experiment4酵母菌形态观察

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,（,1,）,酵母菌的形态观察,及死活细胞的鉴别（,2,）酵母菌子囊孢子的观察,实验八,一、目的要求,1.,观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。,2.,学习掌握区分酵母菌死、活细胞的实验方法。,3.,掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。,4.,学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。,二、基本原理,酵母菌形态,酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是,出芽生殖,，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用,美蓝染色浸片,来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。,二、基本原理,美蓝染色液,美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。,美蓝（氧化型）,蓝色,美蓝（还原型）,无色,还原剂,氧化剂,二、基本原理,死活细胞鉴别原理,美蓝（氧化型）,蓝色,美蓝（还原型）,无色,酵母活细胞,新陈代谢,还原能力,子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。麦氏,(,McClary,),培养基,(,葡萄糖醋酸钠培养基,),有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。,二、基本原理,子囊孢子观察,三、实验器材,1.,菌种：,酿酒酵母（,Saccharomyces,cerevisiae,),2.,溶液与试剂：,0.1%,吕氏碱性美蓝染液，,5%,孔雀绿，,0.5%,沙黄、,95%,乙醇,3.,培养基：,麦芽汁琼脂斜面，麦氏琼脂斜面。,4.,仪器或其他用具：,显微镜，载玻片，盖玻片酒精灯、接种环等。,四、操作步骤,美兰染色,在载玻片中央加一滴吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌苔，混合均匀；,（注：染液不宜过多或过少）,用,镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上；（,注：盖玻片不宜平着放下）,将,制片放置约,3min,，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。,染色,30min,后再次观察，注意死活细胞数量的变化；,用,其它浓度的吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作。,四、操作步骤,子囊孢子观察,1.,菌种活化：,将酿,酒酵母,移种至新鲜的麦芽汁琼脂斜面上，,25,28,度,培养,24h,左右，然后再转种,2,3,次。,（注：麦芽汁斜面培养基需用新配制、表面湿润的。）,2.,产孢培养：,将经活化的菌种转接到麦氏琼脂斜面上，,25,28,度培养约一周。,3.,制片：,取经产孢培养的酵母斜面培养物，在洁净载玻片上按常规涂片、干燥、固定。,4.,染色：,滴加孔雀绿染液染色,1min,。,5.,脱色：,用,95%,的乙醇脱色,30s,，水洗。,6.,复染：,用番红复染,30s,，水洗，用吸水纸吸干。,7.,镜检：,干后用油镜观察子囊孢子呈绿色、菌体和子囊孢子呈粉红色。,五、实验报告,1.,结果,（,1,）,绘图说明你所观察到的酵母菌的细胞结构及出芽生殖方式。,（,2,）绘图说明酿酒酵母的营养细胞、子囊和子囊孢的形态特征。,2.,思考题,（,1,）吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量 有何影响试分析其原因。,（,2,）在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌,（,3,）如何区别酵母菌的营养细胞和释放出子囊外的子囊孢子,（,4,）酵母菌在实际应用中有什么作用？,酵母菌图片（,1,）,酵母菌图片（,2,）,酵母菌图片（,3,）,酵母菌子囊孢子的形成过程,1,、,2,、,3,、,4,：两个细胞结合；,5,：接合子；,6,、,7,、,8,、,9,：核分裂；,10,、,11,：核形成孢子,