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单击以编辑母版标题样式,单击以编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,二、抗生素药物的质量分析,显色反应,光谱法,色谱法,生物学法,检查灭活前后的抑菌能力,（一）鉴别,（,二,）,检查：,异常毒性检查,组分分析,细菌内毒素检查,杂质吸收度,热原检查,聚合物,降压物质检查,悬浮时间与抽针试验,无菌检查,发酵液中含有：,无机盐、脂肪、各种蛋白质、色素、热原、毒性物质、微生物、各种降解产物等杂质,注射用普鲁卡因青霉素,悬浮时间与抽针试验：,取本品1 瓶，按每40万单位加水1ml 使成混悬液，摇匀，静置2 分钟，不得有颗粒下沉或明显的分层。用装有4号针头的注射器抽取，应能顺利通过，不得阻塞。,1.,抗生素活性表示方法,效价单位,：每毫升或每毫克中含有某种抗生素的有效成分的多少。,表示方法,：单位u 或 g,(三) 含量测定或效价测定,例：1 mg青霉素钠1670单位,1 mg庆大霉素=590单位,标示量表示方法：,例：青霉素V钾片每片含量250 mg(400000单位),2. 微生物检定法,测定抗生素抑菌或杀菌的能力。,方法：,管碟法,和浊度法,缺点,1、操作繁琐,2、培养时间长,3、测定误差大,优点,1、与临床效果一致,2、灵敏度高,3、干扰物质少,优点：1. 准确度高,2. 简单、快速,缺点 1.易受杂质干扰,只有当用物理化学法测定的结果与用,生物学法测定的效价相一致时，才能,用物理化学法测定,分类,（按结构与性质）：,内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、多烯大环类、多肽类、苯烃胺类、蒽环类、其他抗生素类,三、抗生素的分类,分类,青霉素族,头孢菌素族,第二节 ,内酰胺类抗生素,青霉素类,母核：6-氨基青霉烷酸 6-APA,一、结构与性质,1,2,5,4,3,6,7,青霉素,（青霉素G、苄青霉素,）,氨苄西林（氨苄青霉素）,阿莫西林（羟氨苄青霉素）,普鲁卡因青霉素,头孢菌素类,7-ACA,8,7,6,1,2,3,4,5,N,O,N,H,S,C,H,2,R,1,C,O,O,H,母核（7-氨基头孢菌烷酸）,R,C,O,头孢氨苄,头孢拉定,头孢羟氨苄,头孢噻吩钠,Na,（一）羧基,与碱金属,(Na,+,、,K,+,),成盐后，易溶于水,与有机碱,(普鲁卡因),成盐，难溶于水,普鲁卡因,青霉素,（,二）旋光性,青霉素类,头孢菌素类,*,*,*,*,*,8,7,6,1,2,3,4,5,N,O,S,N,S,O,4,3,2,1,5,6,7,（三）共轭体系,母核无明显UV,多数有苯环取代基,水解产物(,青酶烯酸,)有UV,青霉素类,COOH,头孢菌素类,COOH,母核有共轭体系,（四）内酰胺环的不稳定性,水溶液：,不稳定（,pH66.8时较稳定）,干燥条件下：,稳定,不稳定因素,四元环张力大,酰胺键易水解,某些金属离子,高温,氧化剂,例,青霉素的降解反应,青霉素,青霉噻唑酸,H,2,O/OH,青霉素酶,青霉酸,H,2,O,pH2,100,青霉噻唑酰基羟胺酸,NH,2,OH,青霉烯酸,pH4,青霉胺,CO,2,青霉醛,HgCl,2,(头孢噻吩钠水溶液2524h,失活8%),NaOH,呈色,Fe,3+,/3,H,+,二、鉴 别,（一）呈色反应,1. 