6-6 其它类成分中药制剂分析

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第六节 其它类型成分中药制剂的分析,熟悉,木脂素类、,有机酸类、环烯醚萜类、香豆素类、单萜类及二萜类成分、多糖,的理化性质,掌握,木脂素类、,有,机酸类、,环,烯醚萜类、香豆素类、单萜类及二萜类成分、多糖,的中药制剂定性鉴别、含量测定的原理和方法选择以及供试液的提取纯化方法,一、木脂素类成分分析,（一）概述（了解）,木脂素：两分子苯丙素衍生物（,C6-C3,）,聚合而成的天然化合物。,分布：存在于植物的木部和树脂中，如厚朴、五味子、连翘、牛蒡子、细辛等的主要化学成分,结构：母核常具有醇基、酚羟基、亚甲二氧基、甲氧基、羧基和内酯结构,（二）理化性质,功能团反应,酚,-OH,：,FeCl3,试剂，重氮化试剂,亚甲二氧基：,Labat,试剂,-,没食子酸浓硫酸,Ecgrine,试剂：变色酸,-,浓硫酸,（二）理化性质,性状：木脂素多为无色结晶，少数能升华,溶解度：游离木脂素溶于乙醇、氯仿、苯等溶剂，难溶于水。木脂素苷水溶性增加。,化学性质：具光学活性，遇酸碱易发生异构化作用,（二）理化性质,理化性质：,氧化反应：剧烈氧化,-,碱性,KMnO4/H2O,、,NaBrO/H2O,；,缓和氧化,-,中性,KMnO4/,丙酮,（二）理化性质,提取与分离：,提取：游离木脂素,-,石油醚、丙酮、乙醇等溶剂,木脂素苷,-,苷类提取方法,木脂内酯,-,碱溶酸沉法,分离：溶剂萃取法、分级沉淀法、重结晶、色谱法等,（三）定性鉴别,色谱检识：薄层色谱,吸附剂：硅胶,展开剂：氯仿、氯仿,-,甲醇、乙酸乙酯,-,甲醇等,显色剂：茴香醛浓硫酸，,110,加热,5min,5%,或,10%,磷钼酸，,120,加热至斑点出现,10%,硫酸，,110,加热,5min,三氯化锑，,100,加热,10min/UV,碘蒸气，熏,/UV,（四）含量测定方法,总木脂素成分：,1,、变色酸比色法,原理：,亚甲二氧基：,Labat,试剂（没食子酸,/,浓硫酸）,2,、,二阶导数光谱法,3,、柱色谱比色法,（四）含量测定方法,单体木脂素成分：,1,、薄层色谱法,2,、,分光光度法,3,、高效液相色谱法,（五）应用实例,1,、,香砂养胃丸中厚朴酚、和厚朴酚的含量测定,二,、,含,香豆素,类制剂的分析,（一） 概述,香豆素：一类邻羟基桂皮酸的内酯。,生理活性：抗菌消炎、扩张冠脉、抗凝血。,分布：多科植物,白芷素、蛇床子素、秦皮中七叶内酯和七叶苷等,结构类型：邻羟基桂皮酸的内酯，由苯环和吡喃酮环组成。,分类：简单香豆素类、呋喃香豆素类、吡喃香豆素类、其它香豆素类,溶解性：苷元分子量小的随水蒸气蒸发，可升华；易溶于乙醇、甲醇、氯仿和乙醚，可溶于热水，难溶于冷水。,苷能溶于水、乙醇、甲醇，难溶于氯仿和乙醚等,二,、,含,香豆素,类制剂的分析,二、含香豆素类制剂的分析,显色反应：,1,、异羟肟酸铁反应：红色,2,、与酚羟基反应：,FeCl3,试剂、,Gibbs,试剂、重氮化试剂,光谱特征：,uv300nm,，,多有蓝色荧光,（三）定性分析,1,、化学反应法,例：青叶胆片的鉴别,2,、荧光法,例：白芷的鉴别,3,、,TLC,法,例：七宝美髯颗粒的鉴别,（四）定量分析,1,、分光光度法,利用颜色反应、如,重氮化试剂,本身有紫外吸收,例：消痔液的补骨脂素,2,、,TLCS,法,例：千金止带丸中补骨脂素、异补骨脂素的汗测,3,、,HPLC,法,例：辛芩冲剂的欧前胡素,4,、,GC,法,例：乌蛇止痒丸的蛇床子素,三、,含环烯醚萜类制剂的分析,（一） 概述,环烯醚萜：一类特殊的单萜。