免疫球蛋白课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,冯永堂,第二章,Immunoglobulin,-,Antibody,Polyclonal antibody (pAb),Monoclonal antibody (McAb),Genetic engineering antibody,冯永堂第二章 Immunoglobulin,Immunoglobulin (Ig),Ig,是指具有抗体(,Ab)活性,或,化学结构与Ab相似,的球蛋白。,Ig与Ab: Ab是Ig, Ig不一定都是Ab。,泌型Ig(SIg): 如Ab等,膜型Ig(mIg): 如BCR等,Ig类型,Immunoglobulin (Ig),第一节 免疫球蛋白分子的结构,一. 免疫球蛋白的基本,Porter和Edelman-的研究证明了Ab的结构.,“Y”型,-S-S-连接的四肽链结构(两长两短),(轻链),(重链),抗原,抗原,L,L,H,H,Gerald Edelman,Rodney Porter 1917-1985,第一节 免疫球蛋白分子的结构一. 免疫球蛋白的基本,(一)重链(H)与轻链(L),长,链,为Heavy chain(H),短,链,为Light chain(L),链IgM,链IgA,链 IgG,链IgD,链IgE,H,分,L,分,型,型,(一)重链(H)与轻链(L) 长链为Heavy chain(,(二),V区,（veriable region）,和C区,(constant region),V区-,H的1/4和L的1/2近N端,C区,-,H的3/4和L的1/2近C端,铰链区,V区,C区,N端,C端,(二) V区（veriable region）和C区(con,CDR1,CDR2,CDR3,铰链区,V区与互补决定区,（complementaritydetermining region，,CDR,）,VH和VL中各有3个区域,氨基酸组成和排列顺序高度可变称,高变区,（hyper veriable region ,HVR,）或,CDR,.,HVR1=(CDR1),HVR2= (CDR2),HVR3= (CDR3).,CDR之外的区域称骨架区,（framework region, FR）,CDR1铰链区V区与互补决定区（complementari,（三） Ig的结构域或功能区,结构域,指每条Ig肽链折叠形成的多个球型结构,每个约有110AA组成,一般具有相应的功能(功能区).,IgG, IgA, IgD:,L有2个,H有4个,L chain: VL, CL,H chain:VH, CH1, CH2, CH3,IgM, IgE:,L有2个,H有5个,L chain: VL, CL,H chain:VH, CH1, CH2, CH3, CH4,（三） Ig的结构域或功能区 结构域指每条Ig肽链折叠形,VL, VH（CDR)-,抗原特异性结合部位,独特型抗原决定簇部位,CH1-,同种异型的遗传标记,CH2, CH3(IgM)-,补体C1q结合点，激活补体,IgG CH2-,通过胎盘,IgG CH3-,结合Fc,R发挥调理吞噬,介导ADCC,。,IgE CH2和CH3-,与肥大细胞和嗜碱性性粒细胞IgE的FcR,结合,介导超I型敏反应,(四)铰链区(hinge region) ：,适于V区同抗原的结合,含大量脯氨酸，富有弹性和伸展性，,利于暴露补体结合位点,铰链区,是Ig亚类划分的依据.,各功能区的作用:,VL, VH（CDR)-抗原特异性结合部位,独特型抗原决,IgG,分 子 的 四 种 亚 类,IgG1,IgG4,IgG3,IgG2,IgG 分 子 的 四 种 亚 类IgG1IgG4IgG3,二. Ig的立体结构与Ig超家族,Ig,肽链,有独特折叠,(fold),结构,属,片层( -sheet)结构,其走向与分子长轴平行. 