抗核抗体检测及临床意义张瑾

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,抗核抗体检测及其临床意义,宁波市李惠利医院,张瑾,风湿免疫性疾病诊断方法,症状、体征,自身抗体,影像学检查,病理,风湿免疫性疾病相关自身抗体,抗核抗体谱（ANAs）,类风湿关节炎相关抗体(RF, 抗CCP等),抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）,抗自身免疫性肌炎谱,自身免疫性肝病相关抗体谱,抗磷脂抗体谱,抗核抗体谱检测的意义,有助于,弥漫性结缔组织病,的分类和诊断,抗Sm抗体,是SLE的标记抗体；,抗Scl-70抗体是SSc的标记抗体；,抗Jo-1抗体是PM/DM的标记抗体；,观察疾病活动度和治疗反应,抗dsDNA抗体,研究发病机理,抗核小体抗体、抗dsDNA抗体,基本概念,ANA荧光核型,ANAs中的常见抗体,抗核抗体,自身抗体,：指抗自身组织、器官、细胞及其成分的抗体,ANA,：指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。ANA存在一个谱。,ANA新概念,：抗核酸(Nucleic acid)和核蛋白(Nucleoprotein)抗体总称,某些核抗原成分在核仁和,胞浆内比核质内更丰富,(如SSA/RO,Jo-1,rRNP等),ANA检测方法-IIF,法,ANA滴度,ANA核型,ANA滴度的意义,结缔组织病的粗筛,（1:160）,阳性标本还需进一步识别,感染、肿瘤及5%正常人可出现低滴度阳性,ANA阴性基本可以除外SLE,ANA滴度与疾病活动性无明确相关性,荧光显微镜下ANA的染色型别,均质型（H）,核膜型（M),斑点型（S）,核仁型（N）,着丝点型（ACA）,胞浆型（C）,混合型,均 质 型,(H),抗,组蛋白,抗,ds/ssDNA,抗,核小体,主要出现在,SLE,中,均 质 型,(H),核膜 型,(M),主要与抗,dsDNA,有关,与,抗原底物片固定方法和备制过程,有关,出现在,SLE,中,部分与抗核包膜蛋白有关,抗板层素,抗gp210,出现在PBC中,核膜 型,(M),与抗,ENA,成分有关,抗,Sm,抗,RNP,抗,SS-A,抗,SS-B,出现在,SLE、MCTD、pSS、SSc、PM/DM,等,斑 点 型,(S),斑 点 型,(S),与抗,核仁蛋白,有关,抗,Scl-70,抗,RNA多聚酶I,抗,PM-Scl,出现在,SSc,中,核 仁,型,(N),核 仁,型,(N),与抗,着丝点,染色质有关,存在于有丝分裂期,出现在,SSc,、,CREST综合征等,中,着 丝 点,型,(ACA),着 丝 点,型,(ACA),与抗,胞浆成分,有关,抗,核糖体P蛋白（rRNP）,：出现在,SLE,中,抗,合成酶,：,Jo-1、PL-12、PL-7、OJ、EJ,抗,信号识别颗粒（SRP),抗,线粒体,：出现在,PBC,中,抗高尔基体,抗溶酶体,等等,胞 浆 型,(C),见于,PM/DM,胞 浆 型,(C),ANA荧光核型小结,均质型（H）：,像大饼，SLE相关,核膜型（M)：,像圈圈，SLE相关,斑点型（S）：,像藕片，抗ENA,核仁型（N）：,像纽扣，SD相关,着丝点型（ACA）：,像满天星，抗ACA,胞浆型（C）：,像空心大饼,SLE PM/DM PBC相关,混合型：,稀释后检测有助于区分,抗核抗体谱,（ANAs）,ANAs,抗核不溶成分,抗核可溶成分,（抗ENA）,抗染色体DNA,蛋白,抗核仁抗体,抗DNA,抗体,抗核小体抗体,抗组蛋白,H,1,H,2,A, H,2,B, H3,H4,抗Sm,U,1,RNP,SSA,SSB,抗Scl-70,Jo-1,PM-1,抗rRNP,PCNA.,dsDNA,ssDNA,抗着丝点抗体,（ACA),抗5sRNA,抗dsDNA检测方法,以,短膜虫,或,马疫锥虫,为底物的间接免疫荧光法(IIF) ：,1:5,短膜虫或马疫锥虫的动基体,内含有,天然纯dsDNA,，未经,人工处理，不含,组蛋白与,ssDNA，,抗原性纯一特异。