抗核抗体基本概念及对应临床疾病概述课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/4,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/11/4,*,单击此处编辑母版标题样式,2020/11/4,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,2020/11/4,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,抗核抗体基本概念及对应临床疾病概述,抗核抗体基本概念及对应临床疾病概述抗核抗体基本概念及对应临床疾病概述传统定义,针对细胞核成分的自身抗体的总称。,广义定义,针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称,靶抗原存在于包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂结构等部位抗核抗体的定义2020/11/42,抗核抗体基本概念及对应临床疾病概述抗核抗体基本概念及对应临床,传统定义,针对细胞核成分的自身抗体的总称。,广义定义,针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对,ANA,的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称,靶抗原存在于包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂结构等部位,抗核抗体的定义,2020/11/4,2,传统定义抗核抗体的定义2020/11/42,ANA,可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断、病情判断和疗效观察的指标,在非结缔组织病中也可出现阳性。,正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且常表现为,IgM,型,高滴度,ANA,则高度提示自身免疫性疾病,目前，,ANA,检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。,ANA,检测的临床意义,2020/11/4,3,ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的,系统性红斑狼疮,活动期,非活动期,药物诱导的红斑狼疮,混合性结缔组织病（,MCTD,、,Sharp,综合征）,类风湿性关节炎,进行性系统性硬化症,多发性肌炎及皮肌炎,干燥综合征,慢性活动性肝炎,溃疡性结肠炎,其它风湿病,正常人,95,100,80,100,100,100,20,40,20,50,85,95,30,50,70,80,30,40,26,5-10,ANA,检测的临床意义,2020/11/4,4,系统性红斑狼疮ANA检测的临床意义2020/11/44,ANA,实验室检测策略推荐,2020/11/4,5,ANA实验室检测策略推荐2020/11/45,ANA,间接免疫荧光法筛查实验,2020/11/4,6,ANA间接免疫荧光法筛查实验2020/11/46,间接免疫荧光法检测,ANA,基本原理,间接免疫荧光法,包被,HEp-2,细胞的基质玻片,样本中,ANA-IgG,FITC,标记的抗人,IgG,抗体,2020/11/4,7,间接免疫荧光法检测ANA基本原理间接免疫荧光法 