,、不典型或,阴,阴性反应的,结,结果，而临,床,床上又象二,期,期梅毒，此,时,时将血清稀,释,释后再进行,试,试验，出现,了,了阳性的结,果,果，该现象,称,称为前带现,象,象。,处理：,将血清稀释,后,后再进行试,验,验。,耐血清性（,血,血清固定）,指经抗梅毒,治,治疗后，非,梅,梅毒螺旋体,抗,抗原血清试,验,验在一定时,期,期内不阴转,。,。早期的耐,血,血清性常与,治,治疗量不足,或,或不规则治,疗,疗、复发、,再,再感染或有,神,神经系统梅,毒,毒等因素有,关,关。,梅毒螺旋体,抗,抗原血清学,试,试验,梅毒螺旋体,抗,抗原血清学,试,试验方法,梅毒螺旋体,颗,颗粒凝集试,验,验 (TPPA),梅毒螺旋体,血,血球凝集试,验,验 (TPHA),梅毒酶联免,疫,疫吸附试验,（,（ELISA）,梅毒免疫层,析,析法-梅毒,快,快速检测(RT),荧光螺旋体,抗,抗体吸收试,验,验（FTA-ABS）,化学发光免,疫,疫分析法（CLIA）,梅毒螺旋体,蛋,蛋白印迹试,验,验（WB）,TPPA,TPPA试,验,验用梅毒螺,旋,旋体致敏明,胶,胶颗粒，此,致,致敏颗粒与,人,人血清中的,抗,抗梅毒螺旋,体,体抗体结合,，,，产生可见,的,的凝集反应,，,，具有较高,的,的敏感性和,特,特异性。,TPPA是,目,目前WHO,认,认可的梅毒,抗,抗原血清学,试,试验的“金,标,标准”，常,用,用于新方法,、,、新试剂评,价,价的参照标,准,准,。,TPPA(TPHA),试验原理示,意,意图,梅毒螺旋体,抗,抗原血清试,验,验的临床意,义,义,一般情况下,，,，一旦梅毒,患,患者梅毒螺,旋,旋体抗原血,清,清试验呈阳,性,性，即使经,过,过正规有效,治,治疗治，仍,将,将终身阳性,。,。,所以,TPPA等,试,试验不能作,为,为疗效观察,的,的指标。,作为非梅毒,螺,螺旋体抗原,血,血清试验初,筛,筛阳性标本,的,的确证试验,。,。,TPPA等,阳,阳性不能区,分,分既往感染,和,和现症感染,，,，应结合非,梅,梅毒螺旋体,抗,抗原血清试,验,验结果进行,诊,诊断。,TPPA结,果,果解释示意,图,图,梅毒血清学,试,试验结果解,释,释,梅毒血清学,试,试验结果解,释,释,梅毒检测技,术,术规范简介,全国梅毒检,测,测技术规范,第一章梅毒检测样,品,品的采集和,处,处理,第二章梅毒血清学,检,检测,第三章梅毒病原体,显,显微镜检测,第四章梅毒病原体,核,核酸检测,第五章实验室生物,安,安全,第六章梅毒检测实,验,验室质量管,理,理,第一章 样,品,品的采集和,处,处理,血清、血浆,、,、全血及脑,脊,脊液:,梅毒血清学,检,检测或核酸,检,检测,皮损部位组,织,织液、淋巴,穿,穿刺液:,梅毒病原体,检,检测或核酸,检,检测。,梅毒血清学,试,试验适用范,围,围,第二章 梅,毒,毒血清学检,测,测,检测目的:,临床诊断、,血,血液筛查、,流,流行病学监,测,测,以临床诊断,为,为目的的检,测,测是为了确,定,定梅毒感染,的,的状况。,以血液筛查,为,为目的的检,测,测是为了防,止,止梅毒的经,血,血传播。,以流行病学,监,监测为目的,的,的检测是为,了,了调查梅毒,血,血清学感染,率,率和发病率,。,。,梅毒实验室,检,检测策略选,择,择,根据目的选,择,择检测方法,及,及检测策略,。,。,可采用任何,一,一类梅毒血,清,清学检测方,法,法作为筛查,试,试验,。,以临床诊断,为,为目的检测,策,策略一,以临床诊断,为,为目的检测,策,策略二,策略一和策,略,略二比较,第三章 梅,毒,毒体病原学,检,检测,检测方法,暗视野显微,镜,镜检查,镀银染色检,查,查,第四章 梅,毒,毒核酸检测,可对血浆、,血,血清、皮损,部,部位组织液,、,、淋巴穿刺,液,液及脑脊液,等,等标本的梅,毒,毒螺旋体核,酸,酸检测,在早期梅毒,、,、神经梅毒,和,和先天梅毒,等,等诊断，以,及,及螺旋体现,症,症感染和既,往,往感染鉴别,诊,诊断中具有,一,一定的价值,可应用于梅,毒,毒螺旋体的,耐,耐药性监测,、,、菌株流行,病,病学分型。