,优点：,特异性好,抗dsDNA检测方法,酶联免疫吸附法（ELISA）:,100IU/ml,优点,：,敏感性最高,缺点：,过于敏感，同时可能检测到,ssDNA抗体,和,低亲和力dsDNA抗体,而,这两种致病力均不强,放射免疫法(Farr):,20%,优点：,对,高亲和度DNA抗体,的检测优于CL-IIF,缺点：,具有放射性，对技术人员身体造成一定影响,蛋白印迹法（WB）,缺点：,dsDNA抗原在纯化包备过程中可变性解链，变成ssDNA,导致假阳性结果,不同方法检测SLE患者抗dsDNA抗体的结果：everything is possible,至少用两种方法做（报告结果时注明方法学）,互为补充。如：IIF法+ ELISA法,抗dsDNA抗体临床意义,SLE 的血清特异性抗体,多有致病性（IgG型），与亲和力（高）有关,与LN与SLE疾病活动性相关，活动期达90,可用于SLE 疾病活动期判断药物疗效观察,与SLE,急性皮疹,、血管炎、浆膜腔炎、白细胞减少等有关,抗组蛋白抗体（AHA）（酶联免疫吸附法,X2SD,),可出现于多种结缔组织病，,不具有诊断特异性,SLE ：50%,活动期SLE 可达90.2%,与,LN相关,，,与SLE疾病活动性,存在一定意义的,相关,性,药物性狼疮（DIL）：90%,如：异烟肼、苯妥因钠、青霉胺、雌激素等,仅有AHA而无其他ANA，强烈支持DIL,其他结缔组织病：23-30%,如：RA、PBC、SSc等,核小体是真核细胞染色质的基本复制单位，由组蛋白与DNA组成。,参与SLE发病机制：,多克隆B细胞活化剂,产生ANuA，先于其他ANA,促进抗dsDNA与AHA形成,参与LN的发生,抗核小体抗体（ANuA）,抗核小体抗体临床意义,SLE标记性/高特异性自身抗体,敏感性：58%-66%,（优于抗dsDNA及抗Sm）,特异性：98%-100%,（与抗dsDNA相当）,用于SLE的早期诊断,ANuA 的产生早于抗dsDNA、AHA,抗dsDNA阴性者有1/41/2 ANuA阳性,与LN相关，用于SLE疾病活动性监测,ANuA、抗dsDNA、AHA联合检测意义,抗ENA抗体,e,xtractable,n,uclear,a,ntigen,可提取性核抗原,成分：,核酸与核蛋白，不含染色质成分,功能：参与细胞内DNA复制、RNA转录、蛋白翻译,合成,来源：无种属差异，有组织不均一性,理化特性：对,温度,和,RNA酶,敏感,（U1RNP、SS-A）,意义：抗ENA抗体是ANAs中,范围最广,、,最为重要,的,一簇抗体，与,疾病活动性大多无相关,抗ENA抗体检测方法,免疫双扩散法(ID),对流免疫电泳法( CIE),免疫印迹法(IBT),酶联免疫吸附法(ELISA),蛋白芯片（Protein chip）,抗Sm抗体与抗U1RNP抗体,靶抗原,：,位于,细胞核内,的一组含尿嘧啶丰富的核糖核蛋白，,Sm和U1RNP是同一分子复合物中的不同位点,抗Sm抗体与抗U1RNP抗体,抗Sm：SLE的,标记性抗体,，是前瞻性及回顾性诊断的指标。,阳性率低： SLE （30%）,抗U1RNP：多种CTD均可出现，与手指肿胀、雷诺现象、肌炎、指端硬化等相关，但肾炎发生率低。,阳性率：40 - 60%，其中SLE(30-40%) , SSc(14%) , pSS (12%) , PM/DM (15%),高滴度抗U1RNP+抗Sm-,MCTD,抗U1RNP+,抗Sm,+,SLE,抗U1RNP-,抗Sm,+,实验室误差? U1RNP丢失 ?,抗rRNP抗体,靶抗原：,胞浆,中60S核糖体大亚基上的磷酸化蛋白,抗rRNP抗体,SLE的,高度特异性抗体,，与,SLE脑病,相关,常在SLE,活动期,存在,但不会随病情的缓解立即消失,可持续1-2年后才转阴。,阳性率：24%,可出现在SLE,早期,（ANA及抗dsDNA阴性）,抗SSA与抗SSB抗体,靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相邻结构,在不同的细胞周期，在细胞内的定位不同,（,细胞核内和胞浆中,均可存在）,pSS的SS-A存在于,细胞核,内,SLE的SS-A存在于,胞浆,中,SS-B主要位于,细胞核,内,45KD,47KD,48KD,抗SSA与抗SSB抗体,抗SS-A ：,结缔组织病中出现,频率最高,的抗体（ 60,-75%），见于,pSS（,75%）,SLE（,25%）,RA,（,10%）,SSc,（,24%）,PBC（20%）等,抗SSB：常与抗SSA相伴出现，诊断,pSS更特异,，见于,pSS（40%）、SLE （10%）,临床意义：与新生儿狼疮和先天性心脏传导阻滞、,平,滑肌受累,、光过敏、血管炎、,皮损,、紫癜、,淋巴结肿大、WBC减少有关,ANA阴性的SCLE：常为抗SSA 抗体阳性。