羟肟酸铁反应,H,+,Fe,3+,/3,（红、棕、褐）,NaOH,C,2,H,5,OH,哌拉西林,取本品10mg，加水2ml与盐酸羟胺溶液3ml ，振摇溶解后，放置5分钟，加酸性硫酸铁铵试液1ml，摇匀，显红棕色。,2. 茚三酮,反应,烯醇式,茚三酮,酮式,茚三酮,缩合,蓝紫色,+,H,2,O,C,N,C,H,2,R,C=,O,R,C,H,H,2,N,C,O,O,H,O,C=,C,O,C,O,C,O,H,N,H,2,C,C,O,C,O,C,O,C,O,H,C,N,C,C,O,C,O,C,O,C,O,H,C,H,R,N,C,C,O,C,O,C,O,（开环分解）,3. 双缩脲反应-,-内酰胺类,似肽键,紫红色,（分解）,变色酸,显色,4. 与变色酸-硫酸反应,N,H,2,C,O,N,S,O,H,N,C,O,O,H,C,H,3,C,H,3,H,O,C,H,（缩合）,变色酸,硫酸,（,偶合）,酚羟基,5. 与重氮苯磺酸反应,（偶合）,头孢哌酮,橙黄色,（二）各种盐的反应,K,+,、Na,+,的火焰反应,（三）,色谱法,对照品对照法,1.,TLC法,-内酰胺环,酰胺,（四）,光谱法,1、,IR法,羧酸离子,1600cm,-1,，1410cm,-1,2. UV法,样品、分解产物的最大吸收波长,青霉素V钠,A,280nm,/A,264nm,三、杂质检查,药物,检查项目,检查方法,头孢他啶 聚合物,HPLC法,头孢曲松钠,结晶性，有关物质，,HPLC法,聚合物,头孢噻肟钠,聚合物,HPLC,头孢呋辛酯,结晶性，有关物质，,HPLC法,聚合物,头孢氨苄 有关物质,HPLC法,青霉素钾,吸光度，结晶性,紫外分光光度法,聚合物,1. 聚合物体积排阻色谱法,葡聚糖凝胶色谱法,异构体,异构体A,异构体B,3,-异构体,E异构体,控制比例,有关物质,异构体,：,异构体 相对保留时间 判断,B异构体 0.9,A异构体 1.0 与A、B异构体峰面积 和之比应为0.,480,.55,有关物质,高低浓度自身对照法（1%）,有关物质 相对保留时间 判断,3,-异构体 1.2 不得大于对照液主峰面积之和的1.5倍（1.5%）,E异构体 1.7和2.1,不得大于对照液主峰面积之和（1.0%）,其他杂质 不得大于对照液主峰面积之和的1/2（0.5%）,所有杂质,不得大于对照液主峰面积之和的3倍（3.0%）,（三）青霉素钠（钾）的吸收度检查,供试液 1.80 mg/ml， 结果判断：A,280,不得大于0.10，在264nm处有最大吸收，吸光度应为0.80-0.88.,（四）有机溶剂,例：,氨苄西林钠需检查二氯甲烷,头孢哌酮钠需检查丙酮,头孢他啶需检查吡啶,（五）结晶性,固态物质分为结晶质和非结晶质两大类。,检查结晶性的方法：,第一法：偏光显微镜法，应呈现双折射和消光位等晶体光学性质。,第二法：X射线粉末衍射法。结晶质呈现特征的衍射图，非晶质的衍射图呈弥散状。,四,、,含量测定,（一）,HPLC法,方法：离子色谱法,流动相：缓冲液/甲醇（乙腈）,（五）生物样品的分析,血样,血浆（抗凝）,血清,加内标,沉淀蛋白,离心,取上清夜,第三节 氨基糖苷类抗生素,链霉素 庆大霉素,巴龙霉素,卡那霉素 新霉素 等,链霉素,链霉胍,+,链霉糖,+,N-甲基-L-葡萄糖胺,苷元,糖,链霉双糖胺,一、结构与性质,链霉胍,链霉糖,N-甲基-L-,葡萄糖胺,链霉素,链霉胍,链霉糖,N-甲基-L-,葡萄糖胺,碱性,水溶性,旋光性,有紫外吸收,230nm,稳定性,巴龙霉素（，）,D-葡萄糖胺 