木糖葡萄球菌

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第六章 球菌,球菌引起化脓性感染，故又称化脓性球,菌。本章介绍临床最常见的兼性厌氧球,菌、即葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌,属、奈瑟菌属和布兰汉菌属。,第一节 葡萄球菌属,一、分 类,重要菌种有金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，,头状葡萄球菌，人葡萄球菌和腐生葡萄球菌。,人体分离的葡萄球菌还有溶血葡萄球菌、沃氏,葡萄球菌、模仿葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施,氏葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、耳葡萄球菌、孔,氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、解糖葡萄球菌、,山羊葡萄球菌、普氏葡萄球菌和中间葡萄球菌。,二、临床意义,凝固酶阳性葡萄球菌是重要致病菌，以急性,化脓性感染为特征，感染还可扩散或转移。,常见的感染有疖痈、切口创伤等局部感染和,骨髓炎等全身性感染。致病性与侵袭性酶类,(如血浆凝固酶)和多种毒素有关。某些菌株,还能产生肠毒素引起食物中毒；产生剥脱毒,素可引起人类烫伤样皮肤综合征；产生毒性,休克综合征毒素引起毒性休克综合征(TSS)。,凝固酶阴性葡萄球菌是人体皮肤粘膜,正常菌群，是医院感染的主要病原菌，,其中表皮葡萄球菌引起人工瓣膜性心,内膜炎、静脉导管感染、腹膜透析性,腹膜炎、血管移植物感染和人工关节,感染等；腐生葡萄球菌则是女性尿路,感染的重要病原菌，成为重要的条件,致病菌和免疫受损患者的感染菌。,感染的发生常和细菌产生夹膜多糖或糖,萼有关，它能增强细菌与生物性瓣膜、,导管等物质表面的粘附或在其表面形成,一层生物膜而保护细菌对抗杀菌物质作,用。葡萄球菌的耐药性已演变为医院感,染和临床治疗的棘手问题。,三、微生物特性,直径0.51.5m、革兰阳性球菌，,排列呈葡萄串样，无鞭毛和芽胞。,能形成荚膜。,兼性厌氧菌，营养要求不高，最适生长温,度3537，最适 pH7.47.6。普通培,养基上形成23mm呈金黄色、白色、柠檬,色等不透明圆形凸起菌落，血琼脂平板上,有透明溶血环。能在1015NaCl琼脂,中生长，接种于高盐琼脂平板上，有利于,菌种检出。,抵抗力最强，耐干燥，对多种抗生素和,消毒剂不敏感。生化反应活泼、能分解,多种糖类和蛋白质，触酶阳性。G+Cmol,为3039，携带青霉素酶和乙酰基转移,酶的质粒，能通过转导转移耐药性。,四、微生物检验,（一） 采取标本应避免正常菌群污染。,（二） 直接显微镜检查,无菌体液如脑脊液和关节穿刺液涂片革,兰染色，查见细菌具有重要临床价值；,其他体液标本如同时伴有炎性细胞也,具有参考价值，可向临床初步报告“查,见属革兰阳性葡萄球菌”。,其他体液标本如同时伴有炎性细,胞也具有参考价值，可向临床初,步报告“查见属革兰阳性葡萄球菌”。,（三）分离培养与鉴定,临床标本可接种血平板，污,染标本接种在选择平板上，如甘,露醇高盐平板，血液标本则用肉,汤增菌培养基。,孵育过夜平板上可见直径约为2-3mm，,呈金黄色、白色或柠檬色的光滑、不,透明、凸起圆形菌落，有时可见-,溶血环，挑取菌落作鉴定试验。,鉴定病原性葡萄球菌的方法,1凝固酶试验 试验所用的血浆为,EDTA抗凝兔血浆。金黄色葡萄球,菌、中间型葡萄球菌呈现阳性反,应。,(1)玻片凝固酶试验：金黄色葡萄,球菌表面有结合的凝固酶(聚集,因子)，与血浆中的纤维蛋白原,交联使菌体快速凝聚。,(2)试管凝固酶试验：细菌分泌到,菌体外的凝固酶被血浆中的协,同因子激活形成复合物，再使,纤维蛋白原转变成纤维蛋白。,2.耐热核酸酶试验 大多数金,黄色葡萄球菌、施氏葡萄球,菌、中间葡萄球菌、猪葡萄,球菌能产生耐热核酸酶。,将待测菌的过夜肉汤培养物置沸,水浴15min后，滴加于含甲苯胺蓝,核酸琼脂上已打好的直径为25mm,小孔内，置35孵育，1h后观察,结果，绕孔周围蓝色琼脂转变为,粉红环为阳性。,大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡,萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄,球菌和猪葡萄球菌为阳性。,磷酸酶试验,将待测菌种点种在加有硝基酚,磷酸盐的pH5.66.8MH琼脂上，,孵育1824h，菌落周围出现黄,色为阳性。,溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、,施氏葡萄球菌和中间葡萄球菌为,试验阳性。,将孵育24h斜面培养物接种在含,吡咯烷酮-萘基酰胺肉汤中,35,孵育2h，加入试剂后2分钟内呈现,深紫红色为阳性。,吡咯烷酮芳基酰胺酶试验,(四)药物敏感性试验,葡萄球菌属细菌药敏试验选择抗生素：,A组(常规首选药物)为苯唑西林、青,霉素；,B组(临床使用主要药物)阿齐霉素、,克林霉素、甲氨苄啶磺胺甲嗯唑、,万古霉素；,C组(对A组耐受、过敏或无反应者),用环丙沙星、庆大霉素、氯霉素；,U组(尿道中分离细菌)用诺氟沙星、,呋喃妥因。,耐甲氧西林葡萄球菌,通过药敏试验可筛选出耐甲氧西林葡萄球菌,(methecillin resistant Staphylococcus，,MRS)，它是携带mec A基因、编码低亲和力,青霉素结合蛋白导致耐甲氧西林、所有头孢,菌素、碳青霉烯类、青霉素类+青霉素酶抑,制剂抗生素的葡萄球菌，该菌是医院内感染,的重要病原菌，感染多发生于免疫缺陷患者、,老弱患者及手术、烧伤后的患者、极易导致,感染暴发流行，治疗困难、病死率高。