革兰染色法 、细菌的特殊染色法

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验一,革兰染色法、细菌的特殊染色法,微生物学与细胞生物学教研室,实验目的,掌握细菌革兰染色的原理与方法,掌握细菌芽孢染色的基本原理与方法,熟悉普通光学显微镜的油镜使用与保养,实验原理,革兰染色法的,简介,革兰染色法是细菌学中最广泛使用的一种鉴别染色法。由丹麦医师,Christian Gram,创立。,方法是先将细菌用结晶紫染色，加媒染剂（增加染料和细胞的亲和力）后，用脱色剂（乙醇和丙酮）脱色，再用复染剂染色。,实验原理,革兰染色法的原理,一般认为革兰阳性菌的细胞壁较厚，肽聚糖含量高，且交联度大，脂类含量少，经,95%,乙醇脱色时，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，与细胞结合的结晶紫与碘的复合物不容易被脱掉，因此细胞仍保留初染时的颜色。而革兰阴性菌的细胞壁较薄，脂类含量较高，肽聚糖含量较低，乙醇脱色时溶解外层类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞被脱色，经复染之后，又染上了复染的颜色。,实验原理,芽孢染色法的原理,芽孢具有厚而致密的壁，折光性强，通透性低，不易着色，用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色。芽孢染色法都基于同一个原则，即除了使用着色力强的染料外，还需要加热或延长染色时间等，促进标本着色。然后使菌体脱色而芽孢上的染料仍然保留。经复染之后，菌体和芽孢呈不同的颜色。,实验材料,-,菌株,金黄色葡萄球菌,（,209P,）,18-20h,斜面,大肠杆菌,18-20h,斜面,枯草芽孢杆菌,20-24h,斜面,实验材料,-,试剂,蒸馏水,结晶紫,卢戈碘液,95%,乙醇,番红花红,孔雀绿,实验步骤,革兰染色法,涂片 干燥 固定 初染（结晶紫,1,分钟）水洗 媒染（碘液,1,分钟内换,2-3,次）水洗 脱色（,9,5,%,乙醇,20-30,秒）,水洗 复染（番红花红,5,分钟）水洗 吸水纸吸干 镜检,实验步骤,芽孢染色法,涂片 干燥 固定 初染（孔雀绿,20,分钟）水洗 复染（番红花红,5,分钟）,水洗 吸水纸吸干 镜检,实验结果,实验结果,其它项目,预习酵母菌和霉菌的形态观察,讨论,革兰染色法中关键步骤是哪一步？为什么？,为什么芽孢和菌体会被染成不同的颜色？,