自身抗体的实验室检测及临床意义

,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,自身抗体的实验室检测及临床意义,北京友谊医院风湿科 宋淑菊,主要内容,自身抗体的概念,自身抗体的分类,自身抗体的命名,自身抗体的检测方法,常见的自身抗体,自身抗体的概念,各种原因造成的机体,B,细胞产生的针对自身组织成分的抗体，称为自身抗体（,autoantibodies,）。,自身抗体可以是生理性的，如针对衰老或死亡的自体细胞，机体产生少量的自身抗体，以便被脾、肝及单核吞噬细胞系统的巨噬细胞吞噬，维持机体内环境的生理稳定；,自身抗体也可以是病理性的，引起自身免疫病。,自身抗体的分类,按照自身抗原在体内分布的不同可分为：,器官/组织特异性自身抗体,非器官/组织特异性自身抗体,按照检测自身抗体所用的基质不同可分为：,细胞抗体（以游离的细胞为实验基质）,细胞非特异性自身抗体，如抗核抗体,细胞特异性自身抗体，如,ANCA、,抗血小板抗体、抗红细胞抗体,组织抗体（以动物组织切片为实验基质）,自身抗体的命名,以首先被检测到该抗体的患者名字的缩写命名：如抗,Sm,、,抗,Ro、,抗,La,抗体,以相关疾病的名字的缩写命名：如抗,Scl-70、,抗,SS-A、,抗,SS-B,抗体,以抗原的化学性质进行分类命名：如抗,DNA、,抗,RNP,抗体,以抗原的部位进行命名：如抗板层素抗体、抗核膜抗体。,自身抗体的检测方法,对流免疫电泳、免疫双扩散,免疫荧光检测法,免疫印记法,酶联免疫吸附检测法（,ELISA）,放射性核素法,酶免疫斑点技术,免疫沉淀法,抗核抗体,(ANA),抗,dsDNA,抗体,抗,dsDNA,抗体,抗,Sm,抗体,抗,RNP,抗体,抗,SSA,抗体,抗,SSB,抗体,间接免疫荧光方法,金标法,免疫双扩散法,ANA (anti-nuclear antibodies),抗,Sm,抗体,抗,RNP,抗体,抗,SSA,抗体,抗,SS B,抗体,抗,Scl-70,抗体,抗,Jo-1,抗体,抗核糖体抗体,免疫印记法,ENA (extractable nuclear antigen),抗核抗体,(ANA),抗平滑肌抗体,(SMA),抗线粒体抗体,(AMA),间接免疫荧光法,自身抗体,病人血清,(,一抗,),玻片,二抗,荧光抗体,荧光显微镜下阅片,ANA,Hep-2,细胞,dsDAN,抗体短膜虫,SMA,大鼠胃组织,AMA,大鼠肾组织,间接免疫荧光法,底物,病人血清,金标记的抗体,dsDNA,抗原,阴性,阳性,金标法,抗原,1:4,1:16,1:32,1:64,病人血清,标准抗体,免疫双扩散,琼脂板,不同分子量的抗原,病人血清,酶标抗体,显色剂,判断结果,免疫印记法,抗,Sm,抗体,13.5, 28, 29KD,抗,RNP,抗体,22, 32,70KD,抗,SSA,抗体,52KD,抗,SS B,抗体,45, 47KD,抗,Scl-70,抗体,68-70KD,抗,Jo-1,抗体,55KD,抗核糖体抗体,15, 16.5, 38KD,间接免疫荧光法,细胞核阳性,核仁阳性,细胞浆阳性,分裂期细胞阳性,细胞核阳性,细胞核均质型（,Homogeneous）：,抗,dsDNA,、,组蛋白抗体、核小体抗体,细胞核周边型（,Membranous）：,板层素抗体,细胞核颗粒型（,Speckled）：,粗颗粒：,抗,Sm、RNP,抗体,细颗粒：,抗,SSA、SSB,抗体,抗,dsDNA,抗体,荧光模式：,绿蝇短膜虫,：动基体均质的或边缘亮度增强的荧光。,Hep-2,细胞,：细胞核的均质型荧光。,抗,dsDNA,抗体,自身抗原：位于,DNA,脱氧核糖磷酸框架上。,临床意义：对系统性红斑狼疮（,SLE,）特异性高。抗体滴度与疾病活动性存在相关性，因此抗体滴度的检测可为监控治疗提供有用的依据。,抗,RNP/,Sm,抗体,荧光模式：,Hep-2,片,：细胞核粗颗粒，核仁阴性。,肝组织切片,：同上。,荧光法不能区分抗,RNP,和抗体,Sm,。,抗,RNP/,Sm,抗体,自身抗原：抗原,RNP,和,Sm,属于一组小核糖核蛋白（,snRNP,），,由低分子量的,RNA,和多种蛋白质组成，,RNA,中尿苷（,U-RNA）,含量较高。