疫苗综合知识

,用心为养户提升效益,疫苗及综合知识,喜牧技术部 李德如,2,012,年,9,月,4,日,l,主要内容,疫苗综合知识,疫苗的卖点与推广,成功案例分享,疫苗综合知识,1,疫苗的定义和分类,2.,疫苗生产工艺简介,3.,疫苗生产质量控制,4.,常用疫苗简介,疫苗定义,由特定细菌、病毒、寄生虫、枝原体、衣原体等微生物制成的，接种动物后能产生自动免疫和预防疾病的一类生物制剂。,常用猪疫苗分类,活疫苗,弱毒疫苗,基因缺失疫苗,多价血清疫苗,死疫苗,全病毒灭活苗,合成肽疫苗,亚单位疫苗,联合疫苗,弱毒疫苗,该类疫苗是指通过人工致弱或筛选的自然弱毒株，但仍保持良好的抗原性和遗传特性，用其制备的疫苗即弱毒活疫苗。（猪瘟，蓝耳等）,弱毒疫苗,优点,免疫活性高，接种较小的剂量即可产生坚强的免疫力,接种次数少，不需要使用佐剂，抗体产生快，免疫期长,能诱发全面、稳定、持久的体液、细胞和粘膜免疫应答,缺点,有效期短和稳定性较差，产生的抗体滴度下降快,运输、储存与保存条件要求较高,污染其它病毒的风险（,BVDV,）,对于研究不成熟的疫苗有很大毒力反强的风险,灭活疫苗,此类疫苗是将病原微生物经理化方法灭活后，仍然保持免疫原性，接种动物后能使其产生自动免疫，这类疫苗称为灭活疫苗。（细小、圆环、自家苗）,灭活疫苗,优点,易于制备，成本低,稳定性高，疫苗安全性高,易于保存，储存及运输方便,易于制备多价疫苗,缺点,抗体产生慢，免疫力维持时间短，需要多次重复接种,主要诱发体液免疫，不能产生细胞免疫或黏膜免疫应答,接种剂量较大，不良反应多，易应激,通常需要用佐剂或携带系统来增强其免疫效果,基因缺失苗,本类疫苗是用基因工程技术，,去除与毒力或,毒力相关基因片段，使病原微生物毒力减低或丧,失。用缺失突变毒株制成的疫苗。,技术路线：,病原体基因工程方法去除致病性,基因或非必要糖蛋白保持免疫原性降低致病,性。,（如伪狂犬病毒,TK,、,gE,、,gG,缺失疫苗等）。,基因缺失苗,特点,安全性好，毒力不易返祖,免疫原性好，产生免疫力坚实,免疫期长，可适于局部接种，诱导产生黏膜免疫力,易于鉴别，区别疫苗毒和野毒,缺点,成本偏高,理论上存在基因重组可能,亚单位疫苗,本类疫苗是从细菌或病毒粗抗原中分离提取某一种或,几种具有免疫原性的生物学活性物质，除去“杂质”后而制,成的疫苗。（如大肠杆菌,k88,k99,987p,等）。,优点,疫苗不含有微生物的遗传物质，因而无不良反应,使用安全，免疫效果较好,缺点,生产工艺复杂，生产成本较高，不利于广泛应用,多价疫苗,是指将同一种细菌或病毒的不同血清型混,合而制成的疫苗。,（如猪链球菌、副猪多价血清灭活疫苗等）。,特点,对多血清型的微生物所致疫病的动物可获得完全的保护力,血清型多，适于不同地区使用,联合疫苗,指由,2,种以上的细菌或病毒联合制成的（如猪瘟、猪丹毒、猪巴氏杆菌三联活疫苗等）。,优点,接种动物后能产生相应疾病的免疫保护，减少接种次数，使用方便，打一针防多病。,缺点,在猪病的免疫预防上使用单苗免疫效果好，多联苗免疫效果不确实，尽可能少用。,合成肽疫苗,用化学方法人工合成多肽作为抗原（如,五号苗等）。,优点,纯度高、稳定、免应激小。,缺点,人工合成多肽和天然肽链结构上做不到完全一致，免疫原性相对较差。,疫苗生产工艺流程,菌（毒）种,培养物（培养基、动,物、禽胚或细胞等）收获,抗原,（培养,液、含毒组织、胚液或细胞液等）配苗,分装,冻干,成活疫苗或,灭活,后制成灭,活疫苗。