细菌的检查方法PPT课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,细菌学诊断,标本采集和,送检六原则,避免杂菌污染,不同期不同标本,用抗生素以前,采集病变明显部位,标本作好标记,标本必须新鲜,1,显微镜放大法：,普通光学显微镜：,0.25um 0.25mm,电子显微镜：透射电镜、扫描电镜,染色法,病原菌检测,细菌形态与结构检查,2,结晶紫,1min,卢戈碘,1min,95%,乙,醇,30s,稀释复红,30s,的意义,1.,将细菌区分为,2,大类,Gram Stain,2.,指导选择抗菌药物,3.,用于细菌致病性等方面的研究,3,直接涂片镜检,形态和染色性具有特征的致病菌，直接涂片染色后镜检有助初步诊断。,痰液 抗酸性细长杆菌 结核杆菌,脑脊液,淤血点 肾形,G-,双球菌 脑膜炎奈瑟菌,脓液,G+,葡萄串状球菌 葡萄球菌,病原菌检测,4,分离培养和鉴定,确诊细菌感染性疾病最可靠的方法（金标准,),有助于选用抗菌药物及评价疗效。,普通培养法（需氧培养法）,高渗培养法,厌氧培养法,病原菌检测,5,临床标本,预处理,增 菌,接种培养基，分离单个菌落,各种鉴定试验,涂片染色,快速诊,断试验,生化试验,血清学实验,涂片染色,药敏试验,动物试验,初步诊,断报告,最终诊断报告,一般检验程序,病原学诊断,6,分离培养和鉴定,培养特征：,营养、生长条件、,菌落特征,形态特征：,细菌形态、排列、,染色性,生化反应：,检测细菌对各种基质（糖类和蛋白质）的代谢作用和代谢产物的差异，借以区别和鉴定细菌。,病原菌检测,7,生化反应,如,:,幽门螺杆菌尿素酶分解尿素产氨,使培养液变碱,pH,指示剂变色。,微量、快速、半自动或自动细菌生化鉴定和细菌药敏分析系统，使病原菌检出水平提高，时间缩短。,病原菌检测,8,病原菌检测,血清学试验,用含已知,特异性抗体,的免疫血清，可有效检出标本中极微量细菌特异,抗原,，或与分离培养出的未知纯种细菌进行血清学试验，确定致病菌的种或型。,常用方法有,玻片凝集试验、酶联免疫吸附试验（,ELISA,）、协同凝集、乳胶凝集、免疫电泳、间接血凝,等试验。,9,病原菌检测,动物试验,利用实验动物可进行病原菌的分离鉴,定，检测细菌毒力等。,常用实验动物有,小鼠,豚鼠和家兔,等。,接种途径有,皮内、皮下、腹腔、肌,肉、静脉,等。,10,病原菌检测,药物敏感试验,纸片法,试管稀释法,11,病原菌检测,其他方法,分子生物学技术,核酸杂交技术,PCR,生物芯片技术,12,聚合酶链反应是一种模拟天然,DNA,复制的体外扩增法，其基本原理如下：,加热使双链,DNA,解开螺旋,在退火温度条件下引物同模板杂交,在,Taq DNA,聚合酶，,dNTPs,，,Mg2+,和合适,pH,缓冲液存在条件下延伸引物,重复上述变性退火引物延伸过程至,25-40,个循环。靶序列被扩增上百万倍，,达到体外扩增核酸序列的目的。,PCR,技术,13,14,核酸杂交技术,杂交方法是一种分子生物学的标准技术，用于检测,DNA,或,RNA,分子的特定序列（靶序列）。,DNA,或,RNA,先转移并固定到硝酸纤维素或尼龙膜上，与其互补的单链,DNA,或,RNA,探针用放射性或非放射性标记。,在膜上杂交时，探针通过氢键与其互补的靶序列结合，洗去未结合的游离探针后，经放射自显影或显色反应检测特异结合的探针。,15,生物芯片技术,该技术系指将大量（通常每平方厘米点,阵密度高于,400,）探针分子固定于支持物,上后与标记的样品分子进行杂交，通过检,测每个探针分子的杂交信号强度进而获取,样品分子的数量和序列信息。,16,血清学诊断,用已知抗原检测病人血清抗体,直接凝集试验,补体结合试验,中和试验,乳胶凝集,ELISA,17,2024/10/2,18,.,