浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建课件

,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,Click to edit Master title style,Company,LOGO,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建,16、人民应该为法律而战斗，就像为了城墙而战斗一样。赫拉克利特,17、人类对于不公正的行为加以指责，并非因为他们愿意做出这种行为，而是惟恐自己会成为这种行为的牺牲者。柏拉图,18、制定法律法令，就是为了不让强者做什么事都横行霸道。奥维德,19、法律是社会的习惯和思想的结晶。托伍威尔逊,20、人们嘴上挂着的法律，其真实含义是财富。爱献生,浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建16、人民应该为法律而战斗，就像为了城墙而战斗一样。赫拉克利特,17、人类对于不公正的行为加以指责，并非因为他们愿意做出这种行为，而是惟恐自己会成为这种行为的牺牲者。柏拉图,18、制定法律法令，就是为了不让强者做什么事都横行霸道。奥维德,19、法律是社会的习惯和思想的结晶。托伍威尔逊,20、人们嘴上挂着的法律，其真实含义是财富。爱献生浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建浅黄分枝杆菌简介非结核分枝杆菌,多存在于环境中；为条件致病菌。是指结核分枝杆菌、牛分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。其特性有别于结核分枝杆菌，如对酸、碱比较敏感；对常用的抗结核菌药物较耐受；抗原与结核分枝杆菌有交叉，常被误诊为结核杆菌，延误病情。,浅黄分枝杆菌,革兰氏阳性杆菌，直到稍弯曲，不运动。在生长的某些阶段耐酸性酒精，全部好氧生长缓慢或很缓慢。非结核分枝杆菌的一种，慢性条件性致病，病程长引发动物食欲下降、生产率下降，常误诊为结核，在人体内经常以某些免疫系统疾病的继发性感染出现。,论文实验路线,分枝杆菌,基因组,提取,载体的扩,增与准备,菌体基因,组酶切,阳性克隆筛选及文库评估,DNA,与载体连接与转化,载体,酶切制备,浅黄分枝杆菌基因组的制备,手动法提取浅黄分枝杆菌全基因组，并对基因组进行酶切，通过对酶切时间和酶切浓度的调整制备,1-7kb,大小的基因组片段。,菌体核酸的,提取与酶切,基因组提取结果,基因组酶切结果,载体的扩增与酶切,通过小提质粒法得到一定量载体,pUC18,，并用,Sau3AI,的同尾酶,BamHI,进行切割，得到与菌体,DNA,片段切口相稳合的线性化,pUC18,载体。,载体扩增,与酶切,1 2,第一泳道为环状载体,第二泳道为酶切载体,基因组文库的构建,将,DNA,片段与线性化载体用,T4,连接酶连接后，转化于大肠杆菌感受态细胞,DH5,，用蓝白斑法筛选阳性克隆，其中白色栗粒状菌活即为转化成功的阳性克隆,转化及筛选,转化阳性菌落的,PCR,检测,用载体,pUC18,的通用引物对随机挑取的阳性白色菌落做菌落,PCR,，其得到的条带均位于,2,7kb,长短范围，证明目的片段已经成功插入受体细胞,PCR,检测,Diagram,ThemeGallery,is a Design Digital Content&Contents mall developed by Guild Design Inc.,ThemeGallery,is a Design Digital Content&Contents mall developed by Guild Design Inc.,Title,Add your text,Cycle Diagram,Add Your,Text here,菌体核酸的提取及,Add Your,Text here,C,Title,Add Your,Text here,B,Title,基因组文库的容量鉴定,公式：,N=ln(1-P)/ln1-(I/G),N:,一个完全基因文库所应包含的重组体克隆数,p:,所期望的目的基因在基因文库中出现的几率,I/G:,插入片段的平均大小与基因组,DNA,大小的比值,公式验证法,经公式计算当克隆数达,262918418,个时，可,99%,以上涵盖菌体全基因组，本实验得阳性克隆约为,410,4,个，说明基因库容量足够涵盖浅黄分枝杆菌全基因组,结 论,通过实验熟练掌握了分子生学核酸提取、酶切、连接等操作技能,成功构建了浅黄分枝杆菌的基因组文库，为实验室对该菌的后续研究提供了基因的种质资源,结论,1,结论,2,1,、最灵繁的人也看不见自己的背脊。,非洲,2,、最困难的事情就是认识自己。,希腊,3,、有勇气承担命运这才是英雄好汉。,黑塞,4,、与肝胆人共事，无字句处读书。,周恩来,5,、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。,培根,