,临床意义：高滴度的抗,RNP,抗体为 混合结缔组织病（,MCTD,）的特征，发生率为95100%。也可出现于,SLE，,但总是与抗,Sm,抗体同时出现。抗,Sm,抗体对,SLE,具有高度特异性，发生率为2040%。,抗,SSASSB,抗体,荧光模式,Hep-2,片,：细胞核呈细颗粒荧光，核仁不发光。,肝组织片,：细颗粒荧光。,抗,SSASSB,抗体,自身抗原：,SSA,抗原是一个小核糖核蛋白，由一个,RNA,分子和两种不同的蛋白质组成。蛋白质的分子量为52,KD,和60,KD,。抗体直接针对蛋白质的抗原决定簇。,SSB,抗原是分子量为48,kD,的磷酸化蛋白。,临床意义；最常见于干燥综合征（,SS,）,也见于,SLE、,原发性胆汁性肝硬化（,PBC,），偶见于慢活肝。抗,SSA,抗体在新生儿红斑狼疮的发生率几乎为100%。,核仁阳性,(,Nucleolar,),核仁荧光增强，核浆均质型-,Scl-70,抗体。,核仁均质型-,PM-,Scl,及其他抗原抗体。,核仁细颗粒型-原纤维蛋白抗体。,核仁粗颗粒型-,RNA,多聚酶-1抗体。,抗,Scl-70,抗体,荧光模式：,Hep-2,片,：细胞核几乎均质的荧光，核仁荧光加强而且也为均质型，胞浆无荧光。,肝组织片,；细胞核颗粒或均质型荧光，常见到细胞核荧光。,抗,Scl-70,抗体,自身抗原：为,DNA,拓扑异构酶1，分子量为100,KD。,在,DNA,双链的复制和转录中起作用。,临床意义：2570%的系统性硬化症（,PSS,）弥漫型患者阳性，局限型硬皮病患者阴性。,细胞浆阳性,胞浆均质型-,抗核糖体抗体,细颗粒-,抗,Jo-1,抗体,胞浆颗粒型 粗颗粒-,AMA,抗体,滴状点状-溶酶体抗体,核周颗粒-高尔基体抗体,胞浆纤维型 细纤维-波形蛋白抗体,环状纤维-原肌球蛋白抗体,针状纤维-肌动蛋白抗体,抗核糖体抗体,荧光模式：,Hep-2,：,胞浆细颗粒到均质状、非常致密的荧光 。,肝组织片,：岛状荧光。,临床意义：,SLE,的特异性抗体，与精神症状有关。,抗,Jo-1,抗体,荧光模式：,Hep-2,：,胞浆颗粒到细块状荧光。,肝组织片,：胞浆中弱荧光。,自身抗原：组氨酰,tRNA,合成酶。,临床意义：见于,PM，,发生率2535%。,抗线粒体抗体,荧光模式：,Hep-2,：,胞浆内粗的颗粒型荧光。,大鼠肾组织,切片：肾小管明显荧光，肾小球荧光较弱。,抗线粒体抗体,自身抗原：位于真核细胞线粒体膜的内面。线粒体自身抗原为2-氧酸脱氢酶复合体的亚单位，为一组自身抗原，其中与,PBC,有关的包括：,（1）丙酮酸脱氢酶复合体（,PDC）,（2）支链2-氧酸脱氢酶复合体（,BCOADC）,（3）,a,-,酮戊二酸脱氢酶复合体（,OGDC）,抗线粒体抗体,临床意义：,AMA-M2,对,PBC,具有诊断意义。,AMA,亚型与疾病的相关性：,AMA-1：,梅毒、干燥综合征,AMA-2：PBC,AMA-3：,药物性红斑狼疮,AMA-4：PBC,与,AIH,重叠,AMA-5：SLE、,自身免疫性溶血性贫血,AMA-6：,异烟肼引起的药物性肝炎,AMA-7：AIH,AMA-8：AIH、,闭塞性血栓性血管炎,AMA -9：,药物性肝炎,AMA-10：SLE,分裂期细胞阳性,染色体阳性-染色体相关抗体，相关疾病？,纺锤体纤维阳性-纺锤体纤维抗体，如燕麦细胞型支气管肺癌,中间体阳性-中间体抗体，相关疾病？,细胞两极阳性-中心粒抗体，相关疾病？,着丝点阳性-,抗着丝点抗体,抗着丝点抗体,(ACA),荧光模式：,Hep-2,：,细胞核细的、相同大小的颗粒荧光，分裂期颗粒荧光带状位于细胞中间。,肝组织片,：分布于细胞核的1020个颗粒，荧光弱，易被忽略。,抗着丝点抗体,自身抗原：着丝粒中的三种不同的蛋白质：着丝点蛋白,A、B、C，,主要抗原为着丝点蛋白,B。,临床意义：对进行性系统性硬化症亚型（,CREST,综合征）有诊断意义。阳性率8095%。还可见于,PBC,、,SS,等。,器官/组织特异性自身抗体,抗中性粒细胞胞浆抗体（,ANCA）,抗平滑肌抗体,抗角蛋白抗体,抗肝肾微粒体抗体,抗肝细胞膜抗原抗体,抗可溶性肝抗原抗体,抗肝特异性蛋白抗体,抗中性粒细胞胞浆抗体（胞浆型）,cANCA,荧光模式：,猴肝,：肝血窦区粒细胞强荧光，而肝细胞阴性。