猪链球菌病诊断-课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,猪链球菌病诊断,猪链球菌病诊断,一、病原分离,1,采样,活猪:采样用灭菌棉拭子擦拭扁桃体,病死猪:扁桃体、肺、肝、血液,有脑炎症,状取脑组织,关节炎可取关节囊液,一、病原分离1 采样,2,分离培养,(,1,)培养基:,THB,培养基、绵羊血或马血平板,(,2,)培养条件:需氧兼性厌氧、,37,、,pH7、2,猪链球菌,2,性营养要求比马链球菌兽疫亚种低,后者需加,3-5%,的犊牛血清,2 分离培养,二、临床诊断,主要表现为,败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎、心内膜炎、关节炎等。,但不同链球菌病原引起的症状类似,故该诊断不能用于确诊。,二、临床诊断 主要表现为败血症、化脓性淋巴结炎、脑,关节炎症状,关节炎症状,败血症,败血症,1,染色镜检,猪链球菌,2,型:,革兰氏染色阳性、,菌体呈圆形或椭圆形,直径小于,2、0,m,一般呈短链或成双排列,革兰氏染色阳性,菌体表面能形成荚膜。,二、微生物学诊断,1 染色镜检二、微生物学诊断,马链球菌兽疫亚种:,革兰氏阳性球菌,直径,0、51um,液体培养基中呈长链,菌体表面能形成荚膜。营养要求较高,在,5%,犊牛血清生长良好。依照类,M,蛋白抗原性的差异,该菌至少有,15,个血清型。,马链球菌兽疫亚种:,马链球菌兽疫亚种,猪链球菌,2,型菌(,溶血),马链球菌兽疫亚种,图,2,猪链球菌,2,型,(ZY05719,),猪链球菌病诊断-课件,ATCC 35246,株,ATCC 35246株,2,培养特性,猪链球菌,2,型:,菌落形态 血平板上呈灰白色小菌落,粘稠,2,型在绵 羊血平板上呈,溶血,马血平板则呈,溶血。,2 培养特性,马链球菌兽疫亚种:,在血清肉汤培养基中培养该菌,开始时有轻度混浊,继而变清,于管底形成沉淀。,于,5,绵羊血琼脂(,THA,)培养基上培养,24 h,大部分菌株形成,3,4mm,的粘液样大菌落,产生明显的,溶血。小部分呈非粘液样菌落,大小约,1mm,左右。,马链球菌兽疫亚种:,3,生化鉴定,猪链球菌,2,型:,发酵乳糖、海藻糖、水扬苷,部分菌株发酵,棉实糖、菊糖;不发酵甘露醇、山梨醇,3 生化鉴定,马链球菌兽疫亚种:,能水解精氨酸,发酵乳糖、水扬苷、山梨醇产酸。不能发酵菊糖、甘露醇、棉子糖与海藻糖。,V-P,试验阴性,不产生靛基质,不还原硝酸盐,不液化明胶。,马链球菌兽疫亚种:,三、免疫学诊断,1,玻板凝集实验,用于猪链球菌,2,型快速定型,但要求抗体效价高;马链球菌兽疫亚种只能用于定群,2,乳胶凝集实验,敏感性较高,结果容易判断,但有非特异性,三、免疫学诊断1 玻板凝集实验,3,免疫荧光,猪链球菌,2,型:,用,MRP,特异抗体可用于菌体表面其分布的观察,但需用激光共聚焦显微镜。,马链球菌兽疫亚种:用类,M,蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观察,3 免疫荧光,MRP,单抗介导,FITC,标记,SS2,表面,MRP,的激光共聚焦图像,MRP,单抗介导,FITC,标记,SS2,表面,MRP,的激光共聚焦图像,MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像,SS2,多抗介导,FITC,标记的,SS2,的激光共聚焦图像,SS2多抗介导FITC标记的SS2的激光共聚焦图像,ELISA,常用链球菌多克隆抗体包被,以,MRP,或类,M,蛋白的单克隆抗体夹心,敏感性高,特异性较强。,ELISA,四、分子诊断,1,多酶电泳法:,原理:不同型猪链球菌,胞内酶分子的氨基酸有差异,因而电荷有差异,在电场中,其迁移率有差异。,用于不同型链球菌的分析,四、分子诊断1多酶电泳法:,2,限制性酶切图谱分析,原理:不同种或亚种链球菌基因不同,因而用限制性内切酶酶切后,其电泳图谱不同。,用于分离株变异分析,亦可用于不同种或型的鉴定,2 限制性酶切图谱分析,随机扩增多态,DNA,分析(,RAPD,),用多对随机引物进行,PCR,扩增,可得到不同的产物,且产物具有多态性。,可用于种或型的鉴定或分离株变异分析,随机扩增多态DNA分析(RAPD),PCR,猪链球菌,2,型:,mrp,、,ef,、,cps2,、,orf2,以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测,cps2,具有型特异性,PCR,bp,970,744,622,557,mrp, ef, sly, CPS 2,1 2 3 4 5,1: HA9801;,2: ZY05719;,3: Marker;,4,5:,阴性对比,bp970744622557 mrp, ef, sly,250bp,500bp,750bp,M 1 2,2000bp,1000bp,Maker,1、HA 9801(,cps2,),2、 ZY05719 (,cps2,),cps2,250bp 500bp750bpM 1,250bp,500bp,750bp,2000bp,M 1 2 3 4,ef,mrp,gdh,orf2,Maker,1、,ef,(626 bp),2、,mrp,(316 bp),3、,gdh,(688 bp),4,、orf2,(858 bp)、,250bp 500bp750bp2000bpM 1,250bp,500bp,750bp,1000bp,2000bp,250bp,500bp,750bp,1000bp,2000bp,1099bp,1310bp,M 1,M 1,sly,fbps,Maker,1,、 sly,Maker,1、,fbps,250bp 500bp750bp1000bp2000bp25,感谢您的聆听！,感谢您的聆听！,