细菌培养技术

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,细菌培养技术,南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心,教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生,实验课时：,4,学时,课程类型：专业实验课,课程要求：必修,每组人数：,2,人,实验目的和要求,掌握细菌的培养方法。,掌握平板划线法、斜面、液体和半固体培养基等各种接种方法。,熟悉接种工具、接种环境要求和无菌操作要领。,学会观察平板、斜面、液体、半固体培养基中细菌的生长现象。,实验内容,常用细菌培养方法。,细菌的分离培养和接种技术。,细菌生长现象观察。,一、常用细菌培养方法,需氧培养法（一般培养）,适用于需氧菌和兼性厌氧菌培养。,培养温度：,37,（采用恒温培养箱）。,培养时间：,18,24h,。,二氧化碳培养法,适用于奈瑟菌属和布鲁菌属等苛养菌培养。,可采用烛缸法、二氧化碳培养箱。,一、常用细菌培养方法,微需氧培养法,适用于空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等微需氧菌培养。,可采用抽气换气法。,厌氧培养法,适用于专性厌氧菌培养。,厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等。,二、细菌的分离培养和接种技术,(,一,),接种工具,接种针和接种环：由三部分组组成，即环（针）、金属柄和绝缘柄。接种前后都要过火灭菌。接种针用于穿刺接种细菌，接种环用于固体、液体培养基的细菌接种。,L,型玻璃棒：用于琼脂平板涂布接种细菌。,（二）接种环境,操作需在接种罩、超净工作台或无菌室内进行。,（三）细菌接种的基本程序,灭菌接种环,沾取标本,接种,灭菌接种环,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境,细菌接种的基本程序,取菌种试管和待接种的斜面试管,灭菌接种环,沾取标本,接种,接种后灭菌接种环,（四）接种方法,1.,平板划线接种法,：,目的：,使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。,方法：,分区划线法：适用于含菌量较多的标本。,连续划线法：适用于含菌量较少的标本。,分区划线法,第一区划线,灭菌接种环,第二区划线,灭菌接种环,第三区划线,灭菌接种环,连续划线法,（四）接种方法,2.,液体培养基接种法,可观察细菌在培养基中的生长现象或用作生化反应实验。,（四）接种方法,3.,半固体培养基接种法：,穿刺接种法,，用于保存菌种或观察细菌动力。,1,1,（四）接种方法,4.,斜面接种法：,用于鉴定和保存菌种。,（四）接种方法,5.,涂布接种法：,用于测定标本中活菌数和药敏实验细菌接种。,（四）接种方法,6.,倾注培养法：,用于细菌计数。,将上述已接种细菌的培养基置,37,恒温培养箱中孵育,18,24h,，观察细菌的生长现象。,三、细菌在培养基上的生长现象,1,、细菌在,固体,培养基中的生长现象,菌落,定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。,菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。,菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。,菌落与菌苔,菌落,菌苔,2,、细菌在,液体,培养基中的生长现象,混浊,沉淀：多见于链状排列的细菌。,菌膜：多见于厌氧菌。,细菌在液体培养基中的生长现象,菌膜,菌沉淀,均匀浑浊,对照,3,、细菌在,半固体,培养基中的生长现象,有鞭毛细菌：,在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。,无鞭毛细菌：,只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。,细菌在半固体培养基中的生长现象,有动力,现象,无动力,现象,