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按一下以編輯母片標題樣式,按一下以編輯母片,第二層,第三層,第四層,第五層,*,樟芝菌絲體活化巨噬細胞誘發人類肝癌細胞凋亡之分子機制探討,Induction of apoptosis in human hepatoma cells by mycelia of Antrodia camphorata via activation macrophage,大綱,前言,材料與方法,結果與討論,結論,前言,95,年台灣地區,10,大癌症,癌 症 死 亡 原 因,順序,綜合榜,男 性,女 性,1,肺癌,肝癌,肺癌,2,肝癌,肺癌,肝癌,3,結腸直腸癌,結腸直腸癌,結腸直腸癌,4,乳癌,口腔癌,乳癌,5,胃癌,胃癌,胃癌,6,口腔癌,食道癌,子宮頸癌,7,攝護腺癌,攝護腺癌,胰臟癌,8,子宮頸癌,胰臟癌,非何杰金淋巴癌,9,食道癌,非何杰金氏淋巴癌,膽囊癌,10,胰臟癌,鼻咽癌,卵巢癌,出處：行政院衛生署,肝癌,由於大多病人並無早期徵兆或症，故肝癌亦稱為無聲手；且肝臟位於骨後面，所以無法直接觸摸到細小的腫瘤硬塊，因此在腫瘤未變大時很少有疼痛感。,江詩雯,植物多醣萃取物對肝癌與,T,淋巴癌細胞增殖之影響,臺北醫學大學保健營養學系碩士論文,菌絲體,子實體,樟芝,牛樟芝，俗稱牛樟菇、牛樟芝，學名為,Antrodia,camphorata,。就目前所知，牛樟芝為一台灣特有菌種，生長於牛樟樹中空樹洞中，會造成樟樹產生褐腐病。坊間流傳，牛樟芝具有保肝、解毒能力。,張益軒,牛樟芝分子生物鑑定系統之研究,國立台灣大學農業化學研究所碩士論文,多醣體,多醣體是由單糖類多數結合而成，這些多醣體在構成醣的種類、化學結合方式或是分子大小與性質方面都有很大差異,-1,3,葡聚醣,李宛蓁,樟芝菌絲體培養與生理活性成分生成之研究,東海大學化學工程研究所碩士論文,主要是造成菇類苦味的原因，由三十個碳所結合而成六角或五角形之天然有機化合物總稱。,三萜類,免疫調控,研究發現，複雜的免疫調控，主要是由淋巴球、抗原呈獻細胞等許多種類的細胞交互作用而完成，尤其是所分泌出來的細胞激素更是扮演重要角色,免疫抗腫瘤方面，發現活化作用可刺激巨噬細胞與自然殺手細胞，分泌如腫瘤壞死因子,(TNF),與干擾素,(IFN),等細胞激素，進而達到抑制腫瘤的作用,研究動機,找出樟芝菌絲體（低多醣體萃取液）之抗腫瘤作用做深入的研究，測定它是否具有直接的抑瘤作用，抑或是與免疫增強相關聯，繼而從細胞與分子生物學層面釐清其抗腫瘤作用之機轉。,材料與方法,材料,野生樟芝,固態,發酵,樟芝,菌絲體,雙,態,發酵,樟芝,菌絲體,液態,樟,芝多,醣,抽出物,細胞株,HepG2,PLC/PRF/5-GFP,RAW 264.7,Human,hepatoblastoma,Human,hepatoblastoma,BALB/c macrophage,有,p53 gene,無,p53 gene,有,p21/WAF-1 gene,無,p21/WAF-1 gene,有,Fas,/APO-1,無,Fas,/APO-1,野生樟芝與樟芝菌絲體,（乙醇萃取液）,液態樟芝多醣抽出物,（水萃取液）,抗氧化能力測試,【DPPH,清除自由基,】,、,【,螯合亞鐵離子,】,、,【TEAC】,成分分析測試,【GPC】,、,【HPLC】,細胞株,(HepG2,PLC/PRF/5,RAW264.7),上述各種樟芝與,Macrophage(RAW264.7),培養,人類肝癌細胞株,(HepG2,PLC/PRF/5),細胞毒性測試,【MTT,assay】,細胞週期觀察細胞凋亡分析,【,Flow,cytometry,analysis,】,細胞毒性測試,【MTT,assay】,RT-PCR assay,西方墨點法,【Western blotting】,樟芝乙醇萃取液與,Macrophage(RAW264.7),培養抗癌藥物,人類肝癌細胞株,(HepG2,PLC/PRF/5),細胞毒性測試,【MTT,assay】,西方墨點法,【Western blotting】,AKT,PARP-1,NF-,B,抗癌藥物,結果與討論,凝膠滲透層析,（,GPC,assay,）,凝膠滲透層析法,(GPC),：當聚合體經過層析管柱時，較小的分子較深入凝膠內部的微孔，較大的分子能滲入的孔較少或根本無法滲入。