天然产物黄酮讲义课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第四章,黄酮类化合物,第四章黄酮类化合物,第一节 概述,黄酮类化合物广泛分布于植物界中，而且生理活性多种多样，引起了国内外的广泛重视，研究进展很快。仅截止到1974年为止，国内外已发表的黄酮类化合物共1674个（主要是天然黄酮类，也有少部分为合成品，其中甙元902个，甙722个），并以黄酮醇类最为常见，约占总数的三分之一，其次为黄酮类，占总数的四分之一以上，其余则较少见。至于双黄酮类多局限分布于裸子植物，尤其松柏纲，银杏纲和凤尾纲等植物中。,第一节 概述 黄酮类化合物广泛分布于植物界中，而且生理,第一节 概述-,基本结构和分类,黄酮类化合物多具有颜色，在植物体内大部分与糖结合成甙，一部分以游离形式存在。,一、基本结构和分类,以前，黄酮类化合物(flavonoids)主要是指基本母核2-苯基色原酮(2-phenyl-chromone)类化合物，现在则是泛指两个苯环（A-与B-环）通过中央三碳链相互联结而成的一系列化合物。,第一节 概述-基本结构和分类 黄酮类化合物多,第一节 概述-,基本结构和分类,第一节 概述-基本结构和分类,根据中央三碳链的氧化程度、B-环联接位置（ 2-或3-位）以及三碳链是否构成环状等特点，可将重要的天然黄酮类化合物分类如下所示,。,名称,三碳链部分结构,黄酮类,(flavones),黄酮醇,(flavonol),第一节 概述-,基本结构和分类,根据中央三碳链的氧化程度、B-环联接位置（ 2-或,二氢黄酮类,二氢黄酮醇类,花色素类,黄烷-3,4-二醇类,第一节 概述-,基本结构和分类,二氢黄酮类二氢黄酮醇类花色素类黄烷-3,4-二醇类第一节,双苯吡酮类,黄烷-3-醇类,异黄酮类,二氢异黄酮类,高异黄酮类,第一节 概述-,基本结构和分类,双苯吡酮类黄烷-3-醇类异黄酮类二氢异黄酮类高异黄酮类第一节,查耳酮类,二氢查耳酮类,橙酮类,第一节 概述-,基本结构和分类,查耳酮类二氢查耳酮类橙酮类第一节 概述-基本结构和分类,第一节 概述-,生物合成途径,第一节 概述-生物合成途径,第一节 概述-,生物合成途径,第一节 概述-生物合成途径,第一节 概述,生物合成途径,第一节 概述,第一节 概述,生物合成途径,缤纷世界的色彩,第一节 概述缤纷世界的色彩,蓝色妖姬,蓝色妖姬,第一节 概述-生物活性,1 心血管保护,槐米,立可定,第一节 概述-生物活性1 心血管保护槐米立可定,2 保肝作用,2 保肝作用,3 抗病毒 HIV,3 抗病毒 HIV,4 抗炎,4 抗炎,对Lewis肺癌小鼠的抑癌作用,5-FU,5 抗癌,对Lewis肺癌小鼠的抑癌作用5-FU5 抗癌,与5-FU联合用药对小鼠S-180的抑制作用,5-Fu,WL-1,5-FU,+,WL-1,R-ray,WL-1,R-ray,+,WL-1,5 抗癌,与5-FU联合用药对小鼠S-180的抑制作用5-FuWL-1,与5-FU联合用药对小鼠S-180的抑制作用,5-Fu,WL-1,5-FU,+,WL-1,R-ray,WL-1,R-ray,+,WL-1,5 抗癌,与5-FU联合用药对小鼠S-180的抑制作用5-FuWL-1,天然产物黄酮讲义课件,5 雌激素样作用,5 雌激素样作用,第二节 黄酮类化合物的理化性质及显色反应,一、 性状,多数为无定形粉末，少数为结晶性固体。,黄酮苷具有旋光性，且多为左旋(含有糖)。除二氢黄酮，二氢 黄酮醇，二氢异黄酮，黄烷，黄烷醇外苷元一般无旋光性。,黄酮、黄酮醇及其苷 灰黄-黄色;,查耳酮 黄-橙黄色;,二氢黄酮、二氢黄酮醇 无色;,异黄酮 浅黄色;,花色素及苷元 颜色随PH变化而改变 PH 8.5 兰色,第二节 黄酮类化合物的理化性质及显色反应一、 性状,苷元难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂及碱水中。