每个Ig折叠有两个片层,每个片层包括3-5个反平行的折叠股, 两个片层中心的两个半胱氨酸残基之间有一对二硫键垂直连接,形成一”-桶状结构”.,凡,凡有Ig独特折叠结构的分子,统称为Ig超家族(immunoglobulin superfamily,IgSF),二. Ig的立体结构与Ig超家族 Ig,免疫球蛋白课件,三. Ig的J链和分泌片,三. Ig的J链和分泌片,四. Ig的水解片段,四. Ig的水解片段,第二节 抗体的异质性,抗体的的异质性,(heterogeneity)即Ig分子的不均一性。,异质性可表现在Ig,肽链,的V区，也可表现在Ig肽链的C区。,第二节 抗体的异质性抗体的的异质性(heterogene,一. 抗体V区和C区的异质性,（一）抗体V区异质性,不同的抗原表位可诱导产生同一类Ig, 但同一类Ig识别抗原的特异性不同,这种不同关键是Ig的,V区中,HVR（CDR） 的差异。,抗体V区的异质性是抗体多样性的主要原因,。,自然界,抗原多样性,是导致抗体V区异质性的主要原因。,一. 抗体V区和C区的异质性（一）抗体V区异质性,（二）,抗体C区的异质性,(1)不同抗原表位可刺激机体产生不同类型的抗体,(2)同一抗原表位刺激机体产生的抗体,其识别抗原的特异性相同,但其重链与轻链的C区可有差异。,根据抗体C区的不同可分：,1. 类(class): CH的不同,2. 亚类(subclass):铰链区的差异及H -S-S-差异）,如IgG分为IgG1,2,3,4,3. 型(type): CL的不同分：,型,型,4. 亚型(subtype):,CL的AA排列差异: 14亚型,（二）抗体C区的异质性(1)不同抗原表位可刺激机体产生不同类,Ig类、亚类、型、亚型,都是,抗体C区免疫原性的差异所决定的，即,Ig,C区抗原表位所决定,的。,应用抗不同H和L链C区的抗体可将Ig分为不同的血清型。,（1）同种型（isotype) ：,同一物种所有个体同一类Ig 共同具有的抗原特异性标志。,（2）同种异型（Allotype) ：,同一物种不同个体间Ig C区具有的不同抗原特异性标志。,同种型,同种异型,Ig类、亚类、型、亚型都是抗体C区免,二、 Ig的独特型,（idiotype，Id）,是指不同B细胞克隆产生的,抗体V区上所独有的抗原特异性标志，,在TCR/BCR的V区上也有Id。,决定,Id,的表位称为,独特位,（idiotope）。,Id,表位可刺激异种、同种异体及自体产生抗,Id,抗体,（anti-idiotype antibody ，AId,）。,每一种Ag表位可诱导产生一种特异性Ab，每一种特异性Ab都有各自的,Id,。,Id分布于Ig的VH和VL,。,Id,主要覆盖抗体的抗原结合部位，即CDR及接近这一部位的骨架区(FDR)部分,二、 Ig的独特型（idiotype，Id）,（一）Id和AId的分类,1、独特型,的分类,按Id特异性：,分个体（私有）Id和公有（交叉反应性）Id,1） indivivdal Id（IdI）：,某一特异Ab或TCR/BCR上,V区,所独有的Id,。与DJ基因编码的CDR3关系密切。,2）crossreactive Id（CRI或IdX）：,是功能上有关联的Ig或TCR/BCR上,V区所共有的Id,。,（一）Id和AId的分类 1、独特型的分,2、抗独特型,（ AId ）的分类,Bona分类法-,根据AId与Id反应的特点及AId抗体（Ab2）的功能,分： Ab2,、,Ab2,、,Ab2,、,Ab2,（1）Ab2,：,识别Ab1骨架区相关的独特型。,Ab2,与Ab1结合不影响Ag与Ab1的结合（属半抗原非抑制性,Ab2）。,可具有促进或抑制,Ab1克隆的增殖作用。,Ab2,表位,Ab2,表位,Ab1、,TCR/BCR,上的v区,2、抗独特型（ AId ）的分类Bona分类法-根据AId与,2）Ab2,：,类似原始的抗原表位,，,可模拟抗原诱导的特异性抗体产生或细胞免疫应答,(“内应像”作用），可抑制Ab1与相应抗原的结合反应。