抗核抗体检测和临床意义培训课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,抗核抗体检测和临床意义,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,抗核抗体检测和临床意义,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,抗核抗体检测和临床意义,抗核抗体检测和临床意义,抗核抗体检测和临床意义,风湿免疫性疾病相关自身抗体,抗核抗体谱（ANAs）,类风湿关节炎相关抗体(RF, 抗CCP等),抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）,抗自身免疫性肌炎谱,自身免疫性肝病相关抗体谱,抗磷脂抗体谱,抗核抗体检测和临床意义,2,风湿免疫性疾病相关自身抗体抗核抗体谱（ANAs）抗核抗体检测,抗核抗体谱检测的意义,有助于,弥漫性结缔组织病,的分类和诊断,抗Sm抗体,是SLE的标记抗体；,抗Scl-70抗体是SSc的标记抗体；,抗Jo-1抗体是PM/DM的标记抗体；,观察疾病活动度和治疗反应,抗dsDNA抗体,研究发病机理,抗核小体抗体、抗dsDNA抗体,抗核抗体检测和临床意义,3,抗核抗体谱检测的意义有助于弥漫性结缔组织病的分类和诊断抗核抗,基本概念,ANA荧光核型,ANAs中的常见抗体,抗核抗体检测和临床意义,4,基本概念抗核抗体检测和临床意义4,抗核抗体,自身抗体,：指抗自身组织、器官、细胞及其成分的抗体,ANA,：指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。ANA存在一个谱。,ANA新概念,：抗核酸(Nucleic acid)和核蛋白(Nucleoprotein)抗体总称,某些核抗原成分在核仁和,胞浆内比核质内更丰富,(如SSA/RO,Jo-1,rRNP等),抗核抗体检测和临床意义,5,抗核抗体自身抗体：指抗自身组织、器官、细胞及其成分的抗体抗核,ANA检测方法-IIF,法,ANA滴度,ANA核型,抗核抗体检测和临床意义,6,ANA检测方法-IIF法ANA滴度抗核抗体检测和临床意义6,ANA滴度的意义,结缔组织病的粗筛,（1:160）,阳性标本还需进一步识别,感染、肿瘤及5%正常人可出现低滴度阳性,ANA阴性基本可以除外SLE,ANA滴度与疾病活动性无明确相关性,抗核抗体检测和临床意义,7,ANA滴度的意义结缔组织病的粗筛（1:160）抗核抗体检测,荧光显微镜下ANA的染色型别,均质型（H）,核膜型（M),斑点型（S）,核仁型（N）,着丝点型（ACA）,胞浆型（C）,混合型,抗核抗体检测和临床意义,8,荧光显微镜下ANA的染色型别均质型（H）抗核抗体检测和临床意,均 质 型,(H),抗,组蛋白,抗,ds/ssDNA,抗,核小体,主要出现在,SLE,中,抗核抗体检测和临床意义,9,均 质 型 (H,均 质 型,(H),抗核抗体检测和临床意义,10,均 质 型 (H)抗核抗体检测和临床意义10,核膜 型,(M),主要与抗,dsDNA,有关,与,抗原底物片固定方法和备制过程,有关,出现在,SLE,中,部分与抗核包膜蛋白有关,抗板层素,抗gp210,出现在PBC中,抗核抗体检测和临床意义,11,核膜 型 (M)主要与抗dsDNA有关抗核抗体检测和临床,核膜 型,(M),抗核抗体检测和临床意义,12,核膜 型 (M)抗核抗体检测和临床意义12,与抗,ENA,成分有关,抗,Sm,抗,RNP,抗,SS-A,抗,SS-B,出现在,SLE、MCTD、pSS、SSc、PM/DM,等,斑 点 