包被HE,抗原谱完整(细胞核、细胞浆中近百种自身抗原),人源细胞，无种属非特异荧光干扰,肿瘤细胞，易于培养及商品化生产,核质比大，可观察到多种不同荧光核型,ANA,筛查的经典和标准基质:,HEp-2,2020/11/4,8,抗原谱完整(细胞核、细胞浆中近百种自身抗原)ANA筛查的经,均质型,核点型,着丝点型,核仁型,Scl-70,粗颗粒型,细颗粒型,核膜型,.,核糖体,P,蛋白,线粒体型,高尔基体,溶酶体,肌动蛋白,波形蛋白,基于,Hep-2,细胞为基质的,ANA,初筛实验,2020/11/4,9,均质型核点型着丝点型核仁型Scl-70粗颗粒型细颗粒型核膜型,ANA,间接免疫荧光法筛查试验的实际价值,初步甄别自身免疫性疾病患者（阴阳性结果）,尽可能判断荧光核型（缩小靶抗原确认实验范围）,获取抗体滴度信息（判断病情进展、预后等）,考虑到荧光法筛查试验存在主观性强的特点，因此应以一种客观和现实的态度去面对筛查试验结果,2020/11/4,10,ANA间接免疫荧光法筛查试验的实际价值初步甄别自身免疫性疾病,几个相对常见且重要的荧光核型,均质型,核点型,着丝点型,核仁型,粗颗粒型,核膜型,.,核糖体,P,蛋白,线粒体型,肌动蛋白,常见且重要核型的标准,核型表现相对典型,阳性率相对较高,靶抗原相对明确,2020/11/4,11,几个相对常见且重要的荧光核型均质型核点型着丝点型核仁型粗颗粒,应重视,ANA,滴度的检测,抗体滴度的临床意义,1,、明确界定自身免疫性疾病患者；,2,、作为疾病进程、临床疗效和病情预后及转归等的判断指标,当前国际主流,ANA,间接免疫荧光法检测系统广泛采用的起始稀释度为,1:40,。即该检测系统的正常参考范围为,1:40,。梯度稀释时的稀释因子为,1:2,。,HOB,公司产品推荐按照,1:80,开展稀释。,2020/11/4,12,应重视ANA滴度的检测抗体滴度的临床意义2020/11/41,荧光强弱及血清稀释度,荧光强弱判读,观察标本的特异性荧光强度一般用“,+,”号表示。,“,”,为无或仅见极微弱荧光；,“,+,”为荧光较弱但清楚可见；,“,+,”为荧光明亮；,“,+,”为耀眼的强荧光。,临床上根据特异性荧光强度达“,+,”以上判定为阳性,抗体梯度稀释,起始稀释：,1:80,梯度稀释（稀释因子,2,）,1:160,1:320,1:640,1:1280,1:2560,直至抗体转阴,2020/11/4,13,荧光强弱及血清稀释度荧光强弱判读 抗体梯度稀释2020/11,各稀释度的反应性,抗体滴度,临床意义,1:80,1:640,阳性,+,1:80,阳性，需结合临床表现综合判断,阳性,+,1:160,阳性，提示可能存在相关疾病,阳性,+,弱,+,1:320,明确阳性，提示可能存在相关疾病,阳性,+,阳性,+,1:640,中等阳性，提示可能存在相关疾病,阳性,+,阳性,+,1:1280,强阳性，高度提示存在相关疾病,阳性,+,阳性,+,1:2560,极强的阳性，高度提示存在相关疾病。,ANA,荧光滴度判读举例,2020/11/4,14,各稀释度的反应性抗体滴度临床意义1:801:640阳性+1,HOB,公司间接免疫荧光法产品系列,产品系列,基质,检测项目,ANA,筛查,HEp-2,细胞,ANA,各种不同核型,dsDNA,绿蝇短膜虫,抗,dsDNA,抗体,AKA,大鼠食管,抗角蛋白抗体,ANCA,中性粒细胞,乙醇和甲醛固定,抗中性粒细胞胞浆抗体,组织器官,大鼠肝,/,肾,/,胃,ASMAPCAAMALKM-1LC-1,HEp-2,细胞产品系列（举例）,166,孔,1010,孔,812,孔,2020/11/4,15,HOB公司间接免疫荧光法产品系列产品系列基质检测项目ANA筛,ANA,靶抗原确认实验,2020/11/4,16,ANA靶抗原确认实验2020/11/416,条带酶免分析法检测,ANA,基本原理,LIA,检测方法原理,底物,颜色反应,硝酸纤维膜,IgG,抗体,碱性磷酸酶标记的抗人,IgG,抗体,2020/11/4,17,条带酶免分析法检测ANA基本原理LIA检测方法原理底物颜色,ANA,谱系列,2020/11/4,18,ANA谱系列2020/11/418,U1-nRNP,和,Sm,抗原,SLE:5-30%,SLE:15-40%,MCTD:95-100%,功能:参与,mRNA,前体的剪切,2020/11/4,19,U1-nRNP 和 Sm抗原SLE:5-30%SLE:,SS-A(Ro-60),Ro-52,和,SS-B,Anti-SS-A(60 