,Ab2,与模拟的抗原之间在特定部位有较高的同源性。,Ab2,可诱导出特异性与Ab1相同的Ab3。,表位,Ab2,原始的抗原,Ab2,模拟相似,原始的抗原,表位,Ab1、,TCR/BCR,上的v区,2）Ab2：表位Ab2原始的抗原Ab2模拟相似Ab1、,（3） Ab2,可识别,Ab1,上与补位相关的独特位。可抑制Ab1与相应抗原的结合，属半抗原抑制性,Ab2。也具有调节作用，,促进或抑制带有相应Id细胞克隆的增殖。,Ab2,表位,Ab2,Ab1、,TCR/BCR,上的v区,Ab2,Ab1、,TCR/BCR,上的v区,表位,（4） Ab2,Ab2,又称epibody，是一种,双特异性抗体。既可识别骨架区,上的独特位，,同时又识别自,身或外来抗原上的表位。,该独特型可能与某些自,身,免疫,性疾病相关。,Ab2,（3） Ab2Ab2 表位Ab2 Ab1、Ab2 A,（二）Id及AId网络,B1,B2,B4,B3,E,Ab1,Ab2,Ab3,Ab4,Bn,抗原,（二）Id及AId网络B1B2B4B3EAb1Ab2Ab3A,Jerne简化的免疫网络学说示意图,3,2,1,4,激发ARC细胞,（内影像组）,抗原反应细胞,（ARC组）,Id反应细胞组,（IRC组）,Id与ARC相同细胞,（非特异平行组）,外来抗原,Id,Jerne简化的免疫网络学说示意图3214激发ARC细胞抗原,（三）Id和AId网络与免疫调节,Ag,Ab1,Ab2(Ab2,),Ab2(Ab2,),Ag,Ab,Ab3,Ab3,内影像作用,（三）Id和AId网络与免疫调节AgAb1Ab2(Ab2),免疫球蛋白课件,抗Id抗体在医学中的应用,1、抗独特型抗体与疫苗,制备Ab2,作为抗原的模拟物，代替病原体抗原诱导特异性免疫应答，即所谓,抗独特型疫苗(aId vacccine),aId vacccine的优点：,（1）不带有传染性物质,（2）可大量制备抗Id的单抗,（3）某些抗Id可模拟碳水化合物性的保护性抗源决定族（而DNA重组技术无法实现）,(4)能诱导比灭活病毒更为有效的T细胞应答,（5）能诱导,抗原,决定族,特异性的,抗独特型疫苗,抗Id抗体在医学中的应用1、抗独特型抗体与疫苗,2 、抗Id抗体与某些自身免疫病 发生有关的实验研究,重症肌无力（MG）,患者体内除发现有抗AchR的自身抗体外，还可能含有针对Ach抗体的抗Id抗体（Ab2）。 Ab2可作为Ach的模拟物封闭神经肌肉接头的AchR，从而导致神经肌肉接头功能障碍，发生,MG。,2 、抗Id抗体与某些自身免疫病 发生有关的,3、抗Id抗体与肿瘤免疫治疗,Lery等应用杂交瘤技术制备了针对病人结节性淋巴瘤B细胞Ig的AId（4D6)，获得一定疗效.,鼠,骨髓,瘤细胞,结节性淋巴瘤,（B细胞瘤）,融合,淋巴细胞杂交瘤,分泌mAb（Id）,B,免疫小鼠,脾细胞（分泌AId）,鼠,骨髓,瘤细胞,融合,淋巴细胞杂交,瘤,分泌mAb,（,A,Id,4D6),体内注射,治疗,B细胞瘤,C溶解,ADCC,调理吞噬,抗,A,Id（4D6)治疗病人结节性淋巴瘤B细胞,B,死亡,B,3、抗Id抗体与肿瘤免疫治疗Lery等应用杂交瘤技术制备了,第三节,Ig的生物合成与表达(自修),第三节Ig的生物合成与表达(自修),第四节,Ig的生物学特性,一、Ig的主要生物学功能,（一）,V区的功能,1、识别结合抗原,：发挥体液免疫效应,如:,抗毒素(Ab) +毒素-中和毒素的毒性,抗病毒抗体+病毒-阻止病毒感染,2、,免疫调节,：,Id和AId网络,3、超抗体活性,指抗体可在抗原结合部位以外的部位（V区的骨架区）与多种配体结合，从而发挥多种功能。