实验四细菌转导

,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验四 细菌转导,厦门大学生命科学学院,实验目的,通过大肠杆菌噬菌体专一性转导半乳糖发酵基因学习掌握局限性转导的原理，掌握转导实验的基本方法,噬菌体介绍,噬菌体是指细菌病毒,生活周期：吸附、侵入、复制合成、装配、释放,烈性噬菌体,如,T4,温和噬菌体,如,、,Mu,-1、P1,和,P2,等,噬菌体结构,噬菌体组装,噬菌体载体,证明遗传物质是,DNA,而非蛋白质的,Hershey-Chase,实验,溶源菌的形成,噬菌体整合进,大肠杆菌,染色体中的固定位点上，这个位点在,gal(,半乳糖代谢基因)和,bio(,生物素合成基因)之间，这位点称为,BOB，,它与的附着位点,POP,有相同的核心序列区，由15,bp,组成，它们通过同源单交换发生整合，形成溶源菌。,实验原理,转导定义：,以噬菌体作为媒介将一个细胞（供体）的遗传物质传递给另一个细胞（受体）的过程。,普遍性转导,P1,和,P2,局限性转导,dg db,实验材料,菌株：,E.coli k12()gal,+,k12Sgal,-,用品：,Eppondoff,离心管(1.5,ml/4.5ml),Tip,枪头(1,ml/200ul/20ul),培养基(肉汤固体/半固体/加倍肉汤/,EMB,),试剂：氯仿、磷酸,buffer,实验步骤,噬菌体的诱导和裂解液的制备,取4,ml gal,+,菌液至离心管，,4000,rpm，5min,倒去上清，加3,ml,磷酸,buffer，,震荡悬浮,将悬浮液倒入培养皿，,UV,照射处理10,s,加入3,ml,加倍肉汤，37,避光,培养,2,h,取0.8,ml,培养液于小离心管，加入0.2,ml,氯仿,剧烈震荡,半分钟，,6000,rpm,10min,得到的上清液即噬菌体裂解液,实验步骤,噬菌体效价测定,取10,ul,裂解液至990,ul,磷酸,buffer,震荡混匀，再从中取10,ul,裂解液至990,ul,磷酸,buffer，,震荡混匀，得到10,-6,稀释液,取0.1,ml,稀释液和0.5,ml gal,-,受体菌至半固体肉汤培养基(3,ml),管中，混匀，倒入肉汤固体培养基中，摇匀，凝固后37培养过夜,观察出现的噬菌斑数，计算效价,实验步骤,转导方法,取1,ml gal,-,受体菌，4000,rpm,5min,弃上清，加入1,ml,磷酸,buffer，,制成受体菌悬浮液,取一环受体菌在,EMB,培养基上划线(如图)，37培养1.5,h,再滴加裂解液后培养2天,各加50,ul gal,-,受体菌和裂解液于,EMB,培养基上,混合涂布；另外再作对照涂布培养,混合液,对 照,作业,填表,结果分析，计算噬菌体效价和转导频率,效价(单位/,ml)=,斑数,x,稀释倍数,x,取样量,转导频率=(转导子数/,ml)/(,噬菌体数/,ml,),x100%,画图表示,dg,转导颗粒转导,gal,-,细菌的过程,