,(六)检验结果分析与报告,葡萄球菌是临床上常见的细菌，经涂,片染色镜检观察革兰阳性球菌和典型,菌落形态，若触酶试验阳性者，应先,用凝固酶试验检查，将其分成凝固酶,阳性和凝固酶阴性细菌。,前者大多为金黄色葡萄球菌，应及,时快速鉴定和进行药敏试验，尽快,报告临床。后者大多是从输液导管、,人工植入组织中分离出的细菌，应,视为病原菌，须鉴定到菌种。,对凝固酶阴性葡萄球菌，可先用呋,喃唑酮纸片（100g/片)，杆菌肽,纸片(0.04u片)作药敏试验和氧化,酶试验，以此与微球菌属细菌鉴别，,微球菌对杆菌肽敏感而对呋喃唑酮,耐药、氧化酶试验阳性，与葡萄球,菌属正好相反。,若药物敏感性试验是甲氧西林耐药,的菌株，则报告该菌株耐所有青霉,素、头孢菌素、碳青霉烯类和-内,酰胺药-内酰胺酶抑制剂类抗生素，,同时对氨基糖苷类，大环内酯类和,四环素类抗生素也耐药。,第二节 链球菌属,一、分 类,分类发生变化，D群链球菌独立为肠球菌属, N群链球菌为乳球菌属。鉴定仍用传统的分类方法，分为：,1.具有A、C、G抗原群溶血性链球菌。,包括: 菌落直径大于0.5mm A群的化脓,性链球菌,C群、G群的马链球菌和似马链,球菌；菌落直径小于0.5mm 具A、C、,G抗原，称米勒链球菌，主要包括咽喉炎,链球菌、中间型链球菌和星座链球菌3种。,还有溶血和不溶血的细菌。,2. 具有B抗原群溶血性链球菌又称,无乳菌。,菌和草绿色链球菌群。,4. 不溶血D群抗原链球菌称牛链球菌。,二、临床意义,化脓性链球菌是致病力最强的链球菌,能产生多种毒素、M蛋白、脂磷壁酸和,链激酶、链道酶、透明质酸酶等致病因,子，可引起咽炎、呼吸道感染、丹毒、,心内膜炎和脑膜炎等，产毒株还可引起,猩红热。该群细菌可致变态反应性疾病,如急性肾小球肾炎，风湿热等。,无乳链球菌是新生儿脑膜炎的常见菌，,该菌定居于妇女生殖道，故感染多发于出,生后24h，以肺炎为主。晚发型为产后7天,至3月,以脑膜炎和菌血症为主。,B群链球菌对成人侵袭力较弱，主要有,肾盂肾炎、子宫内膜炎;糖尿病泌尿生殖道,功能失调，肿瘤和免疫功能低下者易受B,群链球菌感染。,C、G群溶血性链球菌可引起上,述相似的感染。米勒链球菌是口腔、,上呼吸道、消化道、泌尿生殖道正常,菌群，引起手术和创伤等内源性感染。,肺炎链球菌是大叶性肺炎、支气,管炎的病原菌，还可引起中耳炎、乳,突炎、鼻窦炎、脑膜菌血症。荚膜的,侵袭力起重要作用，溶血素、神经胺,酸酶也是其主要致病物质。,草绿色链球菌是人体正常菌群，从,血液中分离出该菌常被认为是污染的,细菌。然而它可引起瓣膜异常患者的,亚急性细菌性心内膜炎。血液链球菌、,温和链球菌、格氏链球菌、口腔链球,菌、中间型链球菌、常分离自深部脓,肿、尤其是肝和脑脓肿。,三、微生物特征,直径小于2m的革兰阳性球菌，呈链状排,列，无芽胞和动力，形成荚膜。肺炎链球菌,呈矛尖状，宽端相对尖端向外。,兼性厌氧菌，肺炎链球菌和草绿色链球菌,某些菌种需要CO,2,：促进其生长。营养要求,高，须在培养基中加入血液、血清。最适生,长温度3537，pH7.47.6，血平板上形,成灰白色，透明表面光滑的小菌落，环绕菌,落形成、三种特征性溶血现象，液,体培养形成絮状和颗粒沉淀。,发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳,酸为代谢终末产物，触酶阴性。链球,菌基因DNA中G+C mol为3134。,抗原结构复杂，主要有多糖抗原和蛋,白抗原，前者位于细胞壁以此可将链,球菌分类为A、D、C、D、F、G等13,群。,本菌属对干燥和消毒剂敏感，除肺,炎链球菌外，较少引起细菌耐药性。,四、微生物检验,1. 主要采咽拭标本、痰液、脓汁和血液,等标本，采集后在2h内送验，对B群,溶血链球菌的检查，第3537周妊娠,妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌素,(10gm1)和萘啶酸(15g gm1),选择性培养肉汤中孵育1824h，再,作分离培养。,2. 直接显微镜检查标本涂片革兰染色,镜检，见链状排列革兰阳性球菌有,助于无正常菌群污染标本，荚膜肿,胀试验用于检查肺炎链球菌。,3. 直接检测抗原咽拭标本的A群和阴,道标本的D群链球菌可用抗原检测，,先将标本放于含亚硝酸液中孵育片,刻，用ELISA方法检测。标本含菌,数少可出现假阴性。,4. 分离培养与鉴定,用血平板培养有助于识别溶血特性和,进一步鉴定。初代分离需用5CO环,境, 3537孵育24h, 观察菌落性状：,溶血的A、C、G群菌落较大，直径大,于0.5mm，而米勒链球菌则小于0.5mm。,B群链球菌菌较大，溶血环较A、C、G,群模糊，溶血菌落呈草绿色，肺炎链,球菌因荚膜多糖使菌落呈粘性。牛型链,球菌则为无溶血环呈灰色。,链球菌属鉴定方法,1. -溶血链球菌鉴定,(1) Lancefield群特异性抗原鉴定：B群,为无乳链球菌，F群为米勒链球菌。,(2) PYR试验：化脓性链球菌产生的吡,咯烷酮芳基酰胺酶水解吡咯烷酮B-,萘基酰胺，加入 N、N-二甲氧基肉,桂醛试剂后产生桃红色。,(3) 杆菌肽敏感试验：可作为筛选试验。,血平板上，35孵育过液后，观察,抑菌环,化脓性链球菌敏感为阳性。,(4) VP试验：挑取平板上孵育过夜菌落,置于2ml VP肉汤中，孵育6h后加入,VP试剂，摇匀30秒，出现桃红色者,为阳性。,(5) CAMP试验：无乳链球菌能产生,CAMP因子促进金葡菌溶血能力，,可作为初步鉴定试验。先将金葡,菌(ATCC25923)沿直径划线接种，,再沿垂直方向接种无乳链球菌，,两线不得相接，间隔约34mm。