,第四节 Ig的生物学特性一、Ig的主要生物学功能,（二）,C区的功能,1、激活补体,IgM/IgG1,2,3,抗体+细胞(菌)+补体-溶解细胞(菌),2、结合细胞表面的FC受体,-,介导其它效应,（1）调理作用,（opsonization）:,（2）ADCC作用,(Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity):,有FC受体的杀伤细胞(M、中性粒、NK)，,借助识别FC段杀伤被,IgG,包被的靶细胞。,（3）Fc,R介导型超敏反应,（4）过胎盘及粘膜,（二） C区的功能1、激活补体IgM/IgG1,2,3,二、,各类Ig的特性与作用,IgG：,1.,含量最高、 分布最广,2.,再次应答的主要Ab,3.,活化补体、,4.,结合吞噬细胞上的FcR介导,调理吞噬,5.抗感染、中和毒素的主要Ab,6.过胎盘,7.结合SPA,8.介导ADCC,二、各类Ig的特性与作用IgG：,IgM,1. 分子量最大,（巨球蛋白）,2. 五聚体形式存(血清）,3. 产生最早,4. 活化补体能力最强,5. 天然的血型抗体,6. 血管内抗感然Ab,（早期防御感染）,7. 膜Ig-BCR成分,IgA,两种形式存在,单体,-,IgA,（血清型）,二聚体,-,S,IgA,（分泌型）,2,S,IgA可,过粘膜、婴儿可经初乳获得,3,S,IgA是,粘膜、腺体分泌液中主要Ab-发挥粘膜局部免疫作用,IgM1. 分子量最大IgA两种形式存在,IgD,1 . 铰链区最长、半寿期较短（3天）,2. mIgD是成熟B细胞的BCR,IgE,1血清含量最低,2亲细胞性强,3介导型超敏反应,4抗寄生虫感染,IgD1 . 铰链区最长、半寿期较短（3天）IgE1血清含,第五节,Ig基因超家族,凡有与Ig结构（独特折叠结构）相似，遗传基因同源的蛋白质分子,统称为Ig超家族,(immunoglobulin superfamily, IgSF)。,编码IgSF的基因称为Ig基因超家族。,IgSF种类繁多、分布广泛、功能各异。,如：,Ig、MHC分子、 Ag受体、某些,CD分子、黏附分子、,IgFcR、CKR等,第五节 Ig基因超家族 凡有与Ig结构（,一代Ab (pAb) ：,人工免疫技术制备,二代Ab(mAb) ：,杂交瘤技术制备,三代Ab(基因工程Ab)：,分子生物学技术制备,第六节,人工,制备Ab,技术,一代Ab (pAb) ：人工免疫技术制备 第六节 人,人工抗体（Ab）技术,(1),(2),(1),+,调取mAb基因,基因改造,改造基因,转染细胞,表达,Genetic engineering antibody,(3),人工抗体（Ab）技术(1)(2)(1)+调取mAb基因基因改,一. 多克隆抗体(Polyclonal antibody),1. 概念,给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物, 它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的, 称为多克隆抗体.,免疫血清,抗原,获得,接种,1,2,4,3,B1,B2,B3,B4,(含Ab1,2,3,4等),一. 多克隆抗体(Polyclonal antibod,2. 多克隆抗体的应用,免疫学诊断,被动免疫治疗和紧急预防,3.存在问题,特异性差, 用于免疫学检测容易出现交叉反应,异质,性问题,容易出现过敏,二. 单克隆抗体(Monoclonal antibody,McAb),1. 概念:,由识别一种Ag表位的B细胞克隆产生的同源性Ab，称,mAb。,可由杂交瘤技术生产。,1975年，Kohler和Milstein杂交瘤技术的建立,使抗体技术得到了广泛的应用和发展-,细胞工程产生的鼠源单克隆抗体,Georeges Kohler,Cesar Milste,二. 单克隆抗体(Monoclonal antibody,基本原理,致敏的B淋巴细胞能分泌特异性抗体，但这些细胞不能在体外存活。