苷可溶于水，易溶于甲醇、乙醇等。,OH 水溶性 ; 糖 水溶性,二、 溶解度(solubility),黄酮、黄酮醇、查尔酮等 堆砌紧密,分子引力大,平面型,二氢黄酮、二氢黄酮醇等 非平面型,花色素 离子型,水溶性,苷元难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂及碱水中。,三、 酸碱性,1. 酸性,多数黄酮类化合物具有酚羟基，故显酸性，可溶于碱水、吡啶、甲酰胺、二甲基甲酰胺等。,酸性强弱顺序:,7,4,- 二OH 7或4,-,OH 一般PhOH 5及3 OH,NaHCO,3,Na,2,CO,3,0.2% NaOH 4% NaOH,2. 碱性,吡喃环上的氧原子有未共用电子对，故有微弱的碱性，可与强无机酸(如H,2,SO,4,HCl等)生成 盐，但生成的盐极不稳定，加水即可分解。在浓盐酸中生成的盐常有特殊颜色，可用于鉴别。某些甲氧基黄酮溶于浓盐酸中显深黄色，且可与生物碱沉淀试剂生成沉淀。,三、 酸碱性 1. 酸性,四、 显色反应,黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基及-吡喃酮环有关。,1. 还原反应,(1). 盐酸-镁粉（或锌粉）反应,黄酮(醇)、二氢黄酮(醇): 橙红-紫红(少数紫-蓝色) B环有OH或OCH3时颜色加深,查耳酮、橙酮、儿茶素: (-),异黄酮少数显色,花青素及部分橙酮、查尔酮等在浓盐酸中也会变色，故需作对照。为排除提取物颜色的干扰，可观察泡沫的颜色。,盐酸镁粉反应的机制过去解释为由于生成了花色苷元所致，现在认为是因为生成了阳碳离子的缘故。,(2). 四氢硼钠反应 NaBH,4,二氢黄酮类 红紫色,其他黄酮类 (-),(3). 磷钼酸,二氢黄酮 棕褐色,四、 显色反应黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基及-,2.金属盐类试剂的络合反应,黄酮类分子中含有下列结构单元时，常可与铝盐、铅盐、锆盐、镁盐等试剂反应，生成有色络合物。,(1). 铝盐,1% 三氯化铝或硝酸铝溶液，生成的络合物多为黄色（415nm），并有荧光，可用于定性定量。,(2). 铅盐,1%碱式醋酸铅或醋酸铅，生成黄-红色沉淀。,碱式醋酸铅还可与单个酚羟基生成沉淀，可用于分离。,2.金属盐类试剂的络合反应 黄酮类分子中含有下列,(3). 锆盐,2% ZrOCl,2,黄绿色络合物，并有荧光,生成锆络合物对酸的稳定性： 3-OH，4C=O 5-OH，4C=O (二氢黄酮醇除外),加入枸橼酸后，5-羟基黄酮的黄色溶液显著褪色，3-羟基黄酮不褪色。可用于3-羟基和5-羟基黄酮的鉴别。,2.金属盐类试剂的络合反应,(4). 镁盐,醋酸镁的甲醇溶液,二氢黄酮(醇),天蓝色荧光， 5位有羟基色泽更为明显,黄酮（醇）,异黄酮 黄-橙黄-褐色,(3). 锆盐2.金属盐类试剂的络合反应(4). 镁盐,(5). 氯化锶(SrCl,2,),具有邻二酚羟基的化合物与氯化锶的氨性甲醇溶液可生成绿色-棕色乃至黑色沉淀。,(6). 三氯化铁(FeCl,3,),具有氢键缔合的酚羟基(如邻二酚羟基,5-OH等)，反应明显。,2.金属盐类试剂的络合反应,(5). 氯化锶(SrCl2)(6). 三氯化铁(FeCl,3. 硼酸显色反应,具有下列结构单元的黄酮类，即-羟基酮结构(如5-OH黄酮，2-OH查耳酮等)在无机酸或有机酸存在下,可与硼酸反应，生成亮黄色。在草酸存在下显黄色并有绿色荧光，在枸橼酸丙酮条件下，只显黄色而无荧光。,4. 碱性试剂显色反应,(1). 遇碱成盐共轭链延长，颜色加深。