细胞表面黏附分子的荧光标记及观察

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,细胞表面黏附分子的荧光标记及观察,细胞生物学实验,东北师范大学 生命科学学院,2009年4月29日,赵 佳,实验,原理,(一),-,粘附分子,滚动,激发,牢固粘附,越出血管,功能举例：,参与炎症过程中白细胞与血管内皮细胞粘附,什么是粘附分子？,是一类介导细胞间、细胞与胞外基质间相互接触和结合的,膜表面糖蛋白,。,实验,原理,(二),-,免疫荧光标记,抗体（一抗）,荧光物质（二抗）,待检抗原,间接免疫荧光,直接免疫荧光,时间,特异性,实验目的,了解细胞表面粘附分子,掌握直接,免疫荧光标记,的方法,实验,步骤,1收集生长状态良好的悬浮细胞Jurkat，1200rpm离心5,min,，弃上清。,细胞沉淀不要丢失,2,1ml PBS重悬细胞,，,1200,rpm离心5,min,，弃上清。,加,200lPBS重悬细胞，等体积加入多聚甲醛固定液，室温固定15,min,。,3,2000 rpm离心5,min,，弃上清。,4,1ml PBS重悬细胞，洗涤残留的多聚甲醛，2000 rpm离心5,min,，弃上清。,5,50,l PBS 重悬细胞。细胞悬液中加入1,FITC标记的,一抗，混匀。室温作用,30min,。,避光,6,PBS重悬细胞，洗涤未结合的抗,体,分子，2000 rpm离心5,min,，弃上清。,7,50,lPBS 重悬细胞，取1020l悬液滴于载玻片上，盖片,后,，荧光显微镜观察。,在显微镜室滴加,细胞生物学实验,东北师大 生科院,注意事项,移液枪的使用,吸一打二，慢吸快打。,不能,倒置,。枪身防腐蚀。,用后枪头立即打掉。,用前看量程,，不能,拧过量程,。,细胞表面黏附分子的荧光标记及观察,预期结果,作业,与思考,记录实验结果。,进一步了解粘附分子。,谢谢大家,