,骨髓瘤细胞可在体外大量繁殖，但不能分泌特异性的抗体.,将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，则融合的杂交瘤细胞既具有肿瘤细胞易繁殖的特性，又具有B淋巴细胞能分泌特异性抗体的能力。,克隆化的杂交瘤细胞能够分泌针对单一抗原决定簇的单克隆抗体。,基本原理致敏的B淋巴细胞能分泌特异性抗体，但这些细胞不能在体,2. B细胞杂交瘤的类型,骨髓瘤细胞,B细胞,小鼠-,-,小鼠,大鼠-大鼠,小鼠-人,人-人,2. B细胞杂交瘤的类型骨髓瘤细胞 B细胞,3. 杂交瘤技术流程,阳性克隆筛选,阳性克隆,阳性克隆,Ab,检测鉴定,Ag免疫,小鼠,脾细胞,骨髓瘤细胞,PEG,融合,杂交瘤细胞存活,死亡,死亡,未融合的脾细胞,融合的杂交瘤细胞,未融合的瘤细胞,融合结果,接种小鼠,腹腔制备,单抗,扩增培养,制备单抗,HAT,选择培养,冻,存,3. 杂交瘤技术流程阳性克隆筛选阳性克隆阳性克隆Ab检测鉴,(2) 细胞融合,融合后细胞的类型:,未融合的脾细胞,杂交瘤细胞,未融合的瘤细胞,杂交瘤细胞,PEG,脾细胞,骨髓瘤细胞,融合,Ag,免疫,小鼠,(2) 细胞融合融合后细胞的类型: 杂交瘤细胞PEG脾细胞骨,4. 单克隆抗体的特性,结构均一、型别相,纯度高、特异性强,效价高、可体外连续生产、,诊断上-避免交叉反应,治疗上-制备生物导弹,4. 单克隆抗体的特性 结构均一、型别相,5 .单克隆抗体在医学上的应用,用作诊断试剂,1)检测细胞表面分子，区分不同分化 阶段的细胞， 如鉴别淋巴细胞亚群。,2)鉴定病原体，准确诊断传染病。,3) 用于各种肿瘤的诊断和分型,4)各种细胞因子的含量测定,5) 用于测定体内激素含量，判 断内 分泌的功能状态,5 .单克隆抗体在医学上的应用用作诊断试剂,用作研究工具,纯化抗原,分析和探查抗原结构,分析抗原决定簇分子的功能,用于疾病的治疗,抗T细胞单抗，用于移植排斥反应的防治,抗细胞因子单抗用于自身免疫性疾病的治疗,抗肿瘤单抗用于肿瘤的,生物导向,治疗,用作研究工具,异种抗体反应,鼠源性单抗用于人体，抗-单抗的产生.,导致异源性蛋白超敏反应.,单抗体用于免疫治疗存在的问题,异种抗体反应单抗体用于免疫治疗存在的问题,三. 基因工程抗体,(Genetic engineering antibody),概念：,根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后构建成抗体基因载体,导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。,三. 基因工程抗体(Genetic engineerin,基因工程抗体类型,主要包括,嵌合抗体（chimeric antibody）,改型抗体（reshaped antibdy）,小分子抗体(minomoleculay Ab)包括:,Fab片段Ab,Fv抗体及 单链抗体（Single chain Fv antibody,scFv）,双链抗体（Diabody）,双价抗体或双特异性抗体（bispecific antibody）,重组Ab-免疫毒素 等,基因工程抗体类型主要包括,(一)改造鼠源性抗体,1、嵌合抗体 (chimeric antibody),从杂交瘤细胞分离出功能性Ig可变区(V)基因，与人Ig恒定区(C)基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体。