NH,3,可逆, Na,2,CO,3,不可逆。 (2). 二氢黄酮遇碱开环形成查尔酮，显橙-黄色。,(3). 黄酮醇类先呈黄色，通入空气后变为棕色。,(4). 分子中有邻二酚羟基或3,4,-二OH，在碱液中不稳定，易氧化，由黄 深红 绿棕色沉淀。,3. 硼酸显色反应 具有下列结构单元的黄酮类，即-,第三节 黄酮类化合物的提取与分离,一、 提取和粗分,用极性较小的溶剂回流提取，可提取出大部分黄酮苷元(氯仿、乙醚、乙酸乙酯等)。而对多甲氧基黄酮的游离苷元、甚至可以用苯提取。黄酮苷类以及极性稍大的苷元，一般可以用丙酮、甲醇、乙醇、水或某些极性较大的混合溶剂进行提取。,第三节 黄酮类化合物的提取与分离一、 提取和粗分,回收醇，加水稀释,水溶液,萃取,水液（水杂）,3-4倍量醇,静置,过滤,多糖,粘液,树胶,蛋白等,醇液,(1). 萃取法,甲醇或甲醇水提取液(一般相当于生药100-200),正丁醇(苷),乙酸乙酯,(苷元和极,性小的苷),一、 提取,回收醇，加水稀释水溶液萃取水液（水杂）3-4倍量醇,静置,过,(2). 碱提取酸沉淀法,黄酮苷虽有一定的极性，可溶于水，但难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，加酸后可沉淀析出。（如从槐米中提取芦丁)。碱液的浓度不宜过高，以免在强碱下黄酮被破坏。酸化时，酸性也不宜过强(pH 4较好)，以免生成盐重新溶解。当药材中含有大量果胶、粘液等杂质时(如花、果等药材),用石灰乳或石灰水较好，上述杂质可形成钙盐不被溶出，过滤也容易。,一、 提取,(2). 碱提取酸沉淀法一、 提取,1. 柱色谱法,（1） 硅胶柱色谱,适用的范围最广，主要用于分离极性小的化合物。如异黄酮及二氢黄酮醇类。也可采用加水活化后用于分配色谱方法分离极性较大的化合物，如黄酮苷、多羟基黄酮醇等。,（2) 聚酰胺柱色谱,聚酰胺的性质及吸附原理,聚酰胺（Polyamide)高分子聚合物，不溶于水、甲醇、乙醇、乙醚等常用的溶剂，对碱较稳定。对酸尤其是无机酸稳定性较差，可溶于浓盐酸、冰醋酸及甲酸。一般属于氢键吸附。,二、 分离,1. 柱色谱法二、 分离,洗脱剂的洗脱能力,尿素/水 二甲基甲酰胺 甲酰胺 碱水溶液 丙酮 甲(乙) 醇 水,常用的溶剂: 水 乙醇,一般不用含氯的溶剂(可溶解聚酰胺或其中的交联剂)。,二、 分离,洗脱剂的洗脱能力二、 分离,结构与吸附力的关系,形成氢键的基团数目越多，吸附能力越强；,易形成分子内氢键者，吸附力降低；,芳香化程度高，吸附力强；,结构与吸附力的关系形成氢键的基团数目越多，吸附能力越强；,苷元相同时,洗脱先后顺序一般是三糖苷、双糖苷、糖苷、苷元。,母核上增加羟基，洗脱速度即相应减慢。当分子中羟基数目 相同时，羟基位置对吸附也有影响，洗脱顺序为邻羟基、对位（或间位）羟基黄酮。,不同类型的黄酮化合物，流出的先后顺序一般是异黄酮、二氢黄酮醇、黄酮、黄酮醇。,分子中的芳香核共轭双键多着易被吸附，故查儿酮比相应的二氢黄酮难于洗脱。,聚酰胺柱色谱洗脱规律:,苷元相同时,洗脱先后顺序一般是三糖苷、双糖苷、糖苷、苷元。聚,聚酰胺柱色谱洗脱规律:,聚酰胺柱色谱洗脱规律:,(3) 葡聚糖凝胶柱色谱(Sephadex gel,),Sephadex LH-20 是SephadexG-25 经羟丙基化处理后得到的产物。葡聚糖凝胶中的葡萄糖部分与羟丙基结合成醚键。虽然分子中羟基数目不少，但所占比重减少,故親脂性增加，可用甲醇、乙醇等溶剂洗脱，也具有一定的吸附能力。,(3) 葡聚糖凝胶柱色谱(Sephadex gel)Sep,分子量越小或体积越小，越易进入孔中，流出的就越慢。分子量大或体积大，进入孔难，流出的快。,分离黄酮苷元时以吸附作用为主，酚羟基数目越多，吸附力越强(与酚羟基的位置关系不大)。分离苷时，则分子筛的属性起主导作用，分子量小，洗脱难。