《中药常规检验》PPT课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,中药的检验,化 验 室,2018,年,6,月,中药材及其炮制品的常用检查,一般检查,限量检查,杂质,水分,总灰分,酸不溶灰分,浸出物,二氧化硫,含量测定,黄曲霉素,杂质的来源,一是由中药材原料中带入；,二是在生产制备过程中引入；,三是贮存过程中受外界条件的影响，制剂的理化性质改变而产生。,杂质,药材中混存的杂质系指下列各类物质：,一、来源与规定相同，但其性状或部位与规定不符；,二、来源与规定不同的物质；,三、无机杂质，如砂石、泥块、尘土等。,杂质检查法,(,通则,2301),检查方法,1.,取规定量的供试品，摊开，用肉眼或放大镜（,5,10,倍）观察，将杂质拣出；如其中有可以筛分的杂质，则通过适当的筛，将杂质分出。,2.,将各类杂质分别称重，计算其在供试品中的含量（,%,）。,【,注意,】,1.,药材中混存的杂质如与正品相似，难以从外观鉴别时，可称取适量，进行显微、化学或物理鉴别试验，证明其为杂质后，计入杂质重量中。,2.,个体大的药材，必要时可破开，检查有无虫蛀、霉烂或变质情况。,3.,杂质检查所用的供试品量，除另有规定外，按药材取样法称取。,杂质检查法,(,通则,2301),水分测定法,（通则,0832,）,第一法（费休氏法）适用于多种有机和无机物中含水的测定。,第二法,(,烘干法,),适用于不含或少含挥发性成分的药品。,第三法,(,减压干燥法,),适用于含有挥发性成分的贵重药品。,第四法,(,甲苯法,),适用于含挥发性成分的药品。,第五法（气相色谱法）适用于中药制剂中微量水分的测定。,甲苯法测定水分,A,为,500mL,的短颈圆底烧瓶，,B,为水分测定管；,C,为直形冷凝管，外管长,40cm,。,使用前，全部仪器应清洁，并置烘箱中烘干。,甲苯法测定水分,取供试品适量（约相当于含水量,1,4ml,），精密称定，置,A,瓶中,加甲苯约,200ml,，必要时加入干燥、洁净的沸石或玻璃珠数粒，将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满,B,管的狭细部分。将,A,瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热,待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出,2,滴。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时,将冷凝管内部先用甲苯冲洗,再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜的方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏,5,分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水黏附在,B,管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离（可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色，以便分离观察）。检读水量，并计算供试品中的含水量（,%,）。,灰分测定法,（通则,02302,）,总灰分,：中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化，称定重量计算结果。,酸不溶性灰分,：中药经高温炽灼得到的总灰分加稀盐酸处理，得到不溶于稀盐酸的灰分，称为酸不溶性灰分。,总灰分测定法,称取供试品,2,3g,（如需测定酸不溶性灰分，可取供试品,3,5g,），置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至,0.01 g,），缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至,500,600,，使完全炭化并至恒重，根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（,%,）。