kDa),干燥综合征,.:40-95%,SLE:20-60%,新生儿狼疮,:96%,Anti-SS-B,干燥综合征,.:40-95%,SLE:10-20%,新生儿狼疮,:78%,Anti-Ro-52(52 kDa),非特异,功能:调控,RNA,翻译,功能:,RNA,聚合酶,III,辅助蛋白,X,2020/11/4,20,SS-A(Ro-60),Ro-52 和SS-BAnti-,Scl-70(DNA-,拓扑异构酶,I),功能:在,DNA,复制和转录过程中完成双链解螺旋,疾病:,硬化症:50%-75%,2020/11/4,21,Scl-70(DNA-拓扑异构酶I)功能:在DNA复制和,Anti-Scl-70,特点,局限型和弥散型硬化症病中的阳性率分别为,10%,和48%。,抗,Scl-70,抗体阳性的患者通常病情发展快、预后差、多器官累及。,2020/11/4,22,Anti-Scl-70 特点局限型和弥散型硬化症病中的阳性率,PM-Scl,抗原:几种多肽复合物(分子量间于20-100,kDa)，,主要的靶抗原为,100 kDa,相关疾病:,硬化症:2%-5%肌炎:8%重叠综合征:24%,2020/11/4,23,PM-Scl抗原:几种多肽复合物(分子量间于20-100k,Jo-1,抗原:组氨酰,tRNA,合成酶(50,kDa),细胞浆中的磷蛋白,相关疾病:,多肌炎/皮肌炎的血清学标志，阳性率为25-35%，当伴有肺间质纤维化的多肌炎,，,阳性率可高达70%。,2020/11/4,24,Jo-1抗原:组氨酰tRNA合成酶(50 kDa),着丝点,抗原：动粒中的4种蛋白：,A(17 kDa),B(80 kDa),C(140 kDa),D,蛋白(50,kDa)。,着丝点蛋白,B,为主要的靶抗原,(,与,IIF：100%),功能:分裂期纺垂体的附着点,相关疾病:硬化症:18%局限型:80%-95%(,CREST,综合征),2020/11/4,25,着丝点抗原：动粒中的4种蛋白：A(17 kDa),B(,PCNA:,细胞增殖相关核抗原,I,型,抗原:,DNA,聚合酶,的辅助蛋白,发挥控制细胞周期的作用,相关疾病:,系统性红斑狼疮的特异性抗体，但其发生率仅为,3%,。,2020/11/4,26,PCNA:细胞增殖相关核抗原I型抗原:DNA聚合酶的辅,染色体结构示意图,DNA,核小体,染色体,染色质,组蛋白,2020/11/4,27,染色体结构示意图DNA核小体染色体染色质组蛋白2020/11,dsDNA,抗原：双链,DNA，,天然,DNA(,脱氧核糖核酸骨架,),相关疾病：,dsDNA:,为,SLE,的诊断标准之一，阳性率为60-90%，不同的检测方法诊断特异性差别较大。抗体滴度与疾病的活动性、狼疮肾炎的发病风险具有相关性。,2020/11/4,28,dsDNA抗原：双链DNA，天然DNA(脱氧核糖核酸骨架),组蛋白,抗原:,H1,H2A,H2B,H3,H4，H2A-H2B，H3-H4(,主要的靶抗原为,H1,和,H2B),相关疾病:,药物诱导性,LE:100%(,抗组蛋白抗体是该病唯一的标志性抗体,),各种结缔组织病：,SLE:30-80%,SSc:30%SS:10%,2020/11/4,29,组蛋白抗原:H1,H2A,H2B,H3,H4，H,核小体,抗原:组蛋白和,DNA,形成的复合物,相关疾病:,SLE,：高特异性指标，阳性率为50-95%，特异性几乎100%,，,抗核小体抗体可独立,于,抗,dsDNA,抗体单独出现，因而抗核小体抗体与抗,dsDNA,抗体联合检测，可提高,SLE,的血清学检出率。,2020/11/4,30,核小体抗原:组蛋白和DNA形成的复合物2020/11/,40 S,亚基,60 S,亚基,P0,P1,P1,P2,P2,抗原:核糖体,60S,亚基中的3种蛋白质:,P0,P1,P2.,具备相同的碳端抗原位点,核糖体,P,蛋白,相关疾病:,SLE:,为,SLE,的高特异性指标，阳性率为5-15%，,常见于神经狼疮。,2020/11/4,31,40 S60 SP0P1P1P2P2抗原:核糖体60S,谢谢！,谢谢！,