,35孵育过夜，划线交界处出现,箭头状溶血为阳性。,2. 非溶血链球菌鉴定,(1) optochin试验：含5optochin,纸片贴于涂布有待测菌的平板上,35孵育过夜，抑菌圈大于14mm,即为敏感。肺炎链球菌敏感。,(2) 胆汁溶菌试验：将O5ml的麦氏浓,度细菌悬液和等量的2去氧胆盐置,于试管内，35孵育2小时后, 菌液,变清为阳性。肺炎链球菌为阳性。,(3) 胆汁七叶苷试验：将待测菌落接种,于胆汁七叶苷斜面，35孵育48小,时，斜面黑色为阳性。牛链球菌试,验阳性。,3草绿色链球菌鉴定,链球菌群,VP,脲酶,精氨酸,七叶苷,甘露醇,山梨醇,温和,链球菌群,-,-,-,-,-,-,变异,链球菌群,+,-,-,+,+,+,唾液,链球菌群,+/-,+/-,-,+,-,-,米勒,链球菌群,+,-,+,+/-,+/-,-,(五) 抗链球菌溶血素O试验,常用于风湿热的辅助诊断，活,动性风湿热患者的抗体效价一般,超过400单位。,(六) 药物敏感性试验,A组为红霉素、青霉素、甲氨苄啶磺,胺甲嗯唑等；,B组为头孢吡肟、头孢噻肟、氧氟沙星、,培南类等；,C组为阿莫西林、头孢呋辛、氯霉素、,利福平等。青霉素是抗链球菌的首选药,物，此外头孢菌素、红霉素、万古霉素,也是治疗链球菌感染的药物。,有报道A群链球菌红霉素耐药株和,牛链球菌万古霉素耐药株，耐青霉,素的肺炎链球菌和草绿色链球菌。,若来源于血和脑脊液，对该菌株应,检测对头孢曲松、头孢噻肟和美洛培,南的MIC以判断敏感、中介或耐药。,(七) 检验结果分析与报告,-溶血性链球菌和肺炎链球菌,系毒力强的致病菌，均应及时报,告，及时使用抗生素以减少发生,并发症。,C、G群大菌落-溶血性链球菌是,咽喉炎病原体，而米勒链球菌群是正,常菌群，但在脓肿或伤口中分离的应,视为致病菌而非污染菌。,牛链球菌生物型1和心内膜炎及胃,肠道癌症有关。,第三节 肠球菌属,一、分 类,肠球菌属归类链球菌科，但种系,分类法证实粪肠球菌和屎肠球菌,不同于链球菌属的细菌，将其命,名为肠球菌属。有19种肠球菌，,分成5群，临床分离的肠球菌多属,于2群。,二、临床意义,肠球菌所致感染最多见于尿路感,染，多与尿路器械操作、留置导尿、,尿路结构异常有关，是重要的医院,感染病原菌。腹腔和盆腔创伤时也,常见肠球菌感染。近年来用抗生素,而出现的耐药性，使肠球菌感染率,不断上升。,肠球菌引起的菌血症常发生于有,严重基础疾患的老年人、长期住院,的免疫功能低下患者。偶尔可见呼,吸道或中枢神经系统的肠球菌感染，,在临床诊断前应认真评估分离菌的,临床意义。,三、微生物特性,革兰阳性球菌、卵圆形、链状排列。无芽,胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。,兼性厌氧菌，最适生长温度35；大多数,菌株在1045均能生长。在含6.5NaCl,肉汤中能生长，在40胆汁培养基中能分解,七叶苷，多数菌种具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，,能水解吡咯烷酮-萘基酰胺(PYR)，不含细,胞色素氧化酶和触酶。粪肠球菌培养于血培,养基中，可合成细胞色素或触酶。含D群链,球菌D抗原。G+Cmol为3745。,四、微生物检验,1. 常规采集血、尿、创伤标本和,其他拭子，标本于1小时内接,种完毕。,2. 直接涂片染色镜检可见成短链,排列, 卵圆形革兰阳性球菌。,3. 接种于含血平板，若含革兰阴性杆菌可,选用选择鉴别培养基，常用叠氮胆汁七,叶苷琼脂，可抑制革兰阴性菌生长，而,肠球菌分解七叶苷为黑色菌落； 35,37孵育24h后，形成灰白不透明、表面,光滑、直径0.51大小的圆形菌落，,血平板上为溶血或不溶血。,细菌鉴定方法,菌属,万古霉素,分解葡萄糖,PYR,胆汁七叶苷,NaCL,10,45,肠球菌属,敏感,-,+,+,+,+,+,乳球菌属,敏感,-,+,+,可变,+,可变,链球菌属,敏感,-,-,-,-,-,可变,明串珠,菌属,耐药,+,-,可变,可变,-,可变,(五) 药物敏感试验,A组为青霉素或氨苄青霉素， B组为万古霉素； C组为四环素类和红霉素、氯霉素、 利福平； U组为环丙沙星、诺氟沙星等。,肠球菌的耐药性对一般剂量或中,剂量氨基糖苷类耐药和对万古霉素,低度耐药。临床上联合使用青霉素,G、氨苄青霉素与氨基糖苷类抗生,素成为治疗肠球菌首选方法。,对重症感染患者分离的肠球菌应鉴定到,种，由于医院内感染肠球菌呈上升趋势，故,对肠球菌分型的流行病学调查显得越来越重,要，传统的分型可用生物分型、抗生素耐药,谱、噬菌体、细菌素等分型方法，但费时费,力，较为先进的分子生物学方法分型，尤其,是在耐药株暴发流行时，显示其重要价值。,(六) 检验结果分析与报告,第四节奈瑟菌属和布兰汉菌属,一、分 类,奈瑟菌科包括奈瑟菌属、卡他布,兰汉菌属、莫拉菌属、金氏菌属和不,动杆菌属。奈瑟菌属包括淋病奈瑟菌、,脑膜炎奈瑟菌及卡他布兰汉菌。,二、临床意义,1. 淋病奈瑟菌,淋病奈瑟菌是性病病原菌，临床,表现为：淋病；盆腔炎；口,咽部和肛门直肠病；淋菌性结膜,炎；播散性淋病。,淋病奈瑟菌致病物质包括菌毛、,外膜蛋白、IgA蛋白酶、脂多糖和,铁调节蛋白。,2. 脑膜炎奈瑟菌,脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎,病原体,通过呼吸道感染后多数为隐性,感染或表现为上呼吸道症状，少数可,发展为败血症，进而形成化脓性脑膜,炎。,卡他布兰汉菌是导致中耳炎，鼻窦,炎，慢性阻塞性肺炎的病原体。,三、微生物特性,为革兰阴性双肾样，坦面相邻的双球,菌, 直径约为0.61.5m，无动力无芽,胞, 某些菌种形成荚膜，孵育24h后在培,养基上发生自溶。