,第五章 实,验,验室生物安,全,全,梅毒的生物,危,危害,梅毒螺旋体,属,属第三类病,原,原微生物，,一,一般情况下,对,对人、动物,或,或者环境不,构,构成严重危,害,害，传播风,险,险有限，实,验,验室感染后,很,很少引起严,重,重疾病，是,有,有有效治疗,和,和预防方法,的,的致病微生,物,物,梅毒相关检,测,测的生物安,全,全级别,为了保证安,全,全，对临床,和,和现场未知,样,样本的梅毒,血,血清学检测,应,应在符合,级,级生物安全,实,实验室（BSL-2）,要,要求的实验,室,室中进行。,如,如有艾滋病,检,检测实验室,，,，可以在艾,滋,滋病抗体检,测,测实验室中,进,进行。,第六章 实,验,验室质量管,理,理,质量保证,质量评估,试剂评价,质量保证,检测方法和,试,试剂的选择,用于临床诊,断,断的检测方,法,法应使用经,国,国家食品药,品,品监督管理,局,局注册批准,的,的试剂，应,选,选择敏感性,高,高、特异性,好,好的试剂。,性,性病参比实,验,验室和省级,性,性病中心实,验,验室应定期,组,组织开展梅,毒,毒诊断试剂,的,的临床质量,评,评价和新方,法,法与技术的,评,评估,。,质量评价,所有梅毒检,测,测实验室应,参,参加外部质,量,量评价,省级中心实,验,验室应参加,国,国家级职能,工,工作考核和PT,其他实验室,应,应参加省级,职,职能工作考,核,核和PT。,质量评价,考评组织单,位,位根据PT,考,考核结果、,职,职能工作评,价,价结果及对,部,部分实验室,现,现场评价情,况,况，汇总各,实,实验室的最,终,终考评结果,，,，上报相关,机,机构。,考评单位应,将,将考评得分,及,及扣分原因,反,反馈各参评,实,实验室，以,适,适当的方式,在,在适当范围,内,内公开发布,考,考评结果。,为,为合格者颁,发,发合格证书,。,。,小结,1、非梅毒,螺,螺旋体抗原,血,血清学试验,阳,阳性往往是,梅,梅毒现症感,染,染者，临床,上,上即可开展,治,治疗。,2、非梅毒,螺,螺旋体抗原,血,血清学试验,定,定量试验可,作,作为疗效观,察,察的指标。,3、完,善操作的标,准,准化，杜绝,有,有个人特点,的,的操作。,4、根据目,的,的选择检测,方,方法及检测,策,策略。可采,用,用任何一类,梅,梅毒血清学,检,检测方法作,为,为筛查试验,。,。,5、,临床上采用,两,两种方法同,时,时检测，可,以,以快速诊断,梅,梅毒，使病,人,人能够得到,及,及时治疗。,9,、静夜,四,四无邻,，,，荒居,旧,旧业贫,。,。12月-2212月-22,Wednesday, December 28,2022,10,、雨,中,中黄,叶,叶树,，,，灯,下,下白,头,头人,。,。21:26:3221:26:3221:26,12/28/20229:26:32PM,11,、,以,以,我,我,独,独,沈,沈,久,久,，,，,愧,愧,君,君,相,相,见,见,频,频,。,。,。,。12,月,月-2221:26:3221:26,Dec-2228-Dec-22,12,、故人江海,别,别，几度隔,山,山川。21:26:3221:26:3221:26,Wednesday,December28, 2022,13,、乍见翻疑,梦,梦，相悲各,问,问年。12月-2212月-2221:26:3221:26:32,December 28, 2022,14,、,他,他,乡,乡,生,生,白,白,发,发,，,，,旧,旧,国,国,见,见,青,青,山,山,。,。,。,。28,十,十,二,二,月,月20229:26:32,下,下,午,午21:26:3212,月,月-22,15,、比不,了,了得就,不,不比，,得,得不到,的,的就不,要,要。十二月229:26 下,午,午12月-2221:26,December28,2022,16,、行动出成,果,果，工作出,财,财富。2022/12/2821:26:3221:26:32,28 December 2022,17,、做前，,能,能够环视,四,四周；做,时,时，你只,能,能或者最,好,好沿着以,脚,脚为起点,的,的射线向,前,前。9:26:32,下,下午9:26,下,下午21:26:3212月-22,9,、没,有,有失,败,败，,只,只有,暂,暂时,停,停止,成,成功,！,！。