因此較小的分子滯留在管柱的時間較長，較大的分子先被溶劑帶出層析管柱，如此則可有效的分離聚合物。,mv,minute,0,5,10,15,0,500,1000,固態樟芝,(,酒,),雙態樟芝,(,酒,),野生樟芝,(,酒,),樟芝多醣,(,水,),GPC assay,1:,多醣,20000,2:,多醣,3000,3:,多醣,400,4:,無多醣,高效能液相層析法,（,HPLC,）,高效能液相層析,(HPLC),：利用高壓溶劑的加壓來產生動力，促使液體移動相在沖提過程中帶動溶質分子流過固定相，因混合物中所含各種溶質之極性不相同，而與固定相親和力不同，因而滯留有所不同，經過整個管柱的分離後，混合物可完全分離，並由偵測器的檢測，而確定物質的存在。,野生樟芝,固態樟芝,雙態樟芝,液態樟芝,多糖抽出物,抗氧化能力測試,A,B,C,細胞毒性測試,（,MTT,assay,）,樟芝對,Macrophage,細胞存活率測試,A,B,C,樟芝與,macrophage,培養對,HepG2,細胞存活率測試,A,B,C,HepG2-24hr Macrophage(2,10,6,)-HepG2-24hr,Time,Sample,24hr,2,10,6,-24hr,2,10,6,-48hr,野生樟芝,(,酒,),IC50=105.55g/ml,IC50,100g/ml,IC50,100g/ml,固態樟芝,(,酒,),IC50,100g/ml,IC50=77.74,g/ml,IC50=43.71,g/ml,雙態樟芝,(,酒,),IC50=17.31 mg/ml,IC50,100g/ml,IC50,100g/ml,樟芝多醣,(,水,),IC50,100g/ml,IC50,100g/ml,IC50,100,g/ml,樟芝與,macrophage,培養對,PLC/PRF/5,細胞存活率測試,A,B,C,PLC/PRF/5-24hr,Macrophage(2,10,6,)-PLC/PRF/5-24hr,Time,Sample,24hr,2,10,6,-24hr,2,10,6,-48hr,野生樟芝,(,酒,),IC50,100g/ml,IC50=6.97,g/ml,IC50=1.19,g/ml,固態樟芝,(,酒,),IC50,100g/ml,IC50=29.43,g/ml,IC50=18.43,g/ml,雙態樟芝,(,酒,),IC50=4.49 mg/ml,IC50,100g/ml,IC50,100g/ml,樟芝多醣,(,水,),IC50,100g/ml,IC50,100g/ml,IC50,100,g/ml,細胞凋亡分析,（,Flow,Cytometry,）,A,B,樟芝與,Macrophage,培養對,HepG2,細胞週期之影響,樟芝與,Macrophage,培養對,HepG2,細胞凋亡之影響,A,B,樟芝與,Macrophage,培養對,PLC/PRF/5,細胞週期之影響,A,B,樟芝與,Macrophage,培養對,PLC/PRF/5,細胞凋亡之影響,A,B,樟芝加入,Macrophage,培養與合併抗癌藥物對,HepG2,細胞凋亡之影響,A,B,RT-PCR,M,(2,10,6,-24hr),Control,野生,AC,10,m,g/ml,野生,AC,100,m,g/ml,固態,AC,10,m,g/ml,固態,AC,100,m,g/ml,多醣,AC,10,m,g/ml,