病理组织的取材保存与送检讲义课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,病料的采集、保存与送检,一、概述,（二）确采集、保存与送检病料的重要性,（三）病料的采集、保存与送检三者之间的关系,（一）病料的含义,（一）病料的含义,狭义,：用于疾病诊断的材料。,广义,：用于动物科学研究、实验等各方面的,实验室检查材料。如：动物研究中的重要内,容,形态学和生理机能的变化。涉及到病,理学、组织胚胎、药物毒理、动物营养、动,物生化、生化等学科,（二）,正确采集、保存与送检病料的重要,性,1.,关系到疾病诊断的,准确性,：病变材料反应了疾病,的本质变化。,2.,关系到科研和,实验结果正确与否,：,科研试验：设计,实施,结果,。,实施（实验）,的过程,获取数据,动物,形态变,化、机能（生理生化指标）,。,（三）病料的采集、保存与送检三者之间的关系,1.,正确的采集病料是获得正确结果的,关键,。,2.,正确的保存病料是获得正确结果的,保证,。,3.,正确的送检病料是获得正确结果的,必要条件,。,三者均能影响结果！,二、实用举例,（一）用于病理组织学检查病料的采集、,保存与送检,（二）微生物学检查的材料的采集、保存,与送检,(,三,),用于毒物分析材料的收集保存与送检,（一）用于病理组织学检查病料的采,集、保存与送检,1.,病料的采集（取材）,2.,病料的保存（固定）,3.,病料的送检,1.,病料的采集（取材）,取材应目的准确，有病变的组织必须取，有疑问,处重点取，变化不明现时全面取。,取材部位要准确，所取组织块应含有病变、正常,和两者相交过度结构,;,组织结构要完整,如肠（外,膜层、肌层、粘膜层）、肾（皮质、髓质）。,取材时间尽量早。病死动物夏季不超过,6h,，冬季,不超过,24h,。（相对）,取材大小及数量。一般,1.5,2.0,0.3,0.5cm,为,好，不同的变化均取。,特殊组织取材,?,壁薄的囊腔脏器（肠、胆囊）。,?,体积微小的组织（小鼠的肾上腺、垂体、,甲状腺等）。,?,液状病料、渗出液。,?,柔软与变形的组织（肠系膜、神经干）。,防人为变化：取材刀具要,快，动作要轻，,防挤压。,2.,病料的保存（固定）,固定的作用：使细胞内的物质尽量接近生,活状态时的形态，结构和位置，并便于切片和,观察。,固定液的选择：用于组织固定的固定液种,类繁多，根据切片观察的目的而定（形态结构、,组织内抗原、组织内脂肪、糖原）,固定液的量：,10,倍于组织的体积。,固定的时间：数小时,24,小时，不同种,类不一样（固定液种类、组织大小,）,固定温度：常温,20,25,，低温,4,时,间要延长。,固定用容器：玻璃容器为好，禁用金属,容器，底部最好垫纱布或棉花，防组织贴,壁而固定不良。,固定方法：,浸泡法：要固定的组织浸入固定液中，是最常用的,方法。,注射、灌流固定法：用于体积过大，固定液,又难,进入肉尸的组织或整个器官、动物体进行固定。,电镜取材,活体固定,眼球固定,动物整体浸渍标本制作,蒸气固定法：固定组织中的可溶性物质，甲醛或锇,酸固定。,石蜡切片常用固定液,10,福尔马林固定液,甲醛溶液,1,份,自来水,9,份,10,中性福尔马林固定液（,PH,7.0,）,甲醛溶液,120ml,NaH,2,PO,4,H,2,O,4g,Na,2,HPO,4,13g,蒸,馏,水,880ml,4,多聚甲醛固定液,（用于免疫组织化学）,多聚甲醛,4g,0.1mol/L,PB,（,PH,7.4,）,100ml,多聚甲醛,PB,，于磁力搅拌器上，加热到,60,左,右,完,全,溶,解,，,溶,液,变,清,（,有,时,需,加,几,滴,1mol/L,NaOH,）,，,最后,PB,补足至,100ml,。,Bouin,氏固定液,（用于组织学和免疫组织化学固定）,苦味酸饱和水溶液,75ml,甲醛,25ml,冰醋酸,5ml,Carnoy,氏固定液,（使用于染色体、,DNA,、,RNA,、糖,原的固定）,纯酒精,6,份,冰醋酸,1,份,三氯甲烷,3,份,3.,病料的送检,及时送检,新鲜病料：,2h,以内能送到的，气温高时要加冰冷藏。,已固定的病料：,用塑料袋或瓶密封包装。,附送检说明：检查的目的与要求，基本情况介绍,（病史、发病、死亡及剖检、取材的组织种类、数量,等）,专人送检：人畜共患的烈性传染病（炭疽），国家,规定的一类动物疫病（口蹄疫、高致病性禽流感、,牛海绵状脑病等）。,（,二）微生物学检查的材料的采集保存与送检,要求在没有其它微生物污染情况下进行，因此,必须做到以下几点：,所有取材的用具（刀、剪,、盛装容器等）事先要,严格消毒、灭菌，取材环境尽量做到无菌。