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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,色谱柱的故障诊断与维护,液相色谱柱,八方世纪科技有限公司,北京总部：010-82656628，82656500，82656399,广州办事处：020-87768360，87786522,Authoring Division Name File Name,Security Notice (if required),H,LC与GC 色谱柱问题用户调查,色谱柱问题,百分率,Back Pressure, Plugged Frits,24%,Poor Reproducibility,16,Sample Recovery,14,Loss of Resolution,13,Instability,11,Voids,8.1,Leaks, Fittings,4.8,pH Range,2.0,Low Plate Count,2.0,Column Overload,2.0,Cost,1.7,Miscellaneous,15,介绍提纲,I. 常见问题， 现象及排除方案,- 基线漂移/噪音,- 峰型,- 压力变化,- 保留漂移,II. 日常维护/ 良好的实践,- 在线装置,- 样品制备,- 操作的限制,III. 再生/维修已损坏的色谱柱,-物理方法,-化学方法,I. 常见问题,基线噪音,可能的原因：,流动池脏,检测器灯有问题,如果是周期性的，则起源于泵的脉冲,温度对检测器的影响,气泡经过检测器,Time (min.),基线漂移,梯度洗脱,温度不稳定 (示差检测器）,流动相中有污染物,柱中的流动相没有平衡,体系中有污染物流出,可能的原因：,鬼 峰,鬼峰即使不样也会出现的峰,20% - 100% MeOH,没有进样,60,15,30,15,0,3,7,15,17,问题1- 流动相脏,问题2- 样品过量,(也可能是回收率太差),峰 型,双 峰,柱 塌 陷,正 常 峰,双 峰,柱中有死体积,过滤片部分堵塞,只有一个双峰组分的共洗脱,可能原因：,样品与溶剂不匹配,峰 型,所有的峰都展宽,柱效降低柱死体积,大进样量 / 质量,高捻度流动相,部分峰展宽,前次进样后流出的组分,大分子量样品蛋白或聚合物,峰展宽,样品与流动相不匹配,峰 型,拖尾峰,对称性 1.2,Normal,Tailing,Normal,Tailing,原因：,部分峰拖尾,二次保留效应残留硅醇基的反应,小峰紧跟在大峰的后面流出,柱头有污染,金属,所有峰拖尾,额外的柱效应,柱损坏,不适当的样品量/溶剂,峰 型,Normal,Fronting,前伸峰,不对称性 强有机溶剂) 通常最有效,低 pH 流动相, 如 0.1% TFA or 0.01M H3PO4, 也是有效的,升高温度（60-80）,色谱柱修复和再生 -,化学变化-I,6M盐酸胍、异硫氰酸胍、尿素等溶液可用于清除蛋白质的沉积,XDB, 有机聚合物等填料可使用高pH 水溶液 /有机溶液，如： 0.01M NaOH 50% 异丙醇 /水溶液，硅胶基质应尽量减少接触时间 (15-30 min).,色谱柱的修复和再生 -,化学变化 -II,Example:,4.6 mm ID x 15 cm Zorbax 300SB-C18,Flow rate: 1 mL / min; Temp: 80,A: 0.1% TFA in water B: 0.1% TFA in acetonitrile,100% A for 30 min.; 0-100% B over 30 min.;,Hold 100% B for 30 min., Return to 100% A in 5 min.,Repeat 3 times.,总 结,如果使用时加以注意，大部分的液相色谱柱的问题是可以预防的,- 流动相必须是互溶的，无颗粒,- 使用保护柱和在线过滤器，并定期更换,- 使用恰当的样品制备方法,- 使用恰当的色谱柱清洗程序,- 不同类型的色谱柱，请选择不同的操作条件,(如： SB: pH 1-6, XDB: pH 3-11),- 保存柱反压及重要的色谱参数的记录 (如： R, N, As, k),- 色谱柱需保存在有机溶剂中 (乙腈),
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