DNA的鉴定(精品)

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验九,DNA,的粗提取与鉴定,复习目标,1,了解与实验相关的三个实验原理,2,会对,3,掌握,本实验考查,实验材料选取和处理,实验成功的关健步骤,对实验原理的正确理解和运用；关健的实验,步骤应注意的问题；对实验结果,(,成功成失败,),作出分析和判断的能力,1,实验原理,利用,DNA,在,，中溶解度最低，而,的特点，可以,，形成沉淀析出，通过过滤，得到,再利用,利用,的特性，可以鉴定提取的,DNA,2,实验目的,(1),了解生物组织中,(2),初步掌握,的方法,(3),观察,物质,物质的量浓度为,0.14mol,L,的氧化钠溶液,蛋白质此时的溶解度高,使,DNA,与蛋白质分离,初提取的滤出物,DNA,DNA,不溶于酒精，但细,胞中的某些物质可溶于酒精的特点，进一步提取出含杂质较少的,DNA,DNA,遇二苯胺,(,沸水浴,),会染成蓝色,DNA,的存在部位和形式,DNA,的粗提取和鉴定,滤取出来的,DNA,3,实验方法与步骤,(1),提取细胞核物质：,(2),溶解核内的,DNA,(3),析出,DNA,黏稠物：,(4),滤取,DNA,黏稠物：,。,取,5,10mL,鸡血细胞悬液加入烧杯,中加蒸馏水,20mL,。同时，用玻璃棒沿一个方向快速充分,搅拌,5min,，使血细胞过度吸水破裂，细胞核内物质释放出,来，然后用纱布过滤取其滤液,在滤液中加入物质的量浓度为,2mol,L,的,NaCl 40mL,，并用玻璃棒沿一个方向搅拌,lmin,，核中,DNA,游离并充分溶解，染色质中的,DNA,和蛋白质分离。,沿烧杯内壁慢慢加入蒸馏水，同时用,玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌由于熔液浓度的下降，,使得,DNA,溶解度下降，蛋白质溶解度上升,DNA,析出成白色,丝状黏稠物当黏稠物不再增加时，停止加入蒸馏水,用多层纱布过滤，取纱布上,DNA,的黏稠物,(,5)DNA,黏稠物再溶解，取含,DNA,的黏稠物故于烧杯内，加入物质的量浓度为,2mol,L,的,NaC,溶液,20mL,，用玻璃棒向一个方向不停搅拌,3min,，使黏稠物尽可能多地溶解。,(6),过滤含,DNA,的氧化钠溶液：用两层纱布过滤,DNA,的氯化钠溶液，取其滤液,(7),提取含杂质较少的,DNA,：在滤液中加入冷却的无水乙醇，并用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌由于,DNA,不溶于酒精，会出现乳白色丝状物，用玻璃棒将丝状物卷起，井用滤纸吸去表面的水分,(8)DNA,的鉴定：两支试管中各加入物质的量浓度为,0.015mol,L,的氧化钠溶液,5mL,，将丝状物放入其中一支试管中，搅拌使其充分熔解后向两支试管中分别加入,4mL,二苯胺试剂，混匀后置于沸水浴中加热,5min,待试管冷却后，比较两试管的颜色变化，将发现加入,DNA,的试管中溶液呈蓝色，从而鉴定,DNA,的存在,4,注意事项,(1),制备鸡血细胞液时要在取新鲜鸡血的同时,。,(2),获取较多,DNA,的关键是,，以便使细胞膜和核膜破裂，核内物质释放出来。,(3),实验中共,3,次过滤。过滤时使用的纱布层数与取其滤液或粘稠物有关,(4),实验中有,6,次搅拌，,加入抗凝剂使血液分层，取下层血细胞沉淀,向鸡血细胞液加入足量的蒸馏水,第,l,、,2,次要用其滤液，使用的纱布为,1-2,层，,第,3,次是要用其滤出的黏稠物，使用的纱布为多层,除最后一次搅拌外，前,5,次搅拌,均要朝向一个方向，并且在析出,DNA,，,DNA,再溶解和提取,中各步搅拌都要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，防止,DNA,分子断裂。