脱氧链霉胺,巴龙胺,D-核糖 巴龙霉糖,巴龙二糖胺,R,1,、R,2,：-CH,2,NH,2,庆大霉素,糖,苷元,绛红糖胺 + 脱氧链霉胺 + 加洛糖胺,糖,绛红糖胺,紫素胺,2-脱氧链霉胺,加洛糖胺,复合物,碱性,水溶性,旋光性,性质稳定,无紫外吸收,R,2,O,C,R,3,R,1,HN,N,H,2,O,O,H,H,2,N,N,H,2,O,O,O,H,N,H,C,H,3,O,H,C,H,3,2,二、鉴别,（一）茚三酮反应,原理：具有羟基胺和-氨基酸的性质,+,蓝紫色,（二）Molisch试验,具有五碳糖或六碳糖结构,H,+,糠 醛,羟甲基糠醛,-萘酚,红紫色,蒽酮,蓝紫色,糠醛与-萘酚呈色原理,红紫色,羟甲基糠醛,糠醛与蒽酮的呈色原理,羟甲基糠醛,蓝紫色,例：阿米卡星的鉴别反应：取本品约 10mg，加水1ml溶解后，加0.1%蒽酮的硫酸溶液4ml，即显蓝紫色。,（三） N-甲基,葡萄糖胺,反应,乙酰丙酮,OH,-,吡咯衍生物,对二甲氨基苯甲醛,H,+,樱桃红色,（Elson-Morgan反应）,新霉素,巴龙霉素,(缩合),樱桃红色,对二甲氨基苯甲醛,H,+,硫酸巴龙霉素 鉴别,取本品约10mg，加水1ml 溶解后，加盐酸溶液(9100)2ml ，在水 浴中加热10分钟，加8 氢氧化钠溶液2ml 与2 乙酰丙酮溶液1ml ，再在水浴中加热 5 分钟，冷却后，加对二甲氨基苯甲醛试液1ml ，即显樱桃红色。,（四）麦芽酚反应,链霉素特有反应,H,+,分子重排,紫红,麦芽酚,硫酸链霉素的鉴别方法：,取本品约20mg，加水5ml溶解后，加氢氧化钠试液0.3ml，置水浴上加热5分钟，加硫酸铁铵溶液0.5ml，即呈紫红色。,链霉素特有反应,（,或-萘酚,）,8-羟基喹啉,（五）,坂口反应,-萘酚,橙红色,8羟基喹啉,链霉胍,硫酸链霉素的鉴别方法：,取本品约0.5mg，加水4ml溶解后，加氢氧化钠试液2.5ml与0.1%8-羟基喹啉的乙醇溶液1ml，放冷至约15,，加次溴酸钠试液,3,滴，即显橙红色。,坂口反应,N-甲基葡萄,糖胺反应,麦芽酚反应,（六）硫酸盐,反应,H,+,盐酸or硝酸,不溶,（七）色谱法：,多以硅胶为薄层板，三氯甲烷-甲醇-浓氨水为展开剂，茚三酮或碘蒸汽为显色剂。,（八）,UV法,庆大霉素无UV吸收,BP2005: 240330nm无吸收,（九）,IR法,三、检查,（一）链霉素杂质,链霉素,B,（甘露糖链霉素）,1.,来源 反应中间体,菌种 链霉素B 链霉素,2,方法,TLC,对照品法,硫酸甲醇,加热回流,羟甲基糠醛,显色剂：,1,3-萘二酚乙醇溶液与20%硫酸,样 品,甘露糖,样品溶液与对照溶液相对应的斑点相比较,不得更深,对微生物的活性无明显差异,毒副作用和耐药性不同,发酵菌种不同,工艺差别,C,组分比例,不一致,规定控制各组分的相对百分含量,（二）庆大霉素C组分的测定,max,= 330nm,衍生化法,OPA,1.USP RPHPLC,异吲哚衍生物,离子对色谱法,离子对试剂：,0.02 mol/L庚烷磺酸钠,面积归一化法：,各组分的含量%=r,f,/r,s,*100%,规定,C,1,2550%,C,1a,1035%,C,2a,+,C,2,2555%,2.电化学检测器检测庆大霉素C组分（BP 2005）,3. 蒸发光散射检测器测定庆大霉素C组分（Ch.P 2005）,任何挥发性低于流动相的样品均能被检测,ELSD检测分为三个步骤：（1）用惰性气体雾化脱洗液（2） 流动相在加热管（漂移管）中蒸发（3）样品颗粒散射光后得到检测。