,酸不溶性灰分测定法,供试品先按总灰分测定的方法测定其总灰分，然后取所得的灰分，在坩埚中注意加入稀盐酸约,10ml,，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热,10,分钟，表面皿用热水,5ml,冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中含酸不溶性灰分的含量（,%,）。,灰分测定的注意事项,1.,测定前先将供试品称取适量粉碎，使其能通过,2,号筛，将粉末混合均匀后再取样。,2.,如供试品不易灰化，可将坩埚放冷，加热水或,10%,硝酸铵溶液,2ml,；使残渣湿润，然后置水浴上蒸干，得到的残渣再按上面所说的方法炽灼至坩埚内容物完全灰化。,浸出物测定法,（,通则,2201,）,浸出物分为水溶性、醇溶性、挥发性醚三种方法；同时水溶性和醇溶性又分为冷浸法和热浸法两种。其方法相同，不同的是使用的溶剂；水溶性使用的是水；醇溶性除另有规定外，以各品种项下规定浓度的乙醇代替水溶剂。,1.,冷浸法 样品加水,100ml,，静置,24,小时后，取续滤液,20ml,，水浴蒸干，干燥,3,小时，放冷，称定重量。,2.,热浸法 样品加溶剂,50ml,，称定重量，静置,1,小时后，连接冷凝管，加热回流,1,小时。放冷，补足重量，取续滤液,25ml,，水浴蒸干，干燥,3,小时，放冷，称定重量。,二氧化硫残留量测定法,（通则,2331,）,为什么要测定？,方法,硫磺具有漂白、增艳、防虫等作用，某些中药材在加工过程中有用硫磺熏蒸的习惯，残留的,S02,可能影响人体健康。,从,2005,版药典开始规定，中药材,不再允许使用,硫磺熏蒸，并要求对其进行检测。,二氧化硫残留量测定法,（,2015,）,A,为,1000ml,两颈圆底烧瓶；,B,为竖式回流冷凝管；,C,为（带刻度）分液漏斗；,D,为连接氮气流入口；,E,为二氧化硫气体导出口。,另准备电热套及高浓度氮。,取药材或饮片细粉约,10g,，精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水,300-400ml,，连接回流冷凝管以及刻度分液漏斗，并给水。在冷凝管的上端,E,口处连接导气管，将导气管插入,100ml,锥形瓶底部。锥形瓶内加,3%,过氧化氢溶液,50ml,作为吸收液，使用前，加,3,滴甲基红乙醇溶液指示剂，并用,0.01mol/L,氢氧化钠滴定液滴定至黄色。开通氮气，打开分液漏斗活塞，加入,6mol/L,盐酸溶液,10ml,，立即加热两颈圆底烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸；,1.5,小时后，停止加热。放冷后，用氢氧化钠滴定液滴定，至黄色持续,20,秒钟不褪，并将滴定的结果用空白试验校正。,A,为供试品消耗氢氧化钠滴定液的体积，,ml,；,B,为空白消耗氢氧化钠滴定液的体积，,ml,；,C,为氢氧化钠滴定液浓度，,mol/L,；,0.032,为每,1ml,氢氧化钠滴定液（,1mol/L,）相当的二氧化硫的质量，,g,。,W,为供试品的重量，,g,；,供试品中二氧化硫残留量（,mg/g,）,=,6,含量（高效液相）测定法,（通则,0512,）,为什么要测定？,方法简述,注意事项,中药组成复杂，产生疗效的不是某单一成分，检测任何一种活性成分均不能反映中药的整体疗效。,但是借鉴化药质量控制模式，测定某一味药味的有效成分、活性成分、指标性成分的含量的方法，对于控制中药质量起着不可替代的重要作用。,通过测定中药中有效成分、毒性成分或某些指标性成分的含量来衡量其生产工艺的稳定性和中药材的质量优劣，以保证中药的质量，达到临床用药安全、有效的目的。,检查含量的必要性,本法是将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲剂等作为流动相,用泵将流动相压入装有填充剂的色谱柱,注入供试品,经流动相带入柱内,用记录仪记录色谱图,从而达到定性及定量的目的。本法应用范围比气相色谱广,只要样品能制成溶液,就可进行分析,尤其是中药的含量测定,更为适用。