,(5),实验中有两次使用蒸馏水一次在第一步加水是为了使血细胞吸水膨胀破裂，加水后必须充分搅拌不应少于,5min,，使血细胞充分破裂，第二次加蒸馏水是在第三步，加水是为了稀释氯化钠溶液。,(6),实验中有三次加氯化钠溶液在第二步中，当加入氯化钠后必须充分晃动烧杯，使二者混合均匀，加速染色质中,DNA,与蛋白质分离使,DNA,充分游离并溶解在氯化钠溶液中在第五步中，加氯化钠溶液也是为了,DNA,的再溶解。不过这时溶液中蛋白质含量已很少在第八步中加的氯化钠溶液的浓度比前,2,次低的多，但还是为溶解,DNA,。,(7),在第七步中，必须使用冷酒精,(,至少在,50C,以下存放,24h),，并且将,1,份含,DNA,的氯化钠溶液加入到,2,份的冷酒精中如果悬浮在溶液中的,DNA,丝状物较少，可将混合液放入冰箱中再冷冻几分钟。,(8),本实验成功的关键,(9),5.,实验现象与讨论,最后一次搅拌时,出现，这就是,DNA,用,。,是保证提取到足量且较纯净的,DNA,因为,DNA,在细胞中含量少，所以在下列步骤中应特别注意，在第一步中使用的鸡血的量要在,180mL,左右提取细胞核物质时要充分搅拌,5min,以上在第二步中要充分晃动烧杯，在第三步中加蒸馏水要控制好用量，同时应用玻璃棒缓缓搅拌使,DNA,聚集在玻璃棒上在第四步中要使用多层纱布过滤，在第五步中要充分搅拌在第七步中使用冷酒精因为,DNA,易吸附在玻璃容器上，所以实验中最好使用塑料烧杯和试管，以减少,DNA,的损失。,盛放鸡血细胞液的容器和实验中的烧杯和试管最好也是塑料制的，,因为玻璃制品表面带电荷，,DNA,中的磷酸基带相反的电荷，会被吸附于,玻璃表面，减少,DiNA,含量。,玻璃棒上会有乳白色丝状物,二苯胺试剂鉴定时会发现试管中溶液呈蓝色,典例分析,例 在,DNA,的粗提取实验过程中，先后两次向烧杯中加入蒸馏水的作用分别是,( ),(A),稀释血液冲洗样品,(B),使血细胞破裂、降低,NaCI,浓度使,DNA,析出,(C),使血细胞破裂、增大,DNA,溶解量,(D),使血细跑破裂，提取含杂质较少的,DNA,解析；第一次加入蒸馏水的作用是使血细胞过度洗水而破裂，以便核内物质释放第二次如入适量蒸馏水，是为了降低,NaCl,溶液浓度，使,DNA,因溶解度达到最小而析出,B,挑战误区,例，下列操作中对,DNA,的提取量影响较小的是,( ),(A),使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出,DNA,等核物质,(D),搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动,(C),在析出,DNA,黏稠物时，要缓缓加蒸馏水直至溶液中黏稠物不再增多,(D),在用酒精沉淀,DNA,时，要使用冷酒精，甚至再将混合液旗入冰箱中冷却,解析：在,B,向所述操作中，可以保怔,DNA,分子的完整性但不影响提取量。除了,A,，,C,中的 、,D,三项影响,DNA,的提取量外使用塑料器皿也可以减少,DNA,在操作中的损失。,易错分析：不注意掌握关键的实验步骤，实验容易失败本题易错选其他项。,B,能力训练,一、选择题,1,对三次过滤的叙述中不正确的是,( ),(A),第一次过滤后，核物质存在于滤出的固体物中,(B),第二次过滤后使用多层纱布，,DNA,存在于纱布上的黏稠物中,(C),第三次过滤后，,DNA,存在于滤液中可进一步除去非,DNA,物质,(D),上述,B,、,C,两项均正确,2,在研究,DNA,的基因样本前，采集来的血样需用蛋白水解酶处理，然后用有机溶剂除去蛋白质请问，用蛋白水解酶处理血样的目的是,( ),(A),除去血浆中的蛋白质,(B),除去染色体上的蛋白质,(C),除去血细胞表面的蛋白质,(D),除去血细胞中的所有蛋白质，使,DNA,释放，便于进一步提纯,A,D,3,在实验中，有两次,DNA,的沉淀析出其依据的原理是,( ),DNA,在氯化钠的物质的量浓度为,0.14mol,L,时熔解度最低,DNA,在冷却的体积分数为,95H,的酒精中能沉淀析出,(A),两次都是,(B),两次都是,(C),第一次是，第二次是,(D),第一次是，第二次是,4,一位同学受老师委托去采集鸡血，鸡群中有雌鸡也有雄鸡，他想应该取含红细胞最多的个体的血结果他选了下列一只鸡,( ),(A),健壮的雄鸡,(B),健壮的雌鸡,(C),小母鸡,(D),小公鸡,5,DNA,在下列哪种浓度的,NaCl,溶液中溶解度最低,( ),(A)2mol,L (B)0.14mol,L,(C)0.015mol,L (D)0.1mol,L,C,A,B,6,从鸡血细胞中提取,DNA,所用的提取液是,( ),(A)NaCI,溶液,(B),酒精,(C),二苯胺,(D),柠檬酸钠,7,蛋白酶能使蛋白质水解而使染色质中的,DNA,分离出来，下列药品可达到上述同一目的的是,( ),(A),蒸馏水,(B)NaCI,溶液,(,C)NaOH,溶液,(D),盐酸,A,B,二、非选择题,8 . DNA,在氧化钠溶液中的溶解度有二重性，随着,NaCI,溶液浓度的变化而变化,(1),请在下列浓度的氯化钠熔液中，选出能使,DNA,析出最彻底的一种,( ),和溶解度最高的一种,( ),(A)0.14mol,L (B)2mol,L,(C)0.015mol,L (D)0.3mol,L,(2),欲使溶有,DNA,的物质的量的浓度为,2mol,L,的氧化钠溶液中的,DNA,析出，需降低氯化钠溶液的浓度最有效的方法是,( ),（,A),加蒸馏水 （,B),加矿泉水,(C),加清水,(D),加生理盐水,(3)DNA,不溶于酒精溶液但细胞中的某些物质却可以溶于酒精溶液，利用这一原理可以,可以推测溶于酒精的物质中可能有,。,(4),利用,DNA,遇,呈蓝色的特性将该物质作为鉴定,的试剂其实验过程要点是向放有,的试管中加入,4mL,的,观察试管中溶液颜色的变化这个实验也说明,DNA,耐,温，加热有利于,冷却则有利于,DNA,A,B,A,除去杂质,某些盐类、蛋白质、糖类或其他大分子物质,二苯胺,DNA,DNA,二苯胺试剂,高,加快染色的反应速度,析出,9.,在,DNA,的粗提取过程中有五次用玻璃棒搅拌第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞悬浮液是为了,，第二次搅拌加物质的量浓度为,2mol,L,的氯化钠溶液的滤液是为了使其与,DNA,，第三次搅拌加蒸馏水至物质的量浓度为,0.14mol,L,氯化钠溶液是为了,，第四次搅拌放入物质的量浓度为,2mol,L,氧化钠溶液中的纱布上有黏稠物是为了,：第五次搅拌体积分数为,95,的酒精是为了,。,10,关于,DNA,粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验效果的比较，最终选择鸡血做实验材料请根据图回答下列问题：,加速细胞破裂,混合均匀,稀释,NaCl,溶液析出含,DNA,的黏稠物,使黏稠物层尽可能多地溶于溶液中,提取含杂质较少的,DNA,(,1),鸡血细胞中红细胞,，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中,细胞数目较多，可以提供丰富的,。,(2),实验前由老师用血细胞液供同学们做实验材料而不用鸡全血，主要原因是,。,(3),在牧区采集牛、羊和马血比较方便若用该材料按实验要求完成实验步骤后，结果是,这是因为这些动物和人类一样,，但若改用动物肝脏傲实验材料，实验能顺利进行这是因为,。,(4),若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加,程序，使组织细胞更易分离,含细胞核,红,DNA,鸡血细胞中,DNA,相对含量高,很难提取到,DNA,成熟红细胞中无细胞核,肝细胞有细胞核,研磨,