,(一)改造鼠源性抗体1、嵌合抗体 (chimeric ant,嵌合抗体,免疫球蛋白,基因载体的构建,H链嵌合载体,L链嵌合载体,共转染细胞,抗体分泌细胞,Pr 鼠VH 人 CH Pr 鼠VL 人 CL,启动子,1984（Mo rrison）,鼠V,L,人C,L,人C,H,鼠V,H,鼠V,L,鼠源McAb 人Ig,V区基因 -C区基因,嵌合体,嵌合抗体免疫球蛋白H链嵌合载体L链嵌合载体共转染细胞抗体分泌,嵌合抗体,特点：,1）保留鼠单抗特异性,2）降低对人体免疫原性,3）体内半衰期延期,4）有更强活性,5）可更换Ig类、型、亚型,6）体外传代稳定,7）产量高、商业价值高,抗乳Ca,抗肺Ca,抗肺Ca,抗结肠Ca,抗ECA,抗HBsAg,抗TCR-,、,抗乙恼V,等等,产品,嵌合抗体特点： 1）保留鼠单抗特异性 抗乳Ca产品,2、 改型抗体,（reshaped Ab）或,人源化抗体,(humanized Ab),用,CDR移植技术，将人-鼠V区IgCDR置换，保留人FR,产生的抗体,，,亦称为CDR移植抗体。即,改型抗体或人源化抗体。,改型抗体对人体免疫原性比嵌合抗体显著减弱。,鼠单克隆抗体,人抗体,人源化抗体（改型抗体）,CDR序列,CDR序列,2、 改型抗体（reshaped Ab）或人源化抗体,免疫球蛋白课件,特点：,1）最大限度克服鼠源单抗在,人体的免疫原,2）应用价值高如：治疗白血病,缺点：,技术难度大,特点：,3、,小分子抗体,能与抗原结合的抗体小分子片段称为小分子抗体。,包括Fab、Fv及单链抗体（Sc Fv）、双特异性抗体、单区抗体（H链V区单链）等。,优点:,分子量小，免疫原性弱, 渗透力强。,3、 小分子抗体 能与抗原结合的抗体小分,(1)Fab片段抗体：,Fab片段由,H链VH-CH1段和完整L链,通过二硫键形成的异二聚体，仅含一个抗原结合位点。(用木瓜水解酶消化抗体IgG可获得2个Fab片段)。,(1)Fab片段抗体： Fab片段由H链VH-CH1段,免疫球蛋白,基因载体的构建,H链表达载体,L链表达载体,共转染细胞,抗体分泌细胞,Pr VH CH1 Pr VL CL,VH,VL,CL,-S-S-,CH1,Fab 抗体分子的制备,免疫球蛋白H链表达载体L链表达载体共转染细胞抗体分泌细胞Pr,(2)单域抗体,(,single domain antibody,),仅有VH或VL单一功能结构域组成，,为单体Ab分子1/12。,VH,VL,仅有VH-CH1段组成，为单体Ab分子1/6。,(3)Fv片段,VH,CH1,(2)单域抗体(single domain antibody,用适当的接头蛋白基因将L链和H链的V区基因连接起来，,转染表达,使之形成单一的多肽链，称为单链抗体（single chain Fv, ScFv）,。,完整Ab分子1/6。,（4） 单链抗体,(single chain antibody),优点:,分子量小，免疫原性弱, 渗透力强。,缺点:,是无抗体C区，不能介导抗体的其它生物学效应。,用途:,可用于肿瘤的药物导向治疗,中和毒素治疗,肿瘤的影像分布诊断,制备诊断用蛋白生物芯片,VH,VL,用适当的接头蛋白基因将L链和H链的V区基因连,5、最小识别单位(,minimal recognition units,MRU,),仅有单个CDR构成，分子量约为完整Ab分子的1%。,6、双价小分子抗体,将连接ScFv的接头蛋白缩短,VH,VL,5、最小识别单位(minimal recognition u,7、双特异性抗体,(bispecific antibody,BsAb,),BsAb也称双功能抗体或杂交抗体，为非天然抗体。其两个抗原结合部位具有不同的特异性，因此，化学结构上虽是双价的，结合抗原的功能却是单价的。,BsAb用途：,由于其双特异性，它可以同时与两种抗原发生发应并使之交联，因而可介导标记物与靶抗原结合，或使某种效应因子定位于靶细胞，在介导肿瘤的细胞杀伤中尤为有用。,7、双特异性抗体 (bispecific an,BsAb制备方法,1)化学交联BsAb,BsAb制备始于化学交联。分别分离纯化两种亲本单抗,采用还原剂使其解链,获得单价抗体。之后采用异双功能交联剂,把两种具有不同抗原特异性的单价抗体或其片段交联起来。,2)细胞工程BsAb,通过细胞融合的方法制备BsAb。可将分泌单抗的杂交瘤与经免疫的脾细胞融合，或使两种分泌不同特异性单抗的杂交瘤彼此融合。