,抗Jo-1抗体(抗,PL-1,抗体),靶抗原：组氨酸tRNA合成酶,胞浆,中的磷酸蛋白,抗Jo-1抗体(抗,PL-1,抗体),PM,/DM的,标记抗体,，阳性率20-30%,抗体效价与,疾病活动性,相关,抗Jo-1抗体综合征,：急性发热,对称性关节炎,技工手,雷诺现象,肌炎（相对轻） ,肺间质病变,其他抗合成酶抗体：抗,PL-7、,抗,PL-12、,抗,OJ、,抗,EJ,抗ScL-70抗体,靶抗原：DNA拓朴异构酶I的降解产物,主要存在,核仁,中,SSc的,标记抗体，,阳性率20-30%,多见于,dSSc,，病情进展快，提示,预后不良,与,ILD,、,弥漫性皮肤硬化,有关，而,PAH,少见,主要靶抗原：着丝点蛋白-B,多见于,ISSc,，病程缓慢，提示,预后较好,CREST综合征,：软组织钙化（C）,雷诺现象（R）,食道功能障碍（E）,指端硬化（S）,毛细血管扩张（T），但,并非标记抗体,，也见于孤立性雷诺现象,、SS、PBC、AIH等,国外文献：与PAH相关，而ILD少见,中国人群：,未发现与PAH相关,，,但ILD少见,白伊娜，王迁等.中国系统性硬化症患者硬皮病相关自身抗体的检测及其临床意义. 中华微生物学和免疫学杂志.2011（5）:452-455.,抗着丝点抗体,(ACA),Take Home Massage,ANA荧光核型对抗体性质范围有一定提示作用，,尤其,在靶抗原阴性时。,ANA阴性而靶抗原阳性主要见于抗,胞浆成分,抗体，如：SS-A、Jo-1、rRNP、线粒体等。,抗,核仁,型抗体常与,SSc,有关。,抗,均质,型或,核膜,型抗体常与,SLE,有关。,Take Home Massage,抗dsDNA：SLE,特异性抗体,，与LN及疾病活动度,有关，至少,两种方法,联合检测（如：,IIF法+ ELISA法）。,抗核小体,、,抗组蛋白,、,抗dsDNA,三抗体阳性者强烈,提示增殖性LN。,与疾病活动性相关的抗体：,抗dsDNA、抗核小体、,抗组蛋白、抗Jo-1、抗rRNP,与预后相关的抗体：,抗Scl-70（差）、ACA（好）,案例1,女性，34岁,游走性多关节痛，雷诺现象半年,RF 56U/L；抗CCP抗体阴性；,ANA 1：320,胸部CT：轻度肺间质病变,诊断？治疗？,（核仁型）,UCTD ILD, 发展为,SSc可能性大,Pred+CTX,案例2,男性，50岁,双腕关节炎、雷诺现象半年,ANA全套：阴性；抗CCP、RF：阴性,胸部CT：轻度肺间质病变,右腕关节MRI：骨髓水肿和滑膜炎,诊断？,复查：ANA阴性，抗Jo-1弱阳性,诊断：抗Jo-1抗体综合征,Pred+T,案例3,女性 32岁 手指关节痛2月,ANA（+）S1:80,抗SSA（+）135 抗Ro52（+）110,三大常规正常； ESR CRP 正常；补体正常；RF 87IU/ml；,诊断？ 治疗？,CTD, SLE待随诊，重用HCQ,案例4,女性，40岁,4年前多浆膜腔积液、低补体血症、ANA 1：320、抗SS-A+、抗SS-B+，诊断为“系统性红斑狼疮可能性大”，予“pred+CTX”治疗好转后“pred 10mg qod +HCQ”维持。,15天前新发面部皮疹（丘疹鳞屑型）、脱发；,尿常规：PRO 阴性；尿四蛋白：轻度增高；,补体下降（C3 50mg/dl C4 7.4mg/dl）；,抗dsDNA（IF） 1：320 抗核小体 + 抗组蛋白+；,诊断？治疗？,SLE，SLEDAI 8分， pred1mg/kg/day+CTX,案例5,女，28岁，面部红斑，尿蛋白（+） ；,ANA 1:1280H；抗dsDNA（IF/ELISA）： 1:40/800 ； C3 40mg/dl C4 6mg/dl ；,诊断？治疗？,治疗半年后蛋白尿（+）；,ANA1:320H；抗dsDNA （IF/ELISA）：1:20/400 ；C3 66mg/dl C4 8mg/dl；,治疗？,治疗1年后蛋白尿（-）；,ANA1:160H；抗dsDNA （IF/ELISA）：阴性/,250,；C3 86mg/dl C4 12mg/dl；,治疗？,Thanks,