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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验三,土壤微生物的分离与纯化,一、实验目的,二、实验原理,三、实验器材,四、实验内容,五、实验结果,六、思考题,一、实验目的,1.,学习从混杂的微生物群体中分离与纯化微 生物菌种的方法。,2.,综合练习微生物学实验的各种无菌操作技术。,二、实验原理,土壤是微生物生活的大本营，为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰其他一些不需要的微生物，再用各种方法分离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。,稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离,三、实验器材,实验材料：,新鲜土壤。,培养基：,灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏一号培养基、马铃薯蔗糖培养基。,实验仪器与用具,无菌水：,带有玻璃珠装有,90ml,无菌水三角瓶、装有,9mL,无菌水的试管。,其它：,无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴等,四、,实验内容,稀释涂板法,稀释混合平板法（混菌法）,划线分离,微生物的培养,各浓度做三个平皿,挑选单菌落接种斜面,实 验 总 流 程,从土壤分离微生物操作过程,制备土壤稀释液：,1.,称取土壤,10g,，放入,90mL,无菌水的三角瓶中，振荡,20min,，即为稀释,10,-1,的土壤悬液。,2.,另取装有,9mL,无菌水试管,5,支，用记号笔分别编上,10,-2,、,10,-3,、,10-,4,、,10,-5,、,10,-6,。取已稀释成,10,-1,的土壤液，振荡后静止,0.5min,，用无菌吸管吸取,1mL,土壤悬液加入,10,-2,的无菌水的试管中，并在试管内,轻轻吹吸,数次，使之充分混匀，即成,10,-2,土壤稀释液。同法依次连续稀释至,10,-3,10,-4,、,10,-5,、,10,-6,土壤稀释液。,在土壤稀释过程中，需换用不同的吸管（或枪头）,实验内容,1,（微生物的分离,稀释涂平板法,）,倒平板,将培养基加热融化，待冷却至,55,60,时，倒平板。,吸取稀释液,取一吸管，以无菌操作法分别吸取,10,-4,、,10,-5,、,10,-6,土壤稀释液,0.1mL,，加在已制好的平板培养基上。,涂板,用玻璃刮铲将稀释液在培养机上充分混匀铺平，倒置于恒温箱培养。,计算出每克土壤中细菌的数量。,即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种液的稀释倍数即得,。,挑取单个菌落，进行划线分离。,每毫升样品中微生物细胞数,=,每皿菌落平均数,1/,取样体积数,稀释倍数,微生物的分离,平板涂抹法,实验,内容,2,（微生物的分离,混合法）,吸取稀释液,以无菌操作法分别吸取,10,-4,、,10,-5,、,10,-6,土壤稀释液,0.1mL,，加在灭菌的空培养皿中。,倒入已融化的培养基,混菌,在平坦的桌面上，水平轻轻转动培养皿，使菌液、培养基充分混匀铺平，凝固后倒置于恒温培养箱中培养。,计算出每克土壤中放线菌的数量。,挑取单个菌落，进行划线分离,混匀凝固,28,30,培养,实验,内容,3,（微生物的分离,平板划线法）,制平板。,凝固后，用接种环取相应的菌液一环（,10,-1,）在平板上划线。,1.,连续划线法：,将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作连续划线。完毕后，倒置于,28,30,0,C,温室培养。,2.,分区划线法：,用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液,1,环，先在培养基的一边作第一次平行划线,34,条，再转动培养皿约,60,0,C,角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划线。划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。,挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化，最后得到纯培养。,平板划线菌落分离效果图,挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化，最后得到纯培养。,五、实验结果,1.,你所做的涂布平板法和划线法是否得到了单菌落？如果不是请分析其原因并重做。,2.,在三种不同平板培养基上你分离得到哪些类群的微生物？简述它们的菌落特征。,六、思 考 题,1.,平板培养时为什么要把培养皿倒置？,2.,在划线分离时，为什么每次都需要将接种环上的剩余物烧掉？,
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