,三糖苷 双糖苷 单糖苷。,(3) 葡聚糖凝胶柱色谱(Sephadex gel,),分子量越小或体积越小，越易进入孔中，流出的就越慢。分子量大或,分离黄酮苷元时以吸附作用为主，酚羟基数目越多，吸附力越强(与酚羟基的位置关系不大)。分离苷时，则分子筛的属性起主导作用，分子量小，洗脱难。,三糖苷 双糖苷 单糖苷。,(3) 葡聚糖凝胶柱色谱(Sephadex gel,),分离黄酮苷元时以吸附作用为主，酚羟基数目越多，吸附力越强(与,2. 梯度PH萃取法,乙醚液,5% NaHCO,3,乙醚液,碱液(7,4,-二OH-黄酮),5%Na,2,CO,3,乙醚液,碱液(7或4,-OH黄酮),乙醚液,0.2%NaOH,碱液(一般黄酮),4%NaOH,乙醚液,(脂杂),碱液,(仅含3-OH和或5-OH黄酮),2. 梯度PH萃取法乙醚液5% NaHCO3乙醚液碱液(7,第四节 黄酮类化合物结构鉴定,黄酮化合物的检识与结构测定现在多依赖于谱学的综合解析，而化学方法和色谱方法已降至辅助地位。,未知黄酮化合物的鉴定，多在测定分子式的基础上，利用PC或TLC得到的Rf与文献比较，或分析对比试样在甲醇溶液中及加入各种诊断试剂后得到的紫外及可见光谱进行剖析。同时，对于化合物的颜色反应，以及在提取分席过程中所表现的行为也注意分析。,1,H,-,NMR谱的测定对分析天然黄酮类化合物的结构，已经成为一种非常重要的手段。但是黄酮类化合物的,1,H,-,NMR谱上，有时想要确切指认每个信号并不是一件容易的事。要解决这些问题，,13,C,-,NMR技术有很大的优势，因此,13,C,-,NMR技术在黄酮类化合物结构鉴定中发挥着越来越重要的作用。质谱技术也是黄酮类化合物结构鉴定的重要手段之一。,实际工作中常常根据需要，灵活、运用上述方法和手段，并辅以必要的化学方法，以求获得满意的结构,。,第四节 黄酮类化合物结构鉴定黄酮化合物的检识与结构测定现在多,一、 紫外及可见光谱在黄酮类鉴定中的应用,紫外及可见光分光光度法鉴定黄酮类化合物结构的一般 程序如下：,1 测定试样在甲醇溶液中的UV光谱。,2 测定试样在甲醇溶液中加入各种诊断试剂后得到的UV及可见光谱。,3 如试样为苷类，则可进行水解或甲基化后再水解，并测定苷元及其衍生物的UV光谱。,将上述各种光谱图进行对比分析，即可获知有关结构的重要信息。,一、 紫外及可见光谱在黄酮类鉴定中的应用,（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的UV光谱特征,紫外及可见光谱在黄酮类化合物结构测定中占有重要的地位，尤其是在解决黄酮类化合物的基本骨架和羟基的取代位置中是一个非常有力的工具。,黄酮类化合物的紫外光谱由两部分组成，桂皮酰部分(Cinnamoyl system I带)和苯甲酰部分(Benzoyl system II带)，从长波往短波数第一峰称I带，第二峰称II带。,A,B,C,（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的UV光谱特征紫外及可见光谱在,带II,带I,(1) I带和II带谱形相似，但带I的位置不同，可据此进行分类。,(2) I带 黄酮类 304-350nm；,黄酮醇(3-OH取代) 328-357nm；,黄酮醇(3-OH游离) 352-385nm；,整个母核上的氧取代程度越高，则带I越向长波方向位移（红移） -见表5-7,(3) II带 240-285nm；,A环 OH 波长,B环OH对波长影响不大,但影响峰,型,3,4,二OR时可分裂成双峰或一个主峰一,个肩峰，4,OR时为单峰。-见表5-8,综上所述，可以依据带I、II的峰位及形状，初步推测黄酮及黄酮醇母核上的羟基取代数目及取代模式。