,尸检时应首先采取用于微生物检查的病料。,取材时间尽量早，动物死后肠道内微生物大量繁,殖造成污染。,必要时将整个脏器、尸体送检。,1.,病料的采集（取材）,实质脏器的取材：,先用烧热的刀片烧烙脏器表,面，再用消毒的刀、剪取深部组织，同时作触片。,最好一种组织用一套刀具,液体病料,（,血液、胆汁、渗出物、脓汁等）表,面,烧烙后，用灭菌注射器吸取保存。,全血,抗凝剂,4,枸橼酸钠,0.1ml,，可抗凝血,1ml,。,20,枸橼酸钠,2,3,滴可抗凝血,5ml,。,10,乙二胺四醋酸钠,2,3,滴可抗凝血,5ml,。,肝素：,1mg,可抗凝,1ml,，多用于病毒学检,查的抗凝血。,肠内容物：,烧烙表面，吸取内容,物于灭菌容器内。,皮肤及皮屑：,刀刮至真皮层收集,皮屑，作真菌、疥癣检查。,脑、脊髓：,常作病毒检查。,2.,病料的保存,细菌学检查材料：,A.,组织块：一般用灭菌的液体石蜡、,30,甘油,缓冲盐水或饱和氯化钠溶液。,B,.,液体材料：保存于灭菌的密封性好的试管内，,可用石蜡或密封胶封口。,C,.,各种涂片、触片、抹片,自然干燥后装盒冷,藏。,病毒学检查材料：,A,组织块：浸入,50,甘油缓冲盐水或鸡蛋生,理盐水。,B,液体材料：灭菌试管严密封口低温保存。,在,4,时可保存数小时，若长期保存应在,-70,条件下。,保存液的配制,30,甘油缓冲盐水：,纯甘油,30ml,氯化钠,0.5g,碱性磷酸钠,1g,0.02%,酚红液,1.5ml,中性蒸馏水加至,100ml,混合后在,15,磅高压灭菌,30mins,50,甘油缓冲盐水溶液：,氯化钠,2.5g,酸性磷酸钠,0.46g,溶于,100ml,中性蒸馏水内,碱性磷酸钠,10.74g,纯中性甘油,150ml,中性蒸馏水,50ml,混合后在,15,磅高压灭菌,30mins,鸡蛋表面消毒,破壳,搅匀后加灭菌生,理,盐,水,（,9,份,蛋,浆,1,份,灭,菌,生,理,盐,水,）,摇匀过滤,加热,56,58,30mins,，于第二、,三,天,再,按,上,述,过,程,加,热,一,次,，,冷,却,备,用,。,鸡蛋生理盐水溶液：,（三）用于毒物分析材料的收集保存与送检,中毒的诊断：,临床症状,尸体剖检,初步诊断,，要,确诊还需进行实验室诊断。,（毒物分析：毒物性质）,（病理切片：中毒靶器官病理变化）,1.,样品的采集,原则：采集含毒量多而易检出的材料。,常采集：,呕吐、排泄物、胃肠内容物、血、粪、,尿以及肝、肾、脑等组织；剩余的饲料及饮水,。,样品的种类及量：量要足够，多处取材时最好分,装，有时胃肠内容物可以不分装。,常见毒物中毒的样品采取表,毒,物,剩,余,饲,料,呕吐物、胃及,胃内容物,肠,内,容,物,粪,便,尿,液,血,液,肝,肾,脑,氰化物,+,+,+,+,+,磷,及,磷化锌,+,+,+,+,砷、铅,+,+,+,+,+,+,有,机,磷,农,药,+,+,+,+,有,机,氯,农,药,+,+,+,+,+,汞,及,有,机,汞,+,+,+,+,+,+,+,生物碱,+,+,+,+,亚硝酸盐,+,+,+,+,+,毒鼠药,+,+,+,+,检,品,采,取,量,包,装,法,附,注,剩余饲料,500-1000,克,塑,料,袋,胃及内容物,250-500,克,广口玻璃瓶或塑料袋,密,封,肠段和肠内容物,250,左右,广口玻璃瓶或塑料袋,密,封,粪便,250,左右,广口玻璃瓶或塑料袋,密,封,实质赃器,每个脏器,100-,250,克,广口玻璃瓶或塑料袋,密,封,血液,50-100,毫升,玻璃瓶或大试管,密,封,尿液,200-50,毫升,玻,璃,瓶,密,封,检品采取的量及包装方法,2.,保存,保存容器：用干净，未盛装过化学药品的玻璃或,陶瓷器皿，勿用金属制品。,干物质：可用干净的塑料袋、纸袋。,检查材料中不可用防腐剂，非用时可用酒精，但要用,同种酒精作对照。,所有的检查材料要标明名称、取材时间。,3.,送检,封装（严密）,尽快送检，最好在冷藏条件下，防变质或挥发。,提供中毒情况：,饲养管理情况：,使役、饲料、饮水腐败变质否，群饲还,是单养。,周围环境：,农药使用情况，有否毒鼠药，周围有无化,工厂、,废水等。,发病及死亡情况,：,发病时间、头数、症状、剖检变化等。,参考文献,1.,兽医学检验,.,军兽大编，农业出版社，,1979.,2.,动物尸体剖检技术,.,陈怀涛编，甘肃科技出版社，,1989.,3.,兽医临床病理学,.,（美）,E.H.,科尔斯著，朱坤熹、,秦礼让译，,上海科技出版社，,1989.,4.,家畜中毒学,.,王洪章编，农业出版社,.,5.,病理学技术,.,王伯沄编，人民卫生出版社，,2000.,6.,动物实验方法学,.,孙敬方编，人民卫生出版社，,2001.,