多醣,AC,100,m,g/ml,TNF-,LPS,2,m,g/ml,-,actin,IL-1,A,B,M,(2,10,6,-48hr),Control,野生,AC,10,m,g/ml,野生,AC,100,m,g/ml,固態,AC,10,m,g/ml,固態,AC,100,m,g/ml,多醣,AC,10,m,g/ml,多醣,AC,100,m,g/ml,TNF-,LPS,2,m,g/ml,-,actin,IL-1,B,A,Western,blot,M,(2,10,6,-24hr)-HepG2-24hr,Control,野生樟芝,10,m,g/ml+M,野生樟芝,100,m,g/ml+M,固態樟芝,10,m,g/ml+M,固態樟芝,100,m,g/ml+M,-,actin,AKT,NF-,B,（,p50,）,M,(2,10,6,-48hr)-HepG2-24hr,-,actin,AKT,NF-,B,（,p50,）,A,B,C,D,M,(2,10,6,-24hr)-PLC/PRF/5-24hr,Control,野生樟芝,10,m,g/ml+M,野生樟芝,100,m,g/ml+M,固態樟芝,10,m,g/ml+M,固態樟芝,100,m,g/ml+M,-,actin,AKT,NF-,B,（,p50,）,M,(2,10,6,-48hr)-PLC/PRF/5-24hr,-,actin,AKT,PARP-1,A,B,C,D,M,(2,10,6,-24hr)+,合併,MMC-HepG2-24hr,Control,野生樟芝,10,m,g/ml+M,合併,MMC 1,mM,固態樟芝,10,m,g/ml+M,合併,MMC 1,mM,-,actin,AKT,NF-,B,（,p50,）,PARP-1,A,B,C,結論,AKT,Cell survival,p,Cytokine receptor,JAK1,PI3K,AKT,BAD,p,p21,p,p27,p,Cell cycle progression,caspase-9,p,IKK,p,NF-,k,B,I,k,B,p,cytokine,M,f,Apoptosis,caspase-8,3,TNFR1,TNF,MMC,FADD,TRADD,M,f,MMC,AKT,caspase-8,3,Apoptosis,Thank you for your attention,樟芝對,BNL,細胞存活率測試,BNL-,酒,Time,Sample,24hr,48hr,72hr,野生樟,芝,(,酒,),IC50=115.48g/ml,IC50=138.2g/ml,IC50=105.55g/ml,固態樟,芝,(,酒,),IC50=1.07 mg/ml,IC50=1.33 mg/ml,IC50=2.99 mg/ml,雙態樟,芝,(,酒,),IC50=2.69 mg/ml,IC50=3.71 mg/ml,IC50=5.73 mg/ml,樟芝與,macrophage,培養對,BNL,細胞存活率測試,BNL-24hr,Macrophage(2,10,6,)-BNL-24hr,Time,Sample,24hr,2,10,6,-24hr,2,10,6,-48hr,野生樟芝,(,酒,),IC50=115.48g/ml,IC50=21.67,g/ml,IC50=22.88,g/ml,固態樟芝,(,酒,),IC50=1.07 mg/ml,IC50=111.4,g/ml,IC50=119.71,g/ml,雙態樟芝,(,酒,),IC50=2.69 mg/ml,IC50,1000,g/ml,IC50,1000,g/ml,樟芝多醣,(,水,),IC50,100g/ml,IC50=19.99,g/ml,IC50,100,g/ml,篩選,macrophage,細胞數,
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