,3)基因工程BsAb,多采用抗体分子片段，如Fab、Fv或ScFv，经基因操作修饰后，或体外组装为BsAb，或直接表达分泌型的BsAb。,BsAb制备方法1)化学交联BsAb,BsAb作用原理,BsAb作用原理,BsAb介导的杀伤作用机制,（a), BsAb桥连效应细胞和靶细胞；(b),连接的触发分子启动细胞毒反应；,(c) , 效应细胞对靶细胞产生致死性杀伤反应。,抗HER2/neu抗CD16 BsAb,BsAb,CD16,HER2/neu,NK,细胞,肿瘤细胞,BsAb介导的杀伤作用机制抗HER2/neu抗CD16 B,（二）噬菌体抗体,(phage antibody),将体外克隆的抗体基因片段插入噬菌体载体，转染相应细菌进行表达，然后用抗原筛选即可获得特异的单克隆噬菌体抗体。利用这一技术可以得到完全人源性的抗体。,（二）噬菌体抗体(phage antibody),(三),胞内抗体,（intrabody）,指借助基因工程手段，获得仅在细胞内表达并作用于胞内靶分子的抗体或其某一抗体片断（多为ScFv)。,制备原理：,将抗体片段基因连接,特定,细胞器的定位序列，编码出的,ScFv被引导进入特定细胞部位。通常是在ScFv的N段连接引导进入特定细胞部位的定位信号肽，在C段连接滞留信号肽，使ScFv,抗体,滞留,在相应细胞器中特异性识别某一基因产物发挥其作用， 干扰该基因产物的生物活性。,(三) 胞内抗体（intrabody） 指借助基,(四)产生嵌合抗体的小鼠 和产生人抗体的小鼠,1、双特异性抗体（ BsAb）,2、抗原化抗体(antigenized antibody),3、,Ab-融合蛋白和免疫毒素(immunotoxin),4、,催化抗体(catalytic antibody),转基因鼠,（自修了解）,（五）基因工程抗体的衍生技术,(四)产生嵌合抗体的小鼠 和产生人抗体的小鼠1、,Ab-融合蛋白,抗肿瘤单抗基因-毒素基因,抗纤维蛋白 纤维蛋白,Fab段基因-溶酶基因,Ab-酶,融合蛋白,溶血栓治疗,Ab-毒素,融合蛋白,肿瘤治疗,Ab-融合蛋白抗肿瘤单抗基因-毒素基因,借Ab特性提,高,Ab,或药物,的效应功能,偶联细胞毒物质,抗体Fc突变,（构建补体位点）,抗体融合蛋白,细胞内抗体,双特异性抗体,抗体药物应用,借Ab特性提偶联细胞毒物质抗体Fc突变抗体融合蛋白细胞内抗体,抗体药物的作用机理,直接效应 诱导凋亡,抑制增殖,阻断生长因子或生长因子受体,干扰血管生成,间接效应 依赖补体的细胞毒（CDC）,依赖抗体的细胞毒（ADCC),作为毒素、放射性同位素和细胞毒药物的载体,形成抗独特型抗体,通过双特异性抗体靶向效应细胞,抗体药物的作用机理直接效应 诱导凋亡,抗体偶联细胞毒物质,抗体偶联细胞毒物质,Ab-CKs融合蛋白,Ab-CKs融合蛋白,抗体名称,抗体种类,靶向抗原,适应症,批准日期,OKT3,鼠单抗,CD3,移植排斥,1986,Panorex,鼠单抗,17-1A,大肠癌,1995（德国）,ReoPr o,人-鼠嵌合Fab,血小板受体ba,冠心病,1994,Zenapax,人源化抗体,CD25,移植排斥,1997,Rituxan,人-鼠嵌合抗体,CD20,淋巴瘤,1997,Simulect,人-鼠嵌合抗体,CD25,移植排斥,1998,Remicade,人-鼠嵌合抗体,TNF-,炎症性肠病类风湿关节炎,1998,1999,Herceptin,人源化抗体,HER-2,乳腺癌,1998,Synagis,人源化抗体,RSV F蛋白,RSV感染,1998,Thymogloblin,兔多抗,移植排斥,1998,Mylotarg,人源化抗体化疗药物交联物,CD33,淋巴瘤,2000,Campath,人源化抗体,CD52,淋巴瘤,2001,已批准上市的治疗性单抗,抗体名称抗体种类靶向抗原适应症批准日期OKT3鼠单抗CD,谢 谢 大 家,Thank you,谢 谢 大 家Thank you,