,溶液浓度的对数值与相应的主峰面积对数值成正比,流动相：0.2mol/l三氟醋酸-甲醇（92：8）,规定,C,1,2550%,C,1a,1540%,C,2a,+,C,2,2050%,（四）硫酸盐测定（组分分析）,硫酸萘替米星：取本品约0.12g，精密称定，加水100ml使溶解，用浓氨溶液调节pH值至11后，精密加,氯化钡滴定液,(0.1mol/L)10ml、酞紫指示液5滴，,用乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)滴定,，注意保持滴定过程中的pH值为11，滴定至紫色开始消褪，加入乙醇50ml，继续滴定，至蓝紫色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。本品含硫酸盐按无水物计算应为31.535.0。,三、含量测定,HPLC法：,蒸发光散射法：依替米星、卡那霉素,衍生化法：阿米卡星,微生物检定法：,链霉素、庆大霉素、 萘替米星,第四节 四环素类抗生素,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,4a,5a,D,C,B,A,基 本 结 构,四环素,（TC）tetracycline,6,金霉素,(CTC),chlortetracycline,氯四环素,土霉素,(OTC),oxytetracycline,氧四环素,5,多西环素,(DOTC) doxycycline,脱氧土霉素,6,美他环素,（METC） metacycline,一、,结构与性质,酚羟基、烯醇型羟基,弱酸性,二甲胺基,弱碱性,（一）酸碱性与溶解度,1.两性化合物 与酸、碱均能成盐,3.吸湿性 多含结晶水,（二）旋光性,（三）UV和荧光,四环素类药物及其降解产物均具有荧光。,如：,四环素,经碱降解后，呈黄色荧光,土霉素,经酸性降解后，呈绿色荧光,金霉素,经碱降解后，呈蓝色荧光.,1.差向异构化C,4,（四）稳定性,对各种氧化剂、酸、碱都不稳定,差向四环素,ETC,（,土霉素、多西环素不易差向异构化,）,4,5,2,C,H,3,N,H,O,H,C,O,N,H,2,O,O,H,O,H,O,O,H,R,2,R,1,H,O,（1）酸性降解,ATC,脱水四环素,C,橙黄色,TC,ETC,ATC,EATC,差向脱水四环素,橙红色,淡黄色,砖红色,淡黄色,（2）,碱性降解,无活性,强烈荧光,二、鉴别试验,（一） HPLC法,（二）,TLC法,固定相：硅藻土（甘油、EDTA）,EDTA,克服痕量金属造成的拖尾现象,检视：365nm波长下观察荧光,（三）IR光谱法,（四）UV光谱法,多以酸性甲醇溶液为溶剂。,（五）显色法,1. H,2,SO,4,反应,（二）,FeCl,3,反应,盐酸四环素的鉴别,取本品约0.5mg ，加硫酸2ml ，即显深紫色，再加三氯化铁试液 1 滴，溶液变为红棕色。,三、,检查,土霉素,（,OTC,，,1,）,4-,差向四环素（,ETC,，,）,盐酸金霉素（,CTC,，,）,脱水四环素（,ATC,，,）,差向脱水四环素（,EATC,，,）,盐酸四环素,（一）有关物质,HPLC法（2010年版）,方法：自身对照+校正因子,（二）吸收度,取本品，在2025，加0.8%氢氧化钠溶液制成每1ml含10mg的溶液，照紫外-可见分光光度法，置4cm的吸收池中，自加氢氧化钠溶液起5分钟时，在530nm的波长处测定，吸光度不得过0.12（供注射用）。