,生源途径：焦磷酸牻牛儿酯,(GPP),为前体。,生理活性：多种多样。,分布：多科植物,-,栀子、地黄、龙胆，,制剂,-,黄连解毒汤、温清瘾、六味地黄丸、龙胆泻肝丸,三、,含环烯醚萜类制剂的分析,结构类型：,特点：,C1,多有官能团，,-OH(,成苷,),、,-OCH3,、,C=O,等；,C3,、,C4,多为双键，,C4-CH3,易为氧化物；,C8-CH3,易为氧化物；,环戊烷呈不同氧化态，如双键、环氧、环酮等。,分类：环烯醚萜及其苷,裂环环烯醚萜及其苷,三,、,含环烯醚萜类制剂的分析,溶解性：易溶于水和甲醇，成苷后苷键易被酸水解断裂,显色反应：环烯醚萜类遇氨基酸并在加热下显蓝色,-,初步鉴定,（二）含栀子中药制剂的分析,栀子：茜草科，苦寒清降、凉血解毒,化学成分,-,栀子苷（,geniposide,）、,栀子苷酸（,geniposidic,acid,）,等,栀子苷是致泻有效成分，常作为评价制剂质量的指标性成分,1.,定性鉴别：薄层色谱法,例：清胃黄连丸：,栀子、黄芩、黄柏、知母等组成,对照溶液制备,:,栀子苷、,黄芩苷对照品,-,加甲醇,（二）含栀子中药制剂的分析,样品溶液制备：样品研细,-,加甲醇,-,超声震荡提取,30min-,过滤、浓缩,-,加甲醇,-,供试液,薄层鉴别：吸取对照液、供试液,-,硅胶,G,板点样,-,正丁醇,-,冰醋酸,-,水（,7,：,2,：,1,）展开,-,吹干,5%,香草醛硫酸,-,栀子,2%,三氯化铁乙醇,-,黄芩,2.,含量测定：色谱、紫外分光光度法、高效液相色谱,（三）含龙胆中药制剂的分析,龙胆：主要有效成分为龙胆苦苷（,gentiopicroside,）、,当药苦苷和当药苷等水溶性苷，均为裂环烯醚萜类，性质不稳定，对光、热、酸、空气较为敏感。提取过程中如遇氨会转化为含,N,的化合物,1.,含龙胆中药制剂的鉴别：薄层色谱,2.,含龙胆中药制剂的含量测定：根据标准品的种类，结合剂型，进行样品的预处理，设定方法：,环糊精单分子胶束荧光法、高效液相色谱,四、有机酸类成分分析,（一）概述,分布：广泛分布于中药中，并参与机体的代谢，具有多种生理活性，大多与钾、钠、钙等阳离子或生物碱结合成盐或酯存在,生理活性：,蜂王酸,-,王浆中提取，提高免疫力,桂皮酸,-,冠心苏合丸中苏合香油,阿魏酸,-,抑制血小板聚集,齐墩果酸,-,防治脂肪肝，抗动脉硬化,绿原酸,-,抑菌作用（茵陈）,油酸,-,具有抗癌作用，是鸦胆子有效成分之一,四,、有机酸类成分分析,（一）概述,结构特征：含羧基,-,与显色剂产生颜色反应用于鉴别和含量测定,溶解性：游离有机酸易溶于有机溶剂难溶于水，低级脂肪酸一般易溶于水、乙醇等难溶于亲脂性有机溶剂，高级脂肪酸及芳香酸较易溶于有机溶剂而难溶于水；有机酸盐易溶于水难溶于有机溶剂。,检识方法：,1.,与氢氧化钡、氢氧化钙生成钡盐和钙盐沉淀；与醋酸铅与碱式醋酸铅生成铅盐沉淀。,2.,薄层色谱,四,、有机酸类成分分析,（一）概述,提取和分离：一般先酸化使有机酸游离，再选择合适的有机溶剂提取,四,、有机酸类成分分析,（一）概述,提取和分离：一般先酸化使有机酸游离，再选择合适的有机溶剂提取,人参蜂王浆含蜂王酸,1.4%,以上,含量测定方法：薄层间接和直接定量法、高效液相色谱法和气相色谱法,例：,（,1,）薄层间接定量法：样品预处理,有机溶剂提取,聚酰胺薄膜上点样,展开,罗丹明,B,染色,深红色（,10-HAD,）,-,吹干，剪下洗脱,在,=560nm,处比色,（一）,人参蜂王浆中蜂王酸的测定,人参蜂王浆,水溶解,盐酸,pH=3.0 ,乙醚提取,回收乙醚,残留物溶于氯仿聚酰胺薄膜上点样,石油醚,-,乙醚,-,冰醋酸（,3,：,2,：,0.5,）展开,凉干后于醋酸中浸泡,10-20min ,浸于罗丹明,B 5-10min ,吹干，剪下,- 95%,乙醇,-,冰醋酸,-,水（,45,：,5,：,50,）洗脱,30min ,比色,（一）,人参蜂王浆中蜂王酸的测定,（一）,人参蜂王浆中蜂王酸的测定,（,2,）薄层扫描,样品制备：精密取样,加甲醇,冷冻离心,取上清液，沉淀甲醇洗,3,次，合并上清液,回收甲醇,残渣酸化,水饱和的二氯甲烷萃取,回收,残渣氯仿定容,测定,制备标准溶液、标准曲线,（,3,）高效液相色谱法,关键：样品预处理（甲醇沉淀蛋白、超声波提取或固相萃取柱净化），保持酸度,（,4,）气相色谱法：甲酯化后用,GC,其它实例,（,二）桂皮浸膏中肉桂酸的测定,桂皮：桂皮醛、桂皮酸（国外要求）,高效液相色谱法测定：样品经超微过滤器处理，定容，进样,以外标法、峰面积计算含量,（,三）益心口服液中阿魏酸与桂皮酸的分析,益心口服液：肉桂、川芎、丹参、三七等,阿魏酸,、桂皮酸,（,四）含绿原酸中药制剂的分析,薄层层析,-,舒肝消积丸中绿原酸的测定,高效液相色谱法,-,感冒舒中绿原酸的测定,（,五）抗病毒较囊中齐墩果酸的测定,-,薄层色谱法,五,、,含,多糖,类制剂的分析,（一） 概述,多糖,类,：单糖等通过苷键连接而成，如常见的菊糖、淀粉、树胶、粘液质等。,生理活性：抗肿瘤、提高免疫、降糖等。,分布：多科植物,灵芝多糖、茯苓多糖、南瓜多糖、大黄多糖、当归多糖、党参多糖等,结构类型：单糖等通过苷键连接而成,溶解性：可溶于水、低浓度乙醇、甲醇，难溶于氯仿和乙醚等。,三,、,含,多糖,类制剂的分析,二、,含,多糖,类制剂的分析,显色反应：,多采用酸水解后进行：醛酮糖可用银镜反应等,淀粉遇碘显兰色,（二）定性分析,1,、,TLC,法,多采用酸水解后进行：主要有硅胶、纤维素、硅藻土、氧化铝色谱等。,例：菟丝子多糖的鉴别,2,、纸色谱法,多采用酸水解后进行,例：南瓜多糖的鉴别,（二）定性分析,3,、电泳法,滤纸电泳、玻璃纤维纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、凝胶电泳,4,、,HPLC,法,示差折光检测器,5,、,GC-MS,法,（三）定量分析,1,、总多糖,（,1,）,3,，,5-,二硝基水杨酸（,DNS,）,比色法：,试用：还原糖,试剂：,3,，,5-,二硝基水杨酸,颜色：棕红色,（,2,）苯酚,-,硫酸比色法：,试用：游离糖、多糖中己糖、糖醛酸,试剂：苯酚、硫酸,颜色：棕黄色,（三）定量分析,（,3,）蒽酮,-,硫酸比色法 ：,试用：糖类,试剂：蒽酮、硫酸,颜色：蓝绿色,2,、单体多糖,高效凝胶液相色谱法,应用实例：,黄芪多糖,人参多糖,五,、,含,多糖,类制剂的分析,含,单,萜,及二萜,类制剂的分析,（一） 概述,单萜：,2,个异戊二烯单位的萜烯及其衍生物,二萜：,4,个分子异戊二烯单位聚合而成。,生源途径：,二萜以牻牛儿醇基牻牛儿醇为前体；,分布：单萜,广泛存在于高等植物中,二萜多以树脂、内酯或苷等存在于多科植物中；,含氧衍生物具有多方面的显著生理活性，如：芫花、雷公藤、穿心莲、冬凌草含二萜内酯类化合物。,分类：,单萜种类较多,二萜分为链状二萜、单环二萜、双环二萜、三环二萜、四环二萜,含,单,萜,及二萜,类制剂的分析,单萜类：,芍药苷：芍药的主要活性成分，为单萜的衍生物，水溶性大，具易吸湿性，不稳定,制剂分析：,例：脏连丸的分析、化毒丸的分析、复方白芍片的含量测定,含,单,萜,及二萜,类制剂的分析,