需要丰富营养，对脂,肪酸敏感, 在培养基中需加入淀粉。,需氧生长，CO2和湿度刺激奈瑟菌,生长，最适生长温度为3537。,氧化酶阳性，触酶阳性，对糖分解能,力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶不,同，常作为鉴别依据。抵抗力弱，对,化学消毒剂敏感。+mol奈瑟菌,属为4654，布兰汉菌属为4048。,四、微生物检验,1. 采集脑脊液、血液、瘀点穿刺液等标,本后, 立即送检，或用血平板床边接种,后立即孵育。,2. 直接镜检 涂片固定革兰染色，显微镜,观察可见革兰阴性双球菌和胞内含球,菌的多形核白细胞，有助于男性淋病,早期诊断。女性宫颈拭子标本涂片可,见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌, 由,于女性阴道有正常菌群寄居，故必须,由培养结果得以证实方可报告。,脑脊液或皮肤瘀点渗出液涂片所见革阴,性双球菌和白细胞内的革兰阴性双球菌，,有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断。,3. 抗原检测和核酸检测 利用ELISA检测淋,病奈瑟菌抗原，该法在检测男性尿道分,泌物标本和涂片染色具有相同的敏感度,和特异度，但在宫颈和直肠拭子中，由,于奈瑟菌属存在共同抗原，其特异性较,革兰染色涂片镜检低。,4. 分离培养与鉴定。,奈瑟菌属鉴定,1. 推测性鉴定,G,-,双球菌和氧化酶试验阳性是两个推测,性鉴定指标。区分G,-,双球菌和G,-,球杆菌方,法是将待检菌接种于巧克力平板上, 贴10U,的青霉素纸片，35孵育1824小时，挑,取纸片边缘生长的菌落，涂片 染色观察，,若菌体延长成长索状则为G,-,球杆菌，而G,-,双球菌则仍保持双球菌形态，某些菌体出,现肿胀。,2. 确证性鉴定,利用生化反应，如脑膜炎奈瑟菌、,淋病奈瑟菌葡萄糖试验产酸，而卡,他布兰汉奈瑟菌为阴性；脑膜炎奈,瑟菌麦芽糖试验产酸，而淋病奈瑟,菌为阴性。,(五) 药物敏感性试验,药物敏感试验选择药物为青霉素、头,孢菌素、四环素、环丙沙星和壮观霉素。,治疗首选药物为青霉素。,近年来，由于淋病奈瑟菌耐药质粒转,移，由其介导的耐青霉素酶的淋病奈瑟,菌临床上多见，该菌表现对青霉素和四,环素耐药，对壮观霉素和三代头孢菌素、,喹诺酮类敏感，强调临床实验室的药敏,试验结果，以有助于合理用药。,对引起的下呼吸道感染卡他布兰,汉菌，既往对青霉素敏感，近年来,报告耐药菌株日渐增多，可用广谱,青霉素与青霉素酶抑制剂的合剂进,行治疗。,(六) 检验结果分析与报告,淋病的早期和正确诊断，具有医,学和社会的重要意义，诊断报告必,须慎重，对各种实验室诊断试验需,掌握其敏感性和特异性的程度，必,须综合分析各种试验的结果，最后,的确证还依赖于分离培养和鉴定。,脑膜炎奈瑟菌的快速诊断能为治,疗提供时机，故瘀点及脑脊液的染,色，涂片镜检是快速简便方法。,第七章 肠杆菌科,第一节 概述,肠杆菌科包括24个与医学有关的菌属,G+Cmol39-59。,1. 四类引起人类腹泻和肠道感染的细菌：埃,希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌,属。,2. 八种与医院感染有关的条件致病菌：枸橼,酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源,菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登,菌属和摩根菌属；,3. 其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对,人致病性较强。此外，许多细菌既,是正常菌群，也是条件致病菌。在,机体抵抗力下降，寄居部位的改变,或菌群失调时能引起机会感染。,二、临床意义,占临床分离菌总数的50和,-,总数的,80, 将近50的败血症70以上的泌尿,道感染和大量的肠道感染是由肠杆菌科,细菌引起的。,1. 人类肠道外感染 除志贺菌较少引起肠外,感染，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产,酸克雷伯菌、奇异变形杆菌、产气肠杆,菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷菌等均可引,起泌尿道、呼吸道、伤口和中枢神经系,统的感染;,且往往为医院感染。鼠疫耶尔森菌可,引起烈性传染病鼠疫。,2. 人类肠道感染,埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶,尔森菌属。主要引起各种急、慢性肠,道感染、食物中毒、旅行者腹泻及肠,热症等。,三、共同特性 (1),1. 形态结构,-,杆状或球杆状、无芽孢、多数有鞭,毛，能运动。致病性菌株有菌毛。,2. 抗原成分,抗原是细胞壁成分脂多糖。以核,心多糖为中心的三层结构，内侧是脂类,A, 为内毒素的毒性成分。外侧是由重复,的特异多糖，决定抗原的特异性。, H抗原是不耐热的蛋白质抗原，氨基酸,序列和空间构型决定H抗原的特异性。, 表面抗原是包绕在抗原外侧的多糖抗,原，由多糖结构决定抗原特异性。大肠,埃希菌称K抗原、伤寒沙门菌称Vi抗原,和志贺菌称B抗原等。,O抗原和H抗原是肠杆菌科血清学分,群和分型的依据。表面抗原存在时可阻,断。抗原与相应抗体之间的反应，加热,处理能消除表面抗原的阻断作用。,共同特性 (2),3. 变异性, S-R变异是初次分离的细菌，菌体,抗原上都有特异性多糖链，菌落为光滑,型。在人工培养基中反复传代时，细胞,壁上特异性多糖链消失而核心多糖仍保,留，菌落变为粗糙型。