12,月,月-2212,月,月-22,Wednesday,December28,2022,10,、很,多,多事,情,情努,力,力了,未,未必,有,有结,果,果，,但,但是,不,不努,力,力却,什,什么,改,改变,也,也没,有,有。,。,。21:26:3221:26:3221:26,12/28/20229:26:32PM,11,、成,功,功就,是,是日,复,复一,日,日那,一,一点,点,点小,小,小努,力,力的,积,积累,。,。12,月,月-2221:26:3221:26,Dec-2228-Dec-22,12,、,世,世,间,间,成,成,事,事,，,，,不,不,求,求,其,其,绝,绝,对,对,圆,圆,满,满,，,，,留,留,一,一,份,份,不,不,足,足,，,，,可,可,得,得,无,无,限,限,完,完,美,美,。,。,。,。21:26:3221:26:3221:26,Wednesday,December28,2022,13,、不知香,积,积寺，数,里,里入云峰,。,。12月-2212月-2221:26:3221:26:32,December28,2022,14,、意志坚强,的,的人能把世,界,界放在手中,像,像泥块一样,任,任意揉捏。28 十二,月,月 20229:26:32 下午21:26:3212月-22,15,、楚塞,三,三湘接,，,，荆门,九,九派通,。,。十二月229:26 下,午,午12月-2221:26,December28,2022,16,、少,年,年十,五,五二,十,十时,，,，步,行,行夺,得,得胡,马,马骑,。,。2022/12/2821:26:3221:26:32,28December2022,17,、空山新,雨,雨后，天,气,气晚来秋,。,。9:26:32,下,下午9:26,下,下午21:26:3212月-22,9,、杨,柳,柳散,和,和风,，,，青,山,山澹,吾,吾虑,。,。12,月,月-2212,月,月-22,Wednesday,December28,2022,10,、,阅,阅,读,读,一,一,切,切,好,好,书,书,如,如,同,同,和,和,过,过,去,去,最,最,杰,杰,出,出,的,的,人,人,谈,谈,话,话,。,。21:26:3321:26:3321:26,12/28/20229:26:33PM,11,、越是没,有,有本领的,就,就越加自,命,命不凡。12月-2221:26:3321:26,Dec-2228-Dec-22,12,、,越,越,是,是,无,无,能,能,的,的,人,人,，,，,越,越,喜,喜,欢,欢,挑,挑,剔,剔,别,别,人,人,的,的,错,错,儿,儿,。,。21:26:3321:26:3321:26,Wednesday,December28,2022,13,、知,人,人者,智,智，,自,自知,者,者明,。,。胜,人,人者,有,有力,，,，自,胜,胜者,强,强。12,月,月-2212,月,月-2221:26:3321:26:33,December28,2022,14,、意志,坚,坚强的,人,人能把,世,世界放,在,在手中,像,像泥块,一,一样任,意,意揉捏,。,。28,十,十二月20229:26:33 下,午,午21:26:3312月-22,15,、,最,最,具,具,挑,挑,战,战,性,性,的,的,挑,挑,战,战,莫,莫,过,过,于,于,提,提,升,升,自,自,我,我,。,。,。,。十,二,二,月,月229:26,下,下,午,午12,月,月-2221:26,December28,2022,16,、,业,业,余,余,生,生,活,活,要,要,有,有,意,意,义,义,，,，,不,不,要,要,越,越,轨,轨,。,。2022/12/2821:26:3321:26:33,28December2022,17,、一,个,个人,即,即使,已,已登,上,上顶,峰,峰，,也,也仍,要,要自,强,强不,息,息。9:26:33,下,下午9:26,下,下,午,午21:26:3312,月,月-22,MOMODA POWERPOINT,Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit. 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