型,(S),抗核抗体检测和临床意义,13,与抗ENA成分有关斑 点 型 (S)抗核抗体检测,斑 点 型,(S),抗核抗体检测和临床意义,14,斑 点 型 (S)抗核抗体检测和临床意义14,与抗,核仁蛋白,有关,抗,Scl-70,抗,RNA多聚酶I,抗,PM-Scl,出现在,SSc,中,核 仁,型,(N),抗核抗体检测和临床意义,15,与抗核仁蛋白有关核 仁 型 (N)抗核抗体检测和临床,核 仁,型,(N),抗核抗体检测和临床意义,16,核 仁 型 (N)抗核抗体检测和临床意义16,与抗,着丝点,染色质有关,存在于有丝分裂期,出现在,SSc,、,CREST综合征等,中,着 丝 点,型,(ACA),抗核抗体检测和临床意义,17,与抗着丝点染色质有关着 丝 点 型(ACA)抗核,着 丝 点,型,(ACA),抗核抗体检测和临床意义,18,着 丝 点 型(ACA)抗核抗体检测和临床意义1,与抗,胞浆成分,有关,抗,核糖体P蛋白（rRNP）,：出现在,SLE,中,抗,合成酶,：,Jo-1、PL-12、PL-7、OJ、EJ,抗,信号识别颗粒（SRP),抗,线粒体,：出现在,PBC,中,抗高尔基体,抗溶酶体,等等,胞 浆 型,(C),见于,PM/DM,抗核抗体检测和临床意义,19,与抗胞浆成分有关 胞 浆 型,胞 浆 型,(C),抗核抗体检测和临床意义,20,胞 浆 型 (C)抗核抗体检测和临床意义20,ANA荧光核型小结,均质型（H）：,像大饼，SLE相关,核膜型（M)：,像圈圈，SLE相关,斑点型（S）：,像藕片，抗ENA,核仁型（N）：,像纽扣，SD相关,着丝点型（ACA）：,像满天星，抗ACA,胞浆型（C）：,像空心大饼,SLE PM/DM PBC相关,混合型：,稀释后检测有助于区分,抗核抗体检测和临床意义,21,ANA荧光核型小结均质型（H）：像大饼，SLE相关抗核抗体检,抗核抗体谱,（ANAs）,ANAs,抗核不溶成分,抗核可溶成分,（抗ENA）,抗染色体DNA,蛋白,抗核仁抗体,抗DNA,抗体,抗核小体抗体,抗组蛋白,H,1,H,2,A, H,2,B, H3,H4,抗Sm,U,1,RNP,SSA,SSB,抗Scl-70,Jo-1,PM-1,抗rRNP,PCNA.,dsDNA,ssDNA,抗着丝点抗体,（ACA),抗5sRNA,抗核抗体检测和临床意义,22,抗核抗体谱（ANAs）ANAs抗核不溶成分 抗DNA抗体抗S,抗dsDNA检测方法,以,短膜虫,或,马疫锥虫,为底物的间接免疫荧光法(IIF) ：,1:5,短膜虫或马疫锥虫的动基体,内含有,天然纯dsDNA,，未经,人工处理，不含,组蛋白与,ssDNA，,抗原性纯一特异。,优点：,特异性好,抗核抗体检测和临床意义,23,抗dsDNA检测方法以短膜虫或马疫锥虫为底物的间接免疫荧光法,抗dsDNA检测方法,酶联免疫吸附法（ELISA）:,100IU/ml,优点,：,敏感性最高,缺点：,过于敏感，同时可能检测到,ssDNA抗体,和,低亲和力dsDNA抗体,而,这两种致病力均不强,放射免疫法(Farr):,20%,优点：,对,高亲和度DNA抗体,的检测优于CL-IIF,缺点：,具有放射性，对技术人员身体造成一定影响,蛋白印迹法（WB）,缺点：,dsDNA抗原在纯化包备过程中可变性解链，变成ssDNA,导致假阳性结果,不同方法检测SLE患者抗dsDNA抗体的结果：everything is possible,至少用两种方法做（报告结果时注明方法学）,互为补充。