,H-O变异是有鞭毛的细菌, 失去鞭,毛，动力也随之消失，称H-O变异, 有,时见于新分离的菌株中。,4. 培养和生化特性,营养要求不高，在普通培养基上生长,良好；兼性厌氧，主要生化特性包括发,酵葡萄糖(产酸或产酸产气)，触酶阳性,氧化酶阴性，可将硝酸盐还原至亚硝酸,盐。,5. 抵抗力,抵抗力不强，加热6030min即被杀,死，不耐干燥，对一般化学消毒剂均敏,感。对低温有耐受力。能耐胆盐，能抵,抗染料的抑菌作用。,四、微生物检验,1. 标本采集, 肠外标本:采自不同的感染部位如血液,、体液、呼吸道、伤口、尿液及其他各,种标本。, 肠道标本:疾病早期留取新鲜粪便，挑,取粘液脓血部分进行培养。应在2h内进,行，以利志贺菌等检出。如不能及时培,养应冷藏待检。,2. 直接镜检 ,-,杆菌，形态及染色性无鉴别,意义。,3分离培养鉴定,(1) 肠外标本:采自无菌部位的标本用血,琼脂，血培养时可用肉汤增菌。其他,标本中含有杂菌，需用选择性培养基,以增加分离率，常用伊红美蓝(EMB),琼脂，因为EMB能促进肠杆菌科细,菌生长并抑制其他,-,菌。,(2) 肠道标本：常用的选择鉴别培,养基(如EMB)和针对沙门菌和志贺,菌的强选择鉴别培养基，(如SS琼脂),。如疑耶尔森菌感染可用耶尔森菌选,择琼脂(CIN)。,肠杆菌科细菌,鉴定,1) 常规生化鉴定:为实验室最常用的方,法。各菌属(种)主要生化特性有助,于鉴定细菌。,2) 鉴定试剂盒:选用标准化和商品化的,微生物鉴定试剂盒，特点是质量可,靠稳定鉴定能力强，并与编码技术,结合，可用仪器读取结果，实现自,动化，并提高了工作效率。,3) 血清学鉴定：用特异性抗血清进,行血清学分型鉴定后才能作出最,终报告。,4) 分子生物学鉴定：可鉴定至科、,属 、种、血清型和肠毒素基因,等。甚 至可区分致病菌株和非,致病菌株。,耐药性问题日趋严重。粘质沙雷菌对青霉,素G等抗生素天然耐药，而大多数是形成的,获得性耐药。有染色体或质粒介导的超广谱,-内酰胺酶或AmpC酶而产生的耐药性。已,出现了耐多种抗菌药物的多重耐药菌株，因,此必须根据抗菌药物敏感试验选用抗生素，,并作好耐药性监控工作。同时细菌的耐药谱,还可成为医院感染流行病学调查中的标志。,(五) 抗菌药物敏感试验,一、分 类,埃希菌属包括5个种：, 大肠埃希菌是肠道中G,-,杆菌的主要,成员， 常引起肠内外的感染，是腹,泻和泌尿道感染的主要病原菌。, 蟑螂埃希菌偶而检出并有潜在的致,病性。,第二节 埃希菌属, 弗格森埃希菌；, 赫尔曼埃希菌；, 伤口埃希菌。,最近还发现称为不脱胺凝聚埃,希菌 G+Cmol为 4852。,二、临床意义 ,1. 致病因素, 侵袭力,K抗原能抗吞噬，并有抵抗抗体和,补体的作用。菌毛能帮助细菌粘附于,粘膜表面称定殖因子，能使细菌定殖,产生毒素而引起相应的症状，直接侵,犯粘膜引起炎症。, 内毒素,具有发热、休克、DIC等病理作用。, 肠毒素,产生不耐热和耐热肠毒素两种肠,毒素：均可使肠道细胞中cAMP,的水平升高，引起肠液大量分泌,而导致腹泻。,二、临床意义 ,2. 所致疾病, 肠道外感染,是临床分离的G-杆菌中最常见的,菌种，可引起泌尿系等各种类型的感染。,引起泌尿系感染的菌株以血清型01、,2、6为多见，本菌还可引起菌血症、,胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等。 常,见于腹腔内脓肿、肠穿孔继发腹膜炎、,肠道手术后继发感染或大面积灼伤创面,感染。,有时与类杆菌、粪肠球菌混合感染。产,生的脓液粘稠，有粪臭味。该菌对一般,抗生素敏感，易产生超广谱-内酰胺酶，而导致对第三代头孢菌素耐药。, 肠道内感染,其中有些菌株能引起轻微腹泻至霍乱,样严重腹泻，并能引起致死性并发症如,溶血性尿毒综合征。,(1) 肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)：,引起儿童腹泻和旅行者腹泻，类似轻型,霍乱样腹泻。该菌产生耐热肠毒素(ST),和不耐热肠毒素(LT)。,(2) 肠致病性大肠埃希菌(EPEC)：,引起婴幼儿肠道感染, 血清型是055、,0111等, 是婴儿腹泻的重要病原菌。,(3) 肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC)：,类似于志贺菌，侵犯肠粘膜细胞，引起,菌痢样症状，出现脓血粘液便。,引起肠道感染的大肠埃希菌,(4) 肠出血型大肠埃希菌(EHEC)，多为食,源性感染，通过粪-口途径传播。致病,因子是菌毛和Vero毒素，血清型是0157,：H7，可引起出血性结肠炎，有2,7发展成溶血性尿毒综合征，出现溶,血性贫血，血小板减少性紫癜和急性肾,衰竭，死亡率为310。,(5) 肠凝聚型大肠埃希菌(EaggEC)：代表,一群不产生LT或ST，不能用O：H血清,分型，可粘附于Hep-2细胞的菌株。与,世界各地慢性腹泻有关。,三、微生物特性,1. 形态结构,G-直短杆状，,大小为1.01.5m，,多数有鞭毛能运动，,引起肠外感染的菌株有荚膜(微,荚膜)和周身菌毛。,2. 抗原成分, O抗原是多糖磷脂复合物(LPS)，耐,热加热100不能灭活，已有171种,是血清学分型的基础。, H抗原是不耐热的蛋白质，已知有56,种，均为单相菌株。, K抗原是多糖荚膜抗原，对热稳定，,能阻止O凝集。血清型别按O：K：H,的顺序以数字表示。,3. 培养特性,兼性厌氧，营养要求不高，在普通,琼脂上生长良好，形成圆形光滑、湿,润的菌落，在选择培养基上可发酵乳,糖形成有色菌落。IMViC 试验结果为,+-。,四、微生物检验 (1),肠道外感染标本,1. 标本采集,血液标本以无菌操作技术采集静脉血,5ml注入血液培养瓶。痰标本取清晨口,腔清洁后从深部咳出的痰液。