,菌（毒）种的筛选程序和内容,细胞,EID50,ELD50,TCID50,稳定性实验,冻干、冷冻或冷藏保存,反应原性,免疫原性,血清学实验,攻毒保护实验,病毒分离,纯粹性试验,致病性试验,抗原性试验,原动物,LD50,筛选出毒力强、抗原性好、生长稳定、纯净的毒株，用于制备疫苗、诊断液和治疗,用抗体或疫苗效力检验用,实验动物,鸡胚,细胞,反应原性,纯粹性试验,抗原性试验,原动物,致病性试验,病毒分离,弱毒菌（毒）种的选育,弱毒菌（毒）种的选育,自然弱毒株的分离,人工诱变致弱,同源动物,（如,NDV,LaSota,株）,异源动物,（,HVT,FC126,株）,化学途径,物理途径,生物途径,亚硝基胍,醋酸坨,洗衣粉,高温,紫外线,适应非易感动物,或细胞,杂交减毒,菌（毒）种选择,分类,强毒：,通常指从得病动物体内分离到的致病毒株，只能用于制造灭活疫苗和检验用,弱毒：,通常是采用人工的方法用强毒致弱而成，一般于制造活疫苗,菌（毒）种质量标准,遗传学上相对纯一与稳定,反应原性和免疫原性优良,毒力应在规定的范围以内,生物学特性明显、历史清楚,兽用疫苗制备技术,兽用灭活疫苗的制备技术,灭活疫苗是用菌（毒）种培养物或含毒组织或细胞培养物，经化学灭活剂灭活或加热处理，使微生物失去活性而保持免疫原性，再加入适当的防腐剂或加入免疫佐剂制成。,兽用疫苗制备技术,兽用弱毒活疫苗的制备技术,弱毒活疫苗是用人工培育的弱菌（毒）株或自然弱（无）毒菌（毒）株或异种菌（毒）株或基因工程弱毒疫苗株生产的，对原宿主动物致病性低或是无致病性，但能使接种动物产生免疫力，以抵抗由该种病原引起的疾病。,细菌疫苗的制造流程,蛋白胨、肉浸液等原料,培养基,配制、灭菌,菌种,生产用种子,培养,菌液,菌苗原液,配苗,分装,冻干,、扎盖帖签,活疫苗,原料,佐剂,灭活菌液,配苗,乳化,分装、扎盖、帖签,灭活疫苗,灭活,检验,配制、灭菌,保护剂,原料,配制、灭菌,病毒性细胞疫苗的制造工艺流程,健康动物（或胚胎）,组织,原料,细胞悬液,生长细胞,病毒液,配苗,分装,冻干,、扎盖帖签,活疫苗,基础种毒,生产用种毒,原料,保护剂,配制,灭菌,细胞培养液,传代细胞,灭活病毒液,配苗（混匀、,乳化,）,分扎盖帖签装,灭活疫苗,检验,原料,佐剂,配制,灭菌,灭活,检验,配制,培养收获,病毒性组织疫苗的制造工艺流程,感染动物或胚胎,分装、扎盖、贴签,健康动物或,SPF,鸡胚等,健康动物或,SPF,鸡胚等,动物或,SPF,鸡胚等,基础种毒,生产用种毒,收获感染组织或胚液,纯化配制成含毒悬液,配苗,分装,冻干,活疫苗,保护剂,原料,配制,检验,灭活病毒液,配苗、,乳化,灭活疫苗,原料,佐剂,配制,灭活,检验,影响疫苗质量的关键环节,生产用菌（毒）种的制备是否优良,工艺的稳定性是否可靠,外源病原污染是否能控制好,制苗用抗原制备（微生物增殖）是否高效,冻干保护剂的选择是否合理,理想的疫苗特点,种毒稳定、不易返强,相对安全，安全范围广,造价成本低、易于培养生产,产生抗体快、免疫期长,批次间稳定、易于保存,佐剂好、应激小,易于检测,影响疫苗质量的关键环节,灭活疫苗,生产用菌（毒）种的制备是否优良,制苗用抗原制备（微生物增殖）是否高效,抗原灭活是否彻底,乳化工艺是否先进,浓缩和纯化是否干净,佐剂和免疫副反应是否合格,影响疫苗免疫效果的因素,母源抗体,抗原竞争,免疫间隔,免疫抑制病,免疫麻痹,疾病和应激,药物、营养、消毒,影响疫苗免疫效果的因素,母源抗体干扰,定期检测种猪抗体，初免跟根母源抗体，二免结合自身抗体；没检测根据本场发病情况在出现症状前,3,到周进行免疫,抗原竞争,通常情况下不建议同时打几种苗或多联苗,同时免疫两种或多种,同类疫苗,往往会产生干扰现象。,干扰的原因,1.,两种病毒感染的受体相似或相等，产生竞争作用,2.,一种病毒感染细胞后产生干扰素，影响另一种病毒的复制。,影响疫苗免疫效果的因素,免疫间隔,同种疫苗免疫间隔为,3-4,周，最好进行二免，不同疫苗免疫间隔最好,1,周。,免疫抑制病,蓝耳、圆环、猪瘟、霉菌毒素等。,应激因素,各种疫病、追捕、运输、打耳号、麻醉、高温、寒冷、潮湿、缺氧、惊吓、噪音等。,影响疫苗免疫效果的因素,免疫麻痹,疫苗剂量过大、打疫苗过频等。,营养不平衡,由于抗体成份是蛋白质，必须保证,蛋白质和合成蛋白质所需的微量元素、维生素、氨基酸供给。,健康状况,影响疫苗免疫效果的因素,消毒,注射部位不用消毒。,免疫活疫苗期间不能对猪舍消毒。