,1） 黄酮及黄酮醇类,带II带I(1) I带和II带谱形相似，但带I的位置不同，可,1） 黄酮及黄酮醇类,1） 黄酮及黄酮醇类,2） 查耳酮类和橙酮类,(1). 桂皮酰系统得到加强，故I带强，II,带弱,相差较大。,(2).查耳酮 II带 220-270nm; I带340-,390nm，有时可分裂成两个峰(Ia 340-,390nm,Ib300-320nm),环上引入氧取代基，也会引起吸收带，尤其是带I红移（如表5-9），在2位上引入羟基影响最大。反之，2位羟基甲基化或苷化时，可引起带I紫移15-20 nm。,(3). 橙酮 常显现3-4个吸收峰，但主要吸收峰（带I)一般位于370-430nm，羟基甲基化或苷化时对光谱并不产生显著影响。但7-羟基被甲基化或苷化时可使带 I紫移18nm。,I带,II带,2） 查耳酮类和橙酮类 I带II带,3 ）异黄酮类和二氢黄酮(醇)类,(1). 除有由A-环苯甲酰系统引起的带II吸收外，因B-环不与吡喃酮环上的羰基共轭（或共轭很弱），故带I很弱，常为一个肩峰。,(2). 根据主峰的位置，可区别此三类化合物：异黄酮带II在245-270nm，二氢黄酮(醇)带 II 在270- 295nm。,I带,II带,3 ）异黄酮类和二氢黄酮(醇)类 (1). 除有由A-环苯甲,根据I带和II带的峰形就可判断黄酮的类型,根据I带和II带的峰形就可判断黄酮的类型,（二）诊断试剂引起的位移及其在结构测定中的意义,以下仅以黄酮及黄酮醇为例进行说明。,几种主要诊断试剂引起的位移及其结构特征归属有如表所示。,（二）诊断试剂引起的位移及其在结构测定中的意义以下仅以黄酮及,1.甲醇钠(NaOMe)对UV的影响,1）黄酮(醇)类,母核上所有酚羟基在甲醇钠强碱性下都可解离，引起相应峰带大幅度红移。主要用于确定4,-OH。,(1). 带I 红移 40-60nm，且强度不降，示有4,-OH 。,(2). 带I 红移50-60nm，强度降低，示有3-OH，但无4,-OH。,(3).吸收谱带随时间延长吸收强度降低，示有3,4,二OH、 3,3,4,三OH、3,4,5,三OH等羟基取代模式。,注：(1)-(3)为与甲醇溶液比较。,1.甲醇钠(NaOMe)对UV的影响 母核上所有,2） 二氢黄酮（醇）类和异黄酮类,(1). 5,7二OH II带红移35-40nm；,(2). 无5-OH I带移至400nm(异构成查耳酮)；,(3). 5,6,7或5,7,8-三OH， 随时间延长吸收强度降低。,(1)和(2)与甲醇溶液比； (3)自身比,OH,-,3） 查耳酮类,(1). 4-OH I带红移60-100nm ，吸收强度增加。,(2). 无4-OH，但有4,-OH或2-0H I带红移60-100nm，,吸收强度不变.,(3). 4,-OH和2,-OH或4-OR I带红移40-50nm。,与甲醇溶液比,4）橙酮类,(1). 4,-OH I带红移80-95nm，吸收强度增加。,(2). 6,-OH I带红移60-70nm。,与甲醇溶液比较。,2） 二氢黄酮（醇）类和异黄酮类OH- 3） 查耳酮类4）,2. 醋酸钠（NaOAc）对UV的影响,市售醋酸钠因含有微量醋酸，碱性比甲醇钠弱，只能使7-OH和4,-OH解离。市售的醋酸钠经熔融脱除微量醋酸后，其对UV的影响与甲醇钠相似。当市售的醋酸钠未经熔融时，由于含有微量的醋酸，限制了4,- OH的解离，故多用于7-OH的确定。,黄酮(醇),醋酸钠（未熔融）,(1). 7-OH II带红移5-20nm。,(2). 4,-OH，但无3-及或7-OH I带在长波一侧有明显肩峰。,醋酸钠（熔融）,(1).带I 红移40-65nm，强度下降，示有4-OH,(3).随时间延长,吸收强度降，示有对碱敏感的取代图式,注：与甲醇溶液比较。,2. 醋酸钠（NaOAc）对UV的影响 市售醋,3。