脓、分泌,物等标本用无菌棉拭子直接采取。,2. 直接涂片染色检查,除血液标本外，脓、痰、分泌物等标本,均作涂片染色检查。尿液和各种体液离,心后取沉淀物作涂片, 可见G-短杆菌。,3. 分离培养鉴定,(1) 血液标本接种肉汤增菌培养，待生,长后移种血平板。体液标本取离心,沉淀物接种于血平板。尿液标本应,同时作菌落计数。脓、痰和分泌物,标本可直接接种于血平板。35孵,育1824h后观察菌落形态。,(2) 鉴别培养基上挑选有色菌落，用生,化反应、血清学试验鉴定到属和种。,典型的生化反应特征：,TSIA(双糖铁)产酸产酸产气，,CIT(枸橼酸盐)阴性,URE(脲酶)阴性,IND(吲哚)阳性,MOT(动力)+-,ORN(鸟氨酸)+-。,四、微生物检验(2),肠道内感染标本,引起腹泻的ETEC、EPEC 、EIEC和EHEC具有与肠道外感染的大肠埃希菌相似的生物学特性，但分别具有特殊的血清型、肠毒素或毒力因子。,检验程序同肠道外标本。采集腹泻,和食物中毒患者粪便和残留食物，肛拭标本，接种肠道选择鉴别培养基分离培养和鉴定 。,肠道感染大肠埃希菌鉴定,1) ETEC 生化反应、血清分型加肠毒素,测定：生化反应符合大肠埃希菌，但血,清型别与致病没有一定的联系。主要依,赖ST和LT肠毒素的检测。,2) EPEC 生化反应加血清分型：用多价抗,血清检测O抗原，进行特异性抗血清的,凝集试验，阳性的菌株测定凝集滴度以,排除交叉反应，同时做H抗原测定,(O：H分型)。,3)EIEC 生化反应、血清分型加肠毒素测定：用O：H血清分型，赖氨酸脱羧酶阴性，无动力，常见的血清型0152和0124，与志贺菌相似，主要的鉴别试验是醋酸钠、葡萄糖铵利用试验和粘质酸盐产酸试验，大肠埃希菌三者均阳性，而志贺菌三者均阴性。,4)EHEC 血清分型加生化反应：应常规作0157：H7的培养，必须经生化反应证实为大肠埃希菌。凡山梨醇阴性的大肠埃希菌0157：H7分离株无须再做毒素的检测，因为均产生Vero毒素。,5)EaggEC 用液体培养-凝集试验，检测细菌对细胞的粘附性或用DNA探针技术。,可致多种感染，轻者为自愈性胃,肠炎，重者可引起致死性伤寒。伤,寒和副伤寒A、B引起胃肠炎、菌血,症和肠热症；猪霍乱沙门菌引起胃,肠炎和败血症，儿童多见。,第三节 沙门菌,一、分 类,沙门菌属是肠杆菌科中最复杂的菌,属。根据O抗原分群，再根据H抗原,分血清型，将沙门菌属分为6个亚属,(亚属 1-6，其中亚属3再分为3a和3b,见表7。8)，绝大多数(99)沙门菌,的临床分离株是亚群1中的菌种。本,属细菌DNA G+C含量为50-53。,二、临床意义,(一) 致病因素,1. 侵袭力,有Vi抗原的具有侵袭力，穿过小肠,上皮被吞噬后，由于Vi抗原的保护, 反,而在细胞内繁殖，并随吞噬细胞至机体,其他部位，故称细胞内寄生菌。,2. 内毒素,有较强的内毒素，可引起发热，白,细胞改变，中毒性休克，并能激活,补体，导致一系列病理生理变化。,3. 肠毒素,某些沙门菌(如鼠伤寒沙门菌)能产,生类似大肠埃希菌的肠毒素。,(二)所致疾病,1. 胃肠炎,最常见，引起腹泻，伴有低热，恶心,和呕吐。,2. 菌血症或败血症,以猪霍乱沙门菌感染为多，表现为高热,寒战。常伴有胆囊炎、骨髓炎。血培养,阳性而便培养阴性。,3. 肠热症,由伤寒沙门菌引起。血培养或肥达反应,阳性。经口感染，穿过小肠上皮到达淋,巴结，进入血流，第一次菌血症。出现,发热等症状。,随血流播散至肝、脾等器官中继续繁,殖，再次进入血流扩散，第二次菌血症，,出现持续高热、肝脾肿大、皮疹和全身中,毒症状。细菌随胆汁进入肠腔，经粪便排,出。,潜伏期720天，典型病程3-4周，发病,2周后机体出现免疫反应，使疾病好转，,但同时也引起迟发性变态反应，导致肠壁,淋巴结坏死溃疡，可造成肠穿孔而危及生,命。,4. 携带者,约3患者成为携带者，粪便持续排菌达,1年以上。,三、微生物特性,1. 形态染色,G-杆菌细长，1.03.0m, 有鞭毛， 无芽胞,和荚膜。,2. 抗原结构有3种:, O抗原为多糖类脂蛋白质复合物，能耐,受100 2.5 h。共有58种，是分群的依据, 凡,含共同抗原的血清型归为一个群，沙门菌含,一种或数种O抗原,每群以O加上数字及括号,大写英文字母顺序编排，如02群(A)，Z以后,直接加数字表示，如051群。刺激机体产生,IgM抗体, 与相应抗血清反应呈颗粒状凝集。, H抗原,为蛋白质抗原，加热被破坏。有两个,相,第一相称特异相，用a、b、c表示,是定型的依据。刺激机体产生的IgG,抗体,与相应的抗血清呈絮状反应。, 表面抗原,为Vi抗原有保护作用。可阻止O抗原,与相应抗体发生凝集，故在沙门菌血,清学鉴定时应加以注意。,三、微生物特性 ,3. 培养特性,兼性厌氧，生长温度3537，最适,生长pH为6.87.8;营养要求不高，在肠道,选择性培养基上因不发酵乳糖形成透明菌,落，在SS琼脂上形成黑色的菌落。,4. 抵抗力,不强，加热601h或6520min，在水,中能活23周，粪便中呵存活12个月,5. 变异性,有S-R变异、H-O变异和位相变异等具,有双相H抗原菌变成单相菌 。,四、微生物检验,1. 采集标本,伤寒沙门菌发病第l周取血。第2、3,周取粪便、尿液做培养的分离率高。,2. 直接镜检,革兰阴性杆菌。直接用胶乳凝集试验,检测病人标本或增菌培养物沙门菌抗,原，可快速诊断。,3. 分离培养与鉴定,常用肠道鉴别培养基或选择培养,基。在菌最较少时，血液和骨髓液,分离培养用增菌肉汤。35-37孵,育，选择透明的可疑菌落做鉴定。,沙门菌的鉴定,1. 用生化试验将可疑菌落鉴定到属和种, 基本,生化反应特征： TSIA(双糖铁) 产碱产酸,或产碱产酸产气，H2S阳性、CIT(枸橼酸,盐) 阳或阴性、URE (脲酶)阴性、IND(吲哚),阴性、MOT(动力)阳性、VP阴性、ORN(鸟,氨酸)阳性。