,药物和激素,病毒活疫苗：不加抗病毒药物（病毒唑）,细菌活疫苗：不加抗生素（广谱）,激素：性激素、地塞米松、肾上腺皮质激素,抑制淋巴细胞增殖：氯霉素、氟苯尼考及某些磺胺类药物等,免疫程序的制定,制定依据,当地和本猪场疫病流行情况和规律,猪场的生产实际与饲养管理水平,母源抗体的干扰,猪的种类、年龄和健康状况,注；没有一种免疫程序适用所有的地区和所有的农场免,疫程序，免疫程序也不是固定不变的，应根据实际应用的,效果随时进行合理的调整。血清学抗体监测和疫苗免疫效,果的评价是重要的参考依据。,常用疫苗特点,猪瘟疫苗,伪狂疫苗,圆环疫苗,蓝耳疫苗,猪瘟疫苗特点,分类,乳兔组织苗,细胞苗,脾淋苗,ST,猪瘟苗,猪瘟疫苗特点,组织苗,（猪瘟兔化弱毒乳兔组织活疫苗）,特点,容易制作造价成本低,免疫原性好、免疫期长,容易发生过敏反应（不用）,可用于猪瘟的加强免疫,猪瘟疫苗特点,细胞苗,猪瘟兔化弱毒细胞活疫苗,牛睾丸细胞疫苗和传代细胞疫苗,特点,不容易发生过敏反应,免疫原性稍差，须加大剂量,可能污染牛病毒性腹泻病毒（,BVDV,）,猪瘟疫苗特点,脾淋苗,（猪瘟兔化弱毒成兔脾、淋活疫苗）,特点,抗体产生快，免疫滴度高,批间差异小、稳定性好,含丰富的免疫因子，可短时期内控制疫情,免疫期相对较短,生产成本高，纯度有限（兔子有限）,猪瘟疫苗特点,ST,传代细胞苗,特点,无外源病原污染,抗原含量高,抗体产生快,质量稳定,副作用小、使用方便,猪瘟活疫苗质量控制要素,菌毒种,纯净（细菌和外源性病毒污染）,含毒量高于国家标准,代次控制在,5,代以内,组织苗,家兔的选择（兔种、年龄、体重、健康状况等）,细胞苗,高效、纯净（无污染外原病毒等）,脾淋苗,无掺假（有足够的兔源）,猪瘟疫苗免疫方法和特点,由免疫程序不当导致的免疫失败严重,集中统一免疫（一刀切）,跟胎免疫,仔猪零免,猪瘟疫苗免疫方法和特点,普免（一刀切）,：种猪,1,年至次集中统一免疫。,优点,免疫程序简化，生产上容易操作,猪群免疫时机一致，有利于迅速控制疫情,缺点,妊娠期免疫，会引起胎盘感染或导致仔猪初生小猪免疫耐受，妊娠后期有可能流产。,不同日期分娩的母猪在哺乳期内的抗体水平不一致，,很难避免母源抗体的干扰。,相同日龄不同母猪所产的仔猪母乳抗体水平不一致，,仔猪首免时间不好确定,，首免日龄很难统一。,猪瘟疫苗免疫方法和特点,跟胎免疫,：即仔猪断奶时对,断奶时母猪与其仔猪同时免疫,。,优点,每一头母猪从接种疫苗到分娩的时间间隔几乎等同,每一头母猪的抗体水平在相同的哺乳期内也接近一致,相同日龄的仔猪的母乳抗体水平比较均匀,有利于通过仔猪母源抗体消长规律确定仔猪首免日龄,缺点,工作量加大，免疫不方便,弱毒常年存在于猪场内，增加发病风险,猪瘟疫苗免疫方法和特点,零免,：刚生下来小猪免疫后,11.5h,后再吃乳。,优点,尽早获得足够抗体保护，阻止野毒入侵,适合猪瘟感染严重场的免疫,缺点,工作量加大，生产上不好操作,易引起过敏,猪伪狂犬疫苗,猪伪狂犬病病原特点,PRV,只有一个血清型，不易变异，不同毒株在毒力和生物学特点方面存在差异。,PRV,有,70,个以上基因，可编码,70-100,种病毒蛋白质。,gB,、,gD,、,gH,、,gL,等是病毒增殖必须蛋白质,TK,、,gC,、,gG,，,gI,、,gE,等是病毒增殖非必须糖蛋白,适合于粘膜免疫，可滴鼻,伪狂犬疫苗,疫苗分类,全病毒灭活苗,(BYK628,株等,),普通弱毒苗,(,鄂,A,株，,BUK,株等,),基因缺失苗,天然基因缺失活疫苗,(,Bartha,k61,株等,),人工基因缺失活疫苗,(HB-98,株等,),常用猪伪狂犬病疫苗种类,天然基因缺失活疫苗,Barthak61,株,(,缺失,gE,及,gI,基因,),BUK,株,(,缺失,gE,基因,),。,人工基因缺失活疫苗,TK+gG,双基因缺失活疫苗,TK+gE,双基因缺失活疫苗,TK+gG+gE,三基因缺失活疫苗,TK+gG,gE+gI,四基因缺失活