,盐酸四环素杂质吸收度,（三）残留有机溶剂,盐酸多西环素为半乙醇半水合物。,应检查乙醇，含乙醇的量应为4.3%6.0%。,HPLC,法（外标法）,如：盐酸四环素,C,18,柱（PH值适应范围大于8.0）,四、含量测定,第五节 抗生素类药物中高分子,杂质的检查,1.高分子杂质,分子量大于药物本身的杂质总称。分子量一般在1000-5000.,蛋白、多肽、多糖或抗生素与蛋白、多肽、多糖的结合物。主要来自于发酵工艺，致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽。 药物的自身聚合物，来自于生产、贮存过程。可引发过敏。,外源性杂质,内源性杂质,（1）凝胶渗透色谱法,（2）高分子杂质的控制方法-自身对照外标法,原理,：特定条件下，药物自身可缔合成与高分子杂质有相似色谱行为的缔合物。,计算方法,：按外标法计算，得样品中高分子杂质相当于药物本身的相对含量。,色谱条件,色谱柱：,葡聚糖凝胶G-10（40-120m），玻璃柱内径1.01.4cm，柱长45cm。,流动相A,：含3.5%硫酸铵的pH7磷酸盐缓冲液,流动相B,：水。,头孢他啶聚合物的测定,对照品溶液,：头孢他啶的水溶液。,供试品溶液,：头孢他啶的碳酸钠溶液。,系统适用性试验：,。,测定法：,按外标法以峰面积计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计，不得过0.3%。,1.,熟悉抗生素类药物分析的特点及其,常规检验项目。熟悉生物学法与物理化学法测定效价的原理及优缺点。,2.,掌握,内酰胺类抗生素的结构、 性质、鉴别方法。,第十一章 复习内容,3. 掌握氨基糖苷类抗生素的结构、性质及鉴别，了解其检查及含量测定,4. 掌握四环素类抗生素的结构及性质，了解其鉴别、检查及含量测定,5. 了解抗生素类药物中高分子杂质的检查方法。,1下列哪个药物会发生羟肟酸 铁反应,A. 青霉素,B. 庆大霉素,C. 红霉素,D. 链霉素,E. 维生素C,2 属于,-内酰胺类的抗生素药,物有,A. 青霉素,B. 红霉素,C. 头孢菌素,D. 庆大霉素,E. 四环素,3能和茚三酮发生呈色反应的物质有,A链霉素,B庆大霉素,C土霉素,D氨基酸,E苯巴比妥,5能发生重氮化一偶合反应的抗,生素类药物是,A. 青霉素,B. 庆大霉素,C. 苄星青霉素,D. 盐酸四环素,E. 普鲁卡因青霉素,6 . 以下反应可适用的药物,A. 青霉素 B. 链霉素,C. 两者均能 D. 两者均不能,116Kober反应,117. 羟肟酸铁反应,118. 坂口反应,119. N甲基葡萄糖胺反应,120. 在酸性溶液中水解,D,A,B,B,C,812 可以鉴别的药物是,A. 链霉素 B. 庆大霉素,C. 两者均可 D. 两者均不可,8. 用异烟肼反应,9. 用坂口反应,10. 用麦芽酚反应,11. 用三氯化铁反应,12. 用茚三酮反应,D,A,A,D,C,问题1317,A. 茚三酮反应 B. 麦芽酚反应,C. 坂口反应 D. FeC1,3,反应,E. 羟肟酸铁反应,13头孢唑林钠,14金霉素,15链霉素,16庆大霉素,17青霉素,E,D,E,A,ABC,四环素在酸性条件下的降解产物是,A. 差向四环素,B. 脱水四环素,C. 异四环素,D. 去甲四环素,E. 去甲氧四环素,
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