,甲醛固定的中性粒细胞,：胞浆内粗大到细的荧光颗粒。,抗中性粒细胞胞浆抗体（胞浆型）,自身抗原：为丝氨酸蛋白酶-蛋白酶3（,PR3）。,该靶抗原为可溶性蛋白，存在于正常中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中。,临床意义：,cANCA,可见于多种系统性血管炎。主要见于,Wengeners,肉芽肿，约占,ANCA,阳性率的8095%。,cANCA,被认为是活动性,Wengeners,肉芽肿和微多动脉炎的特异和敏感的标志性抗体。还见于,Churg,-Strauss,综合征。,抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）,pANCA,荧光模式：,乙醇固定的中性粒细胞,：细胞核周围平滑的带状荧光，细胞核阴性。,猴肝,：肝血窦区粒细胞强荧光，而肝细胞阴性。,抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）,自身抗原：主要抗原为髓过氧化物酶（,MPO），,其他抗原还有白细胞弹性蛋白酶，组织蛋白酶,G、,溶菌酶及乳铁蛋白等。,临床意义：见于多种系统性血管炎。可见于,Wengeners,肉芽肿、微多动脉炎、,Churg,-Strauss,综合征、炎性肠病、自免肝、系统性风湿病（,RA、SLE、SS、PM/DM）。,抗平滑肌抗体,（,SMA）,荧光模式：,大鼠胃组织,，呈现肌膜、黏膜肌层和肌膜腺体间收缩纤维的明显细胞浆荧光 。,大鼠肾组织,，肾小管细胞内原纤维、肾小球膜细胞及血管肌层的荧光。,抗平滑肌抗体（,SMA）,自身抗原：主要的靶抗原为肌动蛋白，肌动蛋白可以单体（,G-,肌动蛋白）或聚合体（,F-,肌动蛋白）形式存在于微丝中，,F-,肌动蛋白自身抗原与自免肝关系密切，而,G-,肌动蛋白自身抗原则与酒精性肝硬化有关。,临床意义：见于自身免疫性肝炎、,PBC、,酒精性肝硬化。,抗角蛋白抗体,（,AKA）,荧光模式：,大鼠食管，仅限于上皮角质层的较强的线性分层的均质荧光。,抗角蛋白抗体（,AKA）,自身抗原：丝聚蛋白（,filaggrin,）,为,AKA,的靶抗原。,临床意义：见于,RA，,阳性率3659%，特异性9599%。还是一个潜在的预后标志，高抗体滴度可能预示着较严重的,RA,类型。,抗肝肾微粒体抗体,（,LKM）,有三种,荧光模式：,LKM-1：,肝细胞胞浆明显荧光，呈细颗粒到均质状，肾脏近近端肾小管有荧光。,LKM-2：,门静脉周围的肝组织荧光比其他部位强，肾脏近近端肾小管有荧光。,LKM-3：,肝和肾均为,阴性，灵长类睾丸间质细胞荧光明显。,抗肝肾微粒体抗体（,LKM）,自身抗原：,LKM-1：,细胞色素,P450,D6，,为,50,KD,蛋白。,LKM-2：,细胞色素,P450,同工酶，药物替尼酸的结合部位,LKM-3：UDP,葡萄糖醛酸基转移酶，为55,KD,蛋白。,临床意义：自免肝按血清学分型可分为三型,型：出现,ANA、SMA、,肝,细胞膜抗体（,LMA,抗体）为特征。,型：以出现,LKM,抗体为特征。,型：以出现可溶性肝抗原抗体（,SLA,抗体）为特征。,LKM-1,为,型自免肝的血清学标志。,LKM-3,抗体见于1015的慢性丁型肝炎患者。,抗肝细胞膜抗原抗体（,LMA）,荧光模式：,肝细胞膜的线性荧光。,抗肝细胞膜抗原抗体（,LMA）,自身抗原：肝细胞膜抗原，可能为26,KD,蛋白。,临床意义：为非疾病特异性，最常发生于病毒性及原发性自身免疫性肝炎,型，在非肝病患者，其发生率较低。,抗可溶性肝抗原抗体（,SLA）,荧光模式：,猴肝组织上，肝细胞明显荧光，呈细颗粒到均质溶解状。大鼠肾组织为阴性。,抗可溶性肝抗原抗体（,SLA）,自身抗原：主要的靶抗原为肝细胞角蛋白。,临床意义：,型自免肝的血清学标志。,抗肝特异性蛋白抗体（,LSP）,荧光模式：,猴肝细胞明显的颗粒状荧光。,抗肝特异性蛋白抗体（,LSP）,自身抗原：肝特异性膜脂蛋白，为43,KD,蛋白。,临床意义：常发生于病毒性及原发性自身免疫性肝炎,型，在非肝病患者，其发生率较低。,