如：IIF法+ ELISA法,抗核抗体检测和临床意义,24,抗dsDNA检测方法酶联免疫吸附法（ELISA）: 100,抗核抗体检测和临床意义,25,抗核抗体检测和临床意义25,抗核抗体检测和临床意义,26,抗核抗体检测和临床意义26,抗dsDNA抗体临床意义,SLE 的血清特异性抗体,多有致病性（IgG型），与亲和力（高）有关,与LN与SLE疾病活动性相关，活动期达90,可用于SLE 疾病活动期判断药物疗效观察,与SLE,急性皮疹,、血管炎、浆膜腔炎、白细胞减少等有关,抗核抗体检测和临床意义,27,抗dsDNA抗体临床意义SLE 的血清特异性抗体抗核抗体检测,抗核抗体检测和临床意义,28,抗核抗体检测和临床意义28,抗组蛋白抗体（AHA）（酶联免疫吸附法,X2SD,),可出现于多种结缔组织病，,不具有诊断特异性,SLE ：50%,活动期SLE 可达90.2%,与,LN相关,，,与SLE疾病活动性,存在一定意义的,相关,性,药物性狼疮（DIL）：90%,如：异烟肼、苯妥因钠、青霉胺、雌激素等,仅有AHA而无其他ANA，强烈支持DIL,其他结缔组织病：23-30%,如：RA、PBC、SSc等,抗核抗体检测和临床意义,29,抗组蛋白抗体（AHA）（酶联免疫吸附法X2SD)可出现,核小体是真核细胞染色质的基本复制单位，由组蛋白与DNA组成。,参与SLE发病机制：,多克隆B细胞活化剂,产生ANuA，先于其他ANA,促进抗dsDNA与AHA形成,参与LN的发生,抗核小体抗体（ANuA）,抗核抗体检测和临床意义,30,抗核小体抗体（ANuA） 抗核抗体检测和临床,抗核小体抗体临床意义,SLE标记性/高特异性自身抗体,敏感性：58%-66%,（优于抗dsDNA及抗Sm）,特异性：98%-100%,（与抗dsDNA相当）,用于SLE的早期诊断,ANuA 的产生早于抗dsDNA、AHA,抗dsDNA阴性者有1/41/2 ANuA阳性,与LN相关，用于SLE疾病活动性监测,抗核抗体检测和临床意义,31,抗核小体抗体临床意义抗核抗体检测和临床意义31,ANuA、抗dsDNA、AHA联合检测意义,抗核抗体检测和临床意义,32,ANuA、抗dsDNA、AHA联合检测意义抗核抗体检测和临床,抗ENA抗体,e,xtractable,n,uclear,a,ntigen,可提取性核抗原,成分：,核酸与核蛋白，不含染色质成分,功能：参与细胞内DNA复制、RNA转录、蛋白翻译,合成,来源：无种属差异，有组织不均一性,理化特性：对,温度,和,RNA酶,敏感,（U1RNP、SS-A）,意义：抗ENA抗体是ANAs中,范围最广,、,最为重要,的,一簇抗体，与,疾病活动性大多无相关,抗核抗体检测和临床意义,33,抗ENA抗体 extractable nuclear an,抗ENA抗体检测方法,免疫双扩散法(ID),对流免疫电泳法( CIE),免疫印迹法(IBT),酶联免疫吸附法(ELISA),蛋白芯片（Protein chip）,抗核抗体检测和临床意义,34,抗ENA抗体检测方法免疫双扩散法(ID)抗核抗体检测和,抗Sm抗体与抗U1RNP抗体,靶抗原,：,位于,细胞核内,的一组含尿嘧啶丰富的核糖核蛋白，,Sm和U1RNP是同一分子复合物中的不同位点,抗核抗体检测和临床意义,35,抗Sm抗体与抗U1RNP抗体靶抗原：位于细胞核内的一组,抗Sm抗体与抗U1RNP抗体,抗Sm：SLE的,标记性抗体,，是前瞻性及回顾性诊断的指标。,阳性率低： SLE （30%）,抗U1RNP：多种CTD均可出现，与手指肿胀、雷诺现象、肌炎、指端硬化等相关，但肾炎发生率低。