凡临床分离菌乳糖、吲哚阳性，,或脲酶阳性者，均不考虑为沙门菌。,2. 血清学分型：,用抗血清对所分离菌种的O抗原、Vi,抗原、第一、二相H抗原进行凝集试,验。先用多价O抗血清(A-F)进行分群,，95以上都属A-F群，对早期诊断,有重要意义。再分别用单价因子血清,定群，用H因子血清检查H抗原。,综合O、H及Vi因子血清的检查结,果进行判断。,(五) 抗体检测(肥达反应),用已知伤寒、副伤寒沙门菌的O、H,抗原，检测受检血清中有无相应的抗体,的半定量试管内凝集试验，称为肥达反,应。能辅助诊断伤寒，甲、乙、丙型副,伤寒沙门菌引起的肠热症。,1. 方法,将受检血清用生理盐水作倍比稀,释，分别加入等量伤寒沙门菌O、H,抗原及副伤寒沙门菌甲、乙、丙的,H抗原，进行试管内凝集试验，凡,血清最高稀释度出现明显凝集者为,凝集效价。,2. 结果解释,(1) 正常值：各地区有所不同，O 80,H1：160，A、B，Cl：80；,或第二份血清效价增高4倍以上具有,诊断意义。,(2) O抗原的抗体为IgM，出现较早，H,抗体为IgG，出现较迟。O高H不高,可能为疾病早期；周后复查如升高,为肠热症。H高O不高，可能以往,患过伤寒或接受过预防接种，为回忆,反应。,、分 类,将志贺菌属分为4个血清群(种)：A群为,痢疾志贺菌；B群为福氏志贺菌；C群为鲍,特志贺菌；D群为宋内志贺菌。,最近将生化性状相近的A、B，C群归为,一群，统称志贺菌A、B、C血清群；而将,生化特征与之相异，鸟氨酸脱羧酶和-半,乳糖苷酶均阳性的宋内志贺菌单列出来。,DNA G+Cmol为4953。,第四节 志贺菌属,二、临床意义,(一)致病因素,1. 侵袭力,因菌毛的作用，细菌粘附在肠粘膜表面;,2. 内毒素,造成粘膜细胞死亡发炎，并形成毛细血,管血栓，导致坏死脱落和溃疡，临床出现,脓血便；并引起全身中毒症状，导致发热,、意识障碍，甚至中毒性休克；,3. 外毒素,A群志贺菌和型产生志贺毒素，有,细胞毒、肠毒素和神经毒等生物学活性。,(二) 所致疾病,有以下3种临床类型：,1急性细菌性痢疾,表现为腹痛发热，有里急后重现象,便中含有粘液和血。很少进血流，中毒,性菌痢见于小儿，常无消化道症状而表,现为全身中毒症状，往往造成死亡。,2. 慢性细菌性痢疾,菌痢治疗不彻底，造成反复发作,迁延不愈，超过2个月视为慢性菌,痢；,3. 携带者,有恢复期带菌、慢性带菌和健康,带菌等3种，是主要的传染源。,三、微生物特性,1. G-杆菌，菌体短小，无芽胞荚膜和鞭,毛，有菌毛,2. 抗原成分,有群和型特异性两种O抗原，是分类依,据根据生化反应和O抗原的不同，分为 A 、B、C、D 4个血清群和40余个血清型。,O抗原耐热，加热100、60min不被破坏。K抗原能阻断O凝集。,3. 变异性,有S-R变异、耐药性变异。多重耐药性,问题己成为严重的医学问题。,4. 培养特性,。营养要求不高，能在普通培养基上生,长。在鉴别培养基上形成无色半透明的,菌落。,5. 抵抗力,比其他肠道细菌抵抗力低，在1石炭酸,中15-30min和加热6010min即被杀死,四、微生物检验,1. 标本采集,在治疗前采集粘液脓血便作床边,接种，不能及时接种可置甘油保存,液送检;,2. 直接镜检,G-杆菌。胶乳凝集试验和免疫荧,光技术检测抗原。,3. 核酸检测,志贺菌携带一个非结合型大质粒, 能,编码与侵袭性相关的外膜蛋白, 是产,生痢疾综合征的重要致病因子, 从中,物, 可用于检测志贺菌序列。,4. 分离培养,用鉴别培养基和选择培养基,取可疑,菌落鉴定。,志贺菌鉴定（1）,鉴定到属和种 基本生化反应特征: TSIA(双糖铁)产碱产酸、不产气, CIT(枸橼酸盐)阴性, URE(脲酶)阴性, MOT(动力) 阴性, YP阴性。,志贺菌鉴定（2）,2. 血清学鉴定,先用志贺菌属4种多价 (A群1，2型、B群,16型、C群l6型及D群)作玻片凝集试,验，凝集者再进一步作定型。,A群：即痢疾志贺菌，为一群甘露醇阴性,的菌株，共有10个血清型(1)0)，其O抗,原从1 X共10种均为独立的血清理，,群：即福氏志贺菌，有6个血清型,和X、Y 2个变型。6型菌株缺少共同,的群抗原，故多价血清中应包含6型因,子血清，否则将会造成漏检。,C群：即鲍特志贺菌。本菌共有15个,血清群，,D群：即宋内志贺菌：仅有个血清,型，但有光滑型(S)和粗糙型(R)两种茵,落; R型菌 不被S型血清所凝集；因此诊,断血清应含有S及R两种因子血清,包括3种人类致病菌：鼠疫耶尔森,菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶,尔森菌。还可从临床标本中分离到弗,氏、中间、克氏、舆氏、伯氏、莫氏,、罗氏和鲁氏等8种耶尔森菌。,第五节 耶尔森菌属,一、鼠疫耶尔森菌,(一) 临床意义,是烈性自然疫源性传染病鼠疫的,病原菌。,1致病因素,有内毒素和鼠毒素两种毒素。鼠,毒素与毒力有关，作用于心血管系,统，引起不可逆性休克与死亡，该,毒素存在于细胞内，菌细胞裂解或,白溶后释放。,2临床类型,1) 腺鼠疫：局部淋巴结(多为腹股沟淋,巴结)的肿胀、坏死和脓肿；,2) 败血型鼠疫：由细菌侵入血流大量,繁殖所致。可在2-3天内死亡；,3) 肺鼠疫：由腺鼠疫、败血型鼠疫继,发而成，可通过呼吸道在人与人之,间直接传播，引起原发性肺鼠疫，,死亡率极高。,(二) 微生物特性,1. G-杆状，0.51.0m，两极浓染，,有荚膜，无芽胞和鞭毛。,2. 抗原构造构造复杂，重要的有(1)F1,抗原:是封套抗原。特异性高，抗原,性强，产生的抗体有良好的保护作,用; (2)VW抗原：是菌体的表面,抗原，与本菌的毒力和侵袭力有关。