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,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,轧盖密封完好性试验,目 录,一、概 述 二、试验准备,三、试验步骤 四、再验证周期,概 述,一、概述,1,、,试验目的,：用微生物侵入试验对冻干粉针剂车间轧盖密封系统进行挑战性试验，以确认轧盖后容器密封系统的完好性。,2,、,试验概述,：取西林瓶灌装入已灭菌培养基，在正常生产线上抽真空、压塞、轧盖。此后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出并检查是否有微生物侵入，以确认容器密封系统的完好性。同时，须做阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。,试验准备,二、试验准备,批量：,1000,瓶,/,批,1,、洗瓶,:,清洗西林瓶,1100,只，经,305,干热灭菌,12,分钟后送至灌装间备用。,2,、胶塞处理,:,清洗胶塞,1100,只，经,121,湿热灭菌,20,分钟后备用。,3.1,预先对配制、灌装系统按照冻干粉针剂无菌操 作要求进行清洁、灭菌。,3.2,按照培养基生产厂商要求，每批按,TSB,（胰 酪胨大豆肉汤培养基）,32.3g,，加,1L,注射用水 的比例进行配制，加热溶解并标定至,4.5L,，置 于灭菌柜中用纯蒸 汽,121,灭菌,20min,。,二、试验准备,3,、配制培养基,:,二、试验准备,3.3,将灭菌后的培养基（,TSB,配制液）通过 未装滤膜及滤芯的过滤系统，在灌装机 的数控器上调节好装量（,3.5ml,）进行灌 装半加塞。,3.4,将灌装半加塞的培养基在百级层流保护下转移至冻干机内抽真空，结束后全压塞、出箱、轧盖。,4,、制备微生物菌悬液：,4.1,从铜绿假单胞菌（,ATCC 9027,）的新鲜斜面上取一整环培养物，分别接入含,6ml,无菌培养基的试管中，在,30,35,下培养,18,24h,。,4.2,将每管的培养物分别转入含,600ml,相同培养基的容器内，于,3035,下培养,18,24h,。在培养结束时，能明显见容器内培养基出现浑浊。,4.3,在微生物侵入试验开始时，所用菌悬液浓度（活菌数）必须达到,110,6,CFU/ml,。,二、试验准备,试验步骤,营养试验,微生物侵入试验,阳性对照实验,微生物侵入试验后,营养试验,三、试验步骤,1.1,从,1000,瓶培养基中取,150,瓶作为本次试验的试样品。,1.2,用剪刀轻轻从斜侧面去除至少,50,瓶试样品的整个铝盖（注意不要破坏其密封口，将去铝盖时不慎损坏容器密封性的所有试样品剔除），另取,80,瓶带盖试样品，将每一试样品倒转，使培养基与西林瓶内表面及胶塞充分接触，在,30,35,竖立倒置培养,14,天。,1,、,试验样品的制备,:,三、试验步骤,1.3,在培养期内，当试验中发现任何,带盖,试样品长菌时，则试验无效，须弃去全部试样品，重新从头开始试验。,2.1,所有试样品培养,14,天均不长菌时，从上述,1.2,试样品中随机取,20,个带盖试样品，每个试样 品内接种,100CFU,铜绿假单胞菌。在,30,35,下培养,7,天，或培养至所有试样品都呈阳性结 果,。,三、试验步骤,2,、确认培养基促菌生长能力,营养试验,：,2.1.1,若,7,天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样品中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。使用革兰染色后，并置于紫外灯下，培养基呈蓝绿色荧光，则确认试样品容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌，即为,阳性,。,2.1.2,若,7,天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样品中，微生物生长条件不好或经鉴别后受其它菌种污染，则试验失败，需重新作营养试验。,三、试验步骤,3,、微生物侵入试验操作步骤,:,微生物培养及侵入试验应在不影响生产环境的地方（中心化验室阳性室）进行。,三、试验步骤,3.1,将新鲜的铜绿假单胞菌（,ATCC 9027,）的,菌悬液倒入适当的容器内，用试管架固定,试样品。,三、试验步骤,3.2,从上述,1.2,试样品中再取,50,只带盖试样品为,A,组，另取,25,个去盖 试样品为,B,组，均倒,置于菌悬液中,使试样容器内的培养基充,分接触封口内表面，试样品的颈部及封口,的外表面应完全浸泡在菌悬液中（如下图,1,所示）。,图,1,微生物挑战试验示意图,三、试验步骤,3.3,将,A,组和,B,组试样品在菌悬液中持续浸泡约,4h,后，取出试样品，擦干试样品容器外残余的菌悬液，其外表用含,0.5%,过乙酸的,70%,异丙醇消毒五分钟（注意不要破坏其密封口）。,三、试验步骤,3.4,从,1.2,试样品中另取有盖和去盖的培养基各两,个,，,做阳性对照。阳性对照试样品不经菌悬,液浸泡，其外表用含,0.5%,过乙酸的,70%,异丙,醇消毒五分钟后，接种,10,100CFU,铜绿假单,胞菌，按营养试验的步骤进行阳性对照试验。,3.5,将消毒后的试样品放入塑料袋中，置,30,35,下培养,7,天。检查试样品内微生物生长情况，有生长记作“”，无生长记作“,”,。,三、试验步骤,3.5.1,如果试样品长菌，则按照,2.1,所述方法确认生,长菌是挑战微生物,铜绿假单胞菌。,3.5.2,如果所有试样品均不长菌，则从浸过菌悬液的,A,组试样中取,10,甁，,B,组试样中取,5,瓶，按,2.,所述方法对试样品进行营养性试验。,三、试验步骤,3.6,微生物侵入试验用菌悬液经灭菌后丢弃。,4.1,步骤,2,、,3.4,中进行的营养试验和,3.5.2,中进行的阳性对照试验都合格，微生物侵入试验才有效。,三、试验步骤,4,、结果评价,:,4.2,挑战试验中,A,组和,B,组如有长菌，需记录长菌的试样数。在,A,组中如出现长菌，则须按下述要求作进一步调查。,4.2.1,仔细去除微生物生长的容器的盖和塞，检查容器封口是否有缺损，造成微生物侵入。,4.2.2,将观察到试样品封口的缺陷，采用拍照或其他适当方式详细记录。,三、试验步骤,4.3,如果任何挑战试验中长菌的试样品不是由于容器封口明显的物理性缺损所致，容器密封性挑战试验作失败论。,三、试验步骤,5,、贮存稳定性,:,5.1,将剩余未经挑战试验的容器放入箱中，保存在室温黑暗处；,5.2,在适当的时间间隔（如,12,个月、,24,个月）取出一些容器，重复挑战性试验（步骤同上）。,三、试验步骤,再验证周期,四、再验证周期,1,、当轧盖设备发生变化时应进行再验证,;,2,、改变胶塞、西林瓶及铝盖尺寸、材质,时应进行再验证。,讲解完毕，谢谢！,欢迎批评指正,
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