,阳性率：40 - 60%，其中SLE(30-40%) , SSc(14%) , pSS (12%) , PM/DM (15%),高滴度抗U1RNP+抗Sm-,MCTD,抗U1RNP+,抗Sm,+,SLE,抗U1RNP-,抗Sm,+,实验室误差? U1RNP丢失 ?,抗核抗体检测和临床意义,36,抗Sm抗体与抗U1RNP抗体抗Sm：SLE的标记性抗体，是前,抗rRNP抗体,靶抗原：,胞浆,中60S核糖体大亚基上的磷酸化蛋白,抗核抗体检测和临床意义,37,抗rRNP抗体靶抗原：胞浆中60S核糖体大亚基上的磷酸化蛋白,抗rRNP抗体,SLE的,高度特异性抗体,，与,SLE脑病,相关,常在SLE,活动期,存在,但不会随病情的缓解立即消失,可持续1-2年后才转阴。,阳性率：24%,可出现在SLE,早期,（ANA及抗dsDNA阴性）,抗核抗体检测和临床意义,38,抗rRNP抗体SLE的高度特异性抗体，与SLE脑病相关抗核抗,抗SSA与抗SSB抗体,靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相邻结构,在不同的细胞周期，在细胞内的定位不同,（,细胞核内和胞浆中,均可存在）,pSS的SS-A存在于,细胞核,内,SLE的SS-A存在于,胞浆,中,SS-B主要位于,细胞核,内,45KD,47KD,48KD,抗核抗体检测和临床意义,39,抗SSA与抗SSB抗体靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相,抗SSA与抗SSB抗体,抗SS-A ：,结缔组织病中出现,频率最高,的抗体（ 60,-75%），见于,pSS（,75%）,SLE（,25%）,RA,（,10%）,SSc,（,24%）,PBC（20%）等,抗SSB：常与抗SSA相伴出现，诊断,pSS更特异,，见于,pSS（40%）、SLE （10%）,临床意义：与新生儿狼疮和先天性心脏传导阻滞、,平,滑肌受累,、光过敏、血管炎、,皮损,、紫癜、,淋巴结肿大、WBC减少有关,ANA阴性的SCLE：常为抗SSA 抗体阳性。,抗核抗体检测和临床意义,40,抗SSA与抗SSB抗体抗SS-A ：结缔组织病中出现频率最高,抗核抗体检测和临床意义培训课件,抗核抗体检测和临床意义,42,抗核抗体检测和临床意义42,抗Jo-1抗体(抗,PL-1,抗体),靶抗原：组氨酸tRNA合成酶,胞浆,中的磷酸蛋白,抗核抗体检测和临床意义,43,抗Jo-1抗体(抗PL-1抗体)靶抗原：组氨酸tRNA合成酶,抗Jo-1抗体(抗,PL-1,抗体),PM,/DM的,标记抗体,，阳性率20-30%,抗体效价与,疾病活动性,相关,抗Jo-1抗体综合征,：急性发热,对称性关节炎,技工手,雷诺现象,肌炎（相对轻） ,肺间质病变,其他抗合成酶抗体：抗,PL-7、,抗,PL-12、,抗,OJ、,抗,EJ,抗核抗体检测和临床意义,44,抗Jo-1抗体(抗PL-1抗体)PM/DM的标记抗体，阳性率,抗ScL-70抗体,靶抗原：DNA拓朴异构酶I的降解产物,主要存在,核仁,中,SSc的,标记抗体，,阳性率20-30%,多见于,dSSc,，病情进展快，提示,预后不良,与,ILD,、,弥漫性皮肤硬化,有关，而,PAH,少见,抗核抗体检测和临床意义,45,抗ScL-70抗体靶抗原：DNA拓朴异构酶I的降解产物抗核抗,主要靶抗原：着丝点蛋白-B,多见于,ISSc,，病程缓慢，提示,预后较好,CREST综合征,：软组织钙化（C）,雷诺现象（R）,食道功能障碍（E）,指端硬化（S）,毛细血管扩张（T），但,并非标记抗体,，也见于孤立性雷诺现象,、SS、PBC、AIH等,国外文献：与PAH相关，而ILD少见,中国人群：,未发现与PAH相关,，,但ILD少见,白伊娜，王迁等.中国系统性硬化症患者硬皮病相关自身抗体的检测及其临床意义. 中华微生物学和免疫学杂志.2011（5）:452-455.,抗着丝点抗体,(ACA),抗核抗体检测和临床意义,46,主要靶抗原：着丝点蛋白-B白伊娜，王迁等.