,(3)T抗原：为为鼠毒素,有良好的抗,原性和免疫原性，可脱毒成类毒素,制成抗毒素。,3. 兼性厌氧，生长温度为2730，最,适pH为6.97.2, 血琼脂培养48h后形成,粗糙菌落，肉汤培养48h后形成菌膜，稍,加摇动后的菌膜钟乳石状下垂；本菌动,力为阴性；IMViC试验反应模式为+,、苯丙氨酸脱氨酶、脲酶、硫化氢,均为阴性；不液化明胶，当穿刺培养时,菌沿穿刺线纵树状发育；分解葡萄糖产,酸不产气，对多数糖不分解：,(三) 微生物检验,鼠疫耶尔森菌传染性极强，故应严格遵守操,作规程，一旦疑为本菌，应立即向省市疾病控,制中心等部门报告，并将菌种送检验中心或专,业实验室作进一步的鉴定。鼠疫的确诊主要依,赖病原学诊断，须经全面生化反应、噬菌体裂,解试验和动物实验才得以作出最终鉴定。诊断,确立后除对患者进行隔离治疗外，对疫区及有,关人员须采取有效的预防隔离措施，防止疫情,扩散。,二、小肠结肠炎耶尔森菌,天然寄居在多种动物体内，如猪、鼠,、家畜和兔等。通过污染食物(牛奶、猪,肉等)和水，经粪口途径或因接触染疫,动物而感染。本菌具有侵袭性及肠毒素,为人兽共患病原菌,通过污染食物和水源,经消化道传播，或因接触带菌动物而感,染。临床表现以小肠、结肠炎为多见,还,可引起结节性红斑、反应性关节炎等自,身免疫性疾病。,(一) 微生物特性,1G-球杆菌，偶有两极浓染，无芽胞荚,膜，35无动力，2225有动力。,2根据O抗原可分为血清型，我国主要,为O9、O8、O5、O3等几种血清型与,致病性有关。3培养特性 兼性厌氧,耐低温，在440均能生长，最适,温度为2028。在普通琼脂上生,长良好。不发酵乳糖，能分解葡萄糖和,蔗糖产酸不产气，硫化氢阴性，脲酶阳,性，VP试验22-25阳性，35-37,阴性，鸟氨酸脱羧酶阳性。,(三) 微生物检验与鉴定,1. 采集粪便、食物，也取血液，尿液,等标本。,2. 直接涂片镜检 G-球杆菌。,3. 冷增菌 粪便标本可用7ml M15,Ph7.4 PBS 4增菌2-3周。,4. 耶尔森菌专用选择培养基(CIN)的,分离, 培养48h后, 菌落为粉红色。,生化反应特征：TSIA(三糖铁)产酸,产酸，不产气，H2S阴性， CIT(枸橼酸,盐)阴性，URE(脲酶)阳性，PHE(苯丙氨,酸)阴性，OXI(氧化酶)阴性，IND(吲哚),阴性阳性，ORN(乌氨酸)阳性MOT(动,力)，V-P，-半乳糖苷酶)等结果与培养,温度有关(22-25阳性，35阴性)。,5. 血清定型。,四、假结核耶尔森菌,鼠和鸟类是天然宿主，人类感染少,见。多数病例为肠道感染，有时可引,起肠系膜淋巴结炎，症状类似阑尾炎。,标本接种选择鉴别培养基, 孵育24h,后为无色(乳糖阴性)的小菌落;,生化反应特征：TSIA(三糖铁)产碱,产酸、不产气，H2S阴性，CIT(枸,橼酸盐)阴性，URE(脲酶)阳性，PHE,(苯丙氨酸)阴性，OXI(氧化阴性，V-P,阴性，IND(吲哚)阴性，MOT(动力),22-25阳性；35阴性；可与鼠疫,耶尔森菌区别。,五、其他耶尔森菌,弗氏、中间、克氏、奥氏、伯氏,、莫氏、罗氏和鲁氏耶尔森菌亦可,从肠道内外标本分离到，生化性状,相似，均能在4以及在CIN上生长,在冷冻食品中增殖，具有潜在的致,病性。,、分 类,包括4个种：弗劳地拘橼酸杆菌,异型拘橼酸杆菌, 无丙二酸盐枸橼酸,杆菌和无丙二酸盐拘橼酸杆菌生物,群1群。,第六节 枸橼酸杆菌属,二、临床意义,为条件致病菌，与腹泻和肠道外感,染有关。,1. 异型枸橼酸杆菌引起新生儿脑炎、,败血症；,2. 弗劳地枸橼酸杆菌引起胃肠道感,染，也可致菌血症及许多感染；,3. 无丙二酸盐拘橼酸杆菌很少在肠,道外部位分离到；有时与G-无芽,胞厌氧菌(产黑色素类杆菌等)合,并感染。,三、微生物特性,1. 为G-杆菌，有动力(周身鞭毛)、无,芽孢、无荚膜。,2. 兼性厌氧，营养要求不高，能在普,通琼脂上生长。在血平板形成边缘,整齐，直径2-4mm的不溶血菌落。,在肠道选择培养基上为乳糖发酵的,菌落。,3. 弗劳地枸橼酸杆菌可产生硫化氢，,生化特性和抗原结构与沙门菌属,相似，应注意鉴别。,四、微生物检验,1. 直接镜检 G-杆菌 ；,2. 分离培养与鉴定 取可疑菌落乳糖,发酵菌株产生绿色金属光泽； SS上,菌落中央黑色，周围透明；,3. 将可疑菌落用生化、血清学试验进,步鉴定到属和种。,符合肠杆菌科和拘橼酸杆菌属的基本,特性。,五、枸橼酸杆菌属鉴定,1. 属的鉴别 生化反应与沙门,菌属(亚属1和3)及爱德华菌,属相似, 主要鉴别点是赖氨,酸脱羧酶阴性。,2.种间鉴别：弗劳地枸橼酸杆菌大部分菌株吲哚阴性，硫化氢多数阳性(80)而其他几个菌种相反，异型拘橼酸杆菌的生化特征为丙二酸盐和侧金盏花醇阳性，无丙二酸盐枸椽酸杆菌及生物l群之间的区别是后者棉子糖和蜜二糖阳性。,六、基本生化反应特征,TSI(三糖铁)产酸产酸产气或产碱,产酸产气，产生硫化氢，CIT(枸橼,酸盐)阳性，URE (脲酶)阴性阳性，,IND(吲哚)阳性阴性，MOT(动力)阳,性，V-P阴性，ORN(乌氨酸)阳性阴,性，ARG(精氨酸)阳性，LYS(赖氨酸),阴性。,一、分 类,克雷伯菌属共有7个种：肺炎克雷,伯菌、产酸(催娩)克雷伯菌、解鸟氨,酸克雷伯菌、植生克雷伯菌、臭鼻克,雷伯菌、鼻硬结克雷伯菌和土生克雷,伯菌。,第七节 克雷伯菌属,二、临床意义（1）,肺炎克雷伯菌,可引起典型的原发性肺炎；该菌在,口咽带菌率为16，住院病人中,高达20，是酒精中毒者，糖尿病人,和慢性阻塞性肺部疾病患者并发肺部,感染的潜在危险因素。,也能引起肺外感染，包括肠炎和脑,膜炎(婴儿)，泌尿道感染(儿童和成人),及菌血症：由该菌引起的免疫低下患,者感染或医院感染不断增多，本菌对,氨苄西林天然耐药，对头孢菌素、妥,布霉素、阿米卡早和多粘菌素B等敏,感