醋酸钠/硼酸对UV的影响,硼酸在碱性条件下可与邻二酚羟基螯合使相应峰带红移，故可用于确定邻二酚羟基。,1） 黄酮(醇)类,(1). B环有邻二酚羟基 I带红移12-30nm,(2). A环有邻二酚羟基(不含5,6位) II带红,移5-10nm,(3). 均为与甲醇溶液比较(与醋酸钠比可能,为紫移),2） 异黄酮类和二氢黄酮(醇)类,A环有邻二酚羟基(不含5,6位) II带红移,10-15nm(与甲醇溶液比较)。,3。醋酸钠/硼酸对UV的影响,4. AlCl,3,及AlCl,3,/HCl对UV的影响,Al,3+,可与3-OH，C,4,=O或5-OH，C,4,=O或邻二酚羟基螯合形成螯合物。当3-OH与5-OH共存时，形成3-OH，C,4,=O螯合物，当3-OH或和5-OH与邻二酚羟基共存时，形成二螯合物。,螯合物对酸的稳定性: 3-OH(黄酮醇) 5-OH(黄酮) 5-OH(二氢黄酮) 邻二酚羟基 3-OH(二氢黄酮醇),4. AlCl3及AlCl3/HCl对UV的影响,(1). AlCl,3,/HCl 谱 = AlCl,3,谱 无邻二酚羟基,(2). AlCl,3,/HCl谱 = AlCl,3,谱 可能有邻二酚羟基,I带紫移30-40nm B环有邻二酚羟基,I带紫移50-60nm A,B环均可能有邻二酚羟基,(3). AlCl,3,/HCl谱 = 甲醇谱 3或和5位无羟基,(4). AlCl,3,/HCl谱 = 甲醇谱 可能有3或和5羟基,I带红移35-55 nm 只有5-OH,I带红移60nm 只有3-OH,I带红移50-60nm 可能同时有3和5羟基,I带红移17-20nm 除有5-OH外尚有6-OR取代,(1). AlCl3/HCl 谱 = AlCl3 谱,MeOH 确定黄酮类型,甲醇钠 确定4,-OH和7-OH,醋酸钠 确定7-OH,醋酸钠硼酸 确定邻二酚羟基,AlCl,3,及AlCl,3,/HCl 确定3-OH，5-OH及邻二酚羟基,小结,MeOH 确,甲醇谱I带和II带相似,I带为359nm故为黄酮醇(3-氧代)。甲醇钠谱I带红移(410-359)51nm,示有4,-OH ,327nm有峰,示有7-OH。AlCl3/HCl谱I带紫移(433-402)31nm示B环有邻二酚羟基；I带红移(402-359)43nm示有5-OH。醋酸钠谱II带红移(271-259)12nm示有7-OH。醋酸钠硼酸谱I带红移(387-359)28nm示B环有邻二酚羟基。,甲醇谱I带和II带相似,I带为359nm故为黄酮醇,(1). 化学法,用不改变C2构型的化学降解法使二氢黄酮降解成分子量较小的化合物后与构型已知的化合物的比旋度进行比较，从而确定绝对构型。,S,(2). 单晶X-射线衍射法,需要单晶，有时需要引入重原子。,(3). 核磁共振法,需用手性试剂,黄酮类化合物的立体化学问题,立体化学问题主要是二氢黄酮(醇)及其衍 生物的C-2和C-3的构型问题，可用下列几种方法确定它们的绝对构型。,(1). 化学法S(2). 单晶X-射线衍射法黄酮类化合物的,(4). 圆二色谱(Circular Dichroic Spectroscopy)及CD激子手性 法(CD exciton chirality),由长波向短波看，先上后下的峰称正Cotton效应。二氢黄酮醇类化合物从长波看为+ - + - + Cotton效应时，为2R,3R构型，反之为2S,3S构型。由图可看出两个化合物虽然椭圆度相差很大，旋光方向可能相反或比旋度相差较大，但CD谱峰形一致，故构型相同(2R,3R)。,+,-,+,-,+,(4). 圆二色谱(Circular Dichroic Sp,二氢黄酮类化合物从长波向短波为+ - + Cotton效应时为2S构型，故该化合物为2S构型。,二氢黄酮类化合物从长波向短波为+ - + Cott,