实验六细胞骨架的光镜观察

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,实验六,(,一,),细胞骨架的光镜观察,实验目的,实验原理,实验方法,作业,返回大纲,实验目的,掌握显示细胞骨架的染色方法。,光镜观察细胞骨架纤维。,返回,实验原理,细胞质骨架是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系，由微管,微丝,中间纤维和微梁构成。细胞骨架决定着细胞形状的保持和改变,同时也是胞质中许多物质和颗粒运输以及细胞各种运动的结构基础,甚至还被认为在能量转化和信息传递方面也有作用。,本实验将着重于细胞质骨架三种组分的观察。,微管、微丝经常成束平行排列在一起,多沿细胞长轴,细胞突起分布。微管、微丝也可疏散成网状,.,微管、微丝所含蛋白,可以被考马斯亮蓝,G250,非特异性染色,在光学显微镜下呈着色清楚的细直纤维,如果用非离子去垢剂,TritonX-100,处理细胞,可将质膜结构与细胞内许多蛋白质溶解,但微管、微丝的蛋白却不被溶解破坏。因此,细胞先经,TritonX-100,处理后,再用考马斯亮蓝,G250,染色,其胞质背景着色弱,而微管、微丝着色清晰,从而提高分辨率。,返回,实验方法,撕取洋葱鳞茎内的表皮细胞,(,约,1cm,大小若干片,),置于装有,pH6.8,磷酸缓冲液,1520ml,的,50ml,小烧杯中,使其下沉。,吸去,pH6.8,磷酸缓冲液,用,1%TritonX-100 10ml,处理,20-30,分钟。,吸去,TritonX-100,用,10 ml M-,缓冲液洗三次,每次,10,分钟。,10ml 3%,戊二醛固定,0.5,小时。,吸去,3%,戊二醛,用,10mL PH6.8,磷酸缓冲液洗三次,.,每次,10,分钟。,0.2%,考马斯亮蓝,G250 3ml,染色,20,分钟。,用蒸馏水冲洗,1-2,次,细胞片置于载玻片上,加盖玻片,于普通光学显微镜下观察。,返回,作业,绘洋葱鳞茎表皮细胞骨架图,并作简要分析。,返回,