,高效液相测定法的原理,1,、色谱条件与系统适用性试验 根据,中国药典,项下对各品种的规定，选择色谱柱、流动相、检测波长；并核对检测后的理论板数。,2,、对照品溶液的制备 根据,中国药典,项下对各品种的规定，按其要求完成对照品的称重、配制。,3,、供试品溶液的制备 根据,中国药典,项下对各品种的规定，按其要求完成样品的粉碎、称重、提取、制备。,4,测定法 分别将对照品与供试品溶液按,中国药典,要求注入色谱仪，通过所得数据用外标法进行计算，得出结果并打印保存图谱。,高效液相测定法方法简介,高效液相测定法注意事项,1,、贮液器：尽可能使用,HPLC,的溶剂和试剂。含有缓冲盐和非,HPLC,的流动相一定要通过,0.5um,的过滤器。改变流动相时应防止交叉污染，陈旧的流动相和用久了的试剂瓶应定期废弃，防止生长微生物和组分改变。贮器内壁定期清洗，里面的附件要经常更换。,2,、泵：密封垫圈是最易磨损的部件。密封垫圈的损坏可引起系统的许多故障。最好,3,个月换一次垫圈。要注意防止因泵堵塞造成的压力过高而损坏柱塞杆或烧坏电机。延长垫圈寿命的措施（,1,）每次把泵的缓冲液洗干净，防止盐沉积，泵要浸在无缓冲液的溶液或有机溶剂中（,2,）用,HPLC,级试剂,3,、进样器：停机后要用溶剂冲洗干净进样器内的残留的样品和缓冲盐，防止无机盐沉积和样品微粒造成阀转子面磨损或阻塞。严禁用尖针头进样。,4,、柱：防止柱性能下降的措施：（,1,）溶剂的化学腐蚀性不能太强；（,2,）避免微粒在柱头沉降；（,3,）泵上要装压力限制器，防止压力过高冲击过大；（,4,）流动相,ph,7,时用大粒度同种填料作预柱（,5,）柱头加烧结不锈钢滤片，需要时加保护柱。采用正确的制备样品方法和经常清洗柱也能延长寿命。,柱在不用时要保存好，要洗去缓冲液防止生长微生物。应加入大于,10,的有机溶剂，将柱两端用盖拧紧，保持柱填料湿润不造成裂缝。,5,、检测器：保持清洁，用后连同柱一起冲洗。提倡不定期用强溶剂反向冲洗检测池（拆开柱）用脱气流动相，以防空气泡卡在池内。不用时不开灯。,高效液相注意事项,由色谱柱引起的故障及解决办法,故 障,现 象,解决办法,过滤片阻塞,压力增高,N,下降 峰形差,倒柱冲洗或换过滤片,柱头塌陷,峰分叉,N,下降,修补柱头可恢复,80%,以上,样品阻塞,高压,用能溶解样品的溶剂冲洗柱,强吸附的样品,N,下降 保留减小,强溶剂反冲,黄曲霉毒素测定法,（通则,2351,）,为什么要测定？,方法,注意事项,检查黄曲霉素的必要性,中药材采集后干燥或贮存不当，或在制备和加工过程中处理不善，可能污染在自然界普遍存在的黄曲霉而产生黄曲霉毒素，黄曲霉毒素具有极强的毒性和致癌性，故需对中药材及中药制剂中黄曲霉毒素含量进行控制。,黄曲霉的基本结构,黄曲霉毒素是一类结构相似的化合物，其基本结构都有二呋喃和香豆素。黄曲霉毒素在紫外线照射下，都能了出荧光，根据荧光颜色、,Rf,值及结构等不同，分别命名为,B,1,、,B,2,、,G,1,、,G,2,、,M,1,、,M,2,、,P,1,、,Q,等。,B,1,B,2,G,1,黄曲霉毒素测定法,（,2015,）,本法系用高效液相色谱法（通则,0512,）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素,B,1,、,B,2,、,G,1,、,G,2,总量计），除另有规定外，按下列方法测定。,规定：,B,1,5,g/kg,，,G,2,+G,1,+B,2,+B,1,的总量,10,g/kg,。,黄曲霉毒素品种,决明子,柏子仁,地龙,胖大海,肉豆蔻,莲子,远志,蜈蚣,陈皮,槟榔,桃仁,酸枣仁,麦芽,僵蚕,大枣,薏苡仁,黄曲霉毒素测定法,（,2015,）,色谱条件与系统适用性试验,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇,-,乙腈,-,水（,40,：,18,：,42,）为流动相，流速每分钟,0.8ml,；采用,柱后衍生法,检测，衍生溶液为,0.05%,的碘溶液（取碘,0.5g,，加入甲醇,100ml,使溶解，用水稀释至,1000ml,制成），衍生化泵流速每分钟,0.3ml,，衍生化温度,70,；以,荧光检测器,检测，激发波长,ex=360nm,（或,365nm,），发射波长,em=450nm,。两个相邻色谱峰的分离度应大于,