中国系统性硬化症患,Take Home Massage,ANA荧光核型对抗体性质范围有一定提示作用，,尤其,在靶抗原阴性时。,ANA阴性而靶抗原阳性主要见于抗,胞浆成分,抗体，如：SS-A、Jo-1、rRNP、线粒体等。,抗,核仁,型抗体常与,SSc,有关。,抗,均质,型或,核膜,型抗体常与,SLE,有关。,抗核抗体检测和临床意义,47,Take Home MassageANA荧光核型对抗体性质范,Take Home Massage,抗dsDNA：SLE,特异性抗体,，与LN及疾病活动度,有关，至少,两种方法,联合检测（如：,IIF法+ ELISA法）。,抗核小体,、,抗组蛋白,、,抗dsDNA,三抗体阳性者强烈,提示增殖性LN。,与疾病活动性相关的抗体：,抗dsDNA、抗核小体、,抗组蛋白、抗Jo-1、抗rRNP,与预后相关的抗体：,抗Scl-70（差）、ACA（好）,抗核抗体检测和临床意义,48,Take Home Massage抗dsDNA：SLE特异性,案例1,女性，34岁,游走性多关节痛，雷诺现象半年,RF 56U/L；抗CCP抗体阴性；,ANA 1：320,胸部CT：轻度肺间质病变,诊断？治疗？,（核仁型）,UCTD ILD, 发展为,SSc可能性大,Pred+CTX,抗核抗体检测和临床意义,49,案例1女性，34岁（核仁型）UCTD ILD 发展为 S,案例2,男性，50岁,双腕关节炎、雷诺现象半年,ANA全套：阴性；抗CCP、RF：阴性,胸部CT：轻度肺间质病变,右腕关节MRI：骨髓水肿和滑膜炎,诊断？,复查：ANA阴性，抗Jo-1弱阳性,诊断：抗Jo-1抗体综合征,Pred+T,抗核抗体检测和临床意义,50,案例2男性，50岁复查：ANA阴性，抗Jo-1弱阳性抗核抗体,案例3,女性 32岁 手指关节痛2月,ANA（+）S1:80,抗SSA（+）135 抗Ro52（+）110,三大常规正常； ESR CRP 正常；补体正常；RF 87IU/ml；,诊断？ 治疗？,抗核抗体检测和临床意义,51,案例3女性 32岁 手指关节痛2月 抗核抗体检测和临床意义5,CTD, SLE待随诊，重用HCQ,抗核抗体检测和临床意义,52,CTD SLE待随诊，重用HCQ抗核抗体检测和临床意义52,案例4,女性，40岁,4年前多浆膜腔积液、低补体血症、ANA 1：320、抗SS-A+、抗SS-B+，诊断为“系统性红斑狼疮可能性大”，予“pred+CTX”治疗好转后“pred 10mg qod +HCQ”维持。,15天前新发面部皮疹（丘疹鳞屑型）、脱发；,尿常规：PRO 阴性；尿四蛋白：轻度增高；,补体下降（C3 50mg/dl C4 7.4mg/dl）；,抗dsDNA（IF） 1：320 抗核小体 + 抗组蛋白+；,诊断？治疗？,SLE，SLEDAI 8分， pred1mg/kg/day+CTX,抗核抗体检测和临床意义,53,案例4女性，40岁SLE，SLEDAI 8分， pred1m,案例5,女，28岁，面部红斑，尿蛋白（+） ；,ANA 1:1280H；抗dsDNA（IF/ELISA）： 1:40/800 ； C3 40mg/dl C4 6mg/dl ；,诊断？治疗？,治疗半年后蛋白尿（+）；,ANA1:320H；抗dsDNA （IF/ELISA）：1:20/400 ；C3 66mg/dl C4 8mg/dl；,治疗？,治疗1年后蛋白尿（-）；,ANA1:160H；抗dsDNA （IF/ELISA）：阴性/,250,；C3 86mg/dl C4 12mg/dl；,治疗？,抗核抗体检测和临床意义,54,案例5女，28岁，面部红斑，尿蛋白（+） ；抗核抗体检测和,Thanks,抗核抗体检测和临床意义,55,Thanks抗核抗体检测和临床意义55,