第十五章杂环类药物的分析

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第五节 苯并二氮杂卓类药物的分析,环庚三烯,草,卓,硝西泮,氯硝西泮,奥沙西泮,盐酸氟西泮,艾司唑仑,阿普唑仑,一、结构与性质,1. 苯并二氮杂卓母核 弱碱性，UV,2. 结构中的环一般比较稳定，但在酸性溶液中可水解，形成相应的二苯甲酮衍生物。,二、鉴别试验,（一）化学鉴别,1. 沉淀反应,氯氮卓或阿普唑仑的盐酸溶液遇碘化铋钾成色。,氯氮卓 ChP（2000）,【鉴别】（2）取本品约 10mg，加盐酸溶液（91000）10ml 溶解后，加碘化铋钾试液 1 滴，即生成橙红色沉淀。,阿普唑仑 ChP（2000）,鉴别 （1）取本品约 5mg，加盐酸溶液（91000）2ml 溶解后，分为两份：一份加硅钨酸试液 1 滴，即生成白色沉淀；另一份加碘化铋钾试液 1 滴，即生成橙红色沉淀。,2. 水解后重氮化偶合反应,水解后成芳伯胺的反应 氯氮卓、艾司唑仑、奥沙西泮,氯氮卓 ChP（2000）,鉴别 （1）取本品约 10mg，加盐酸溶液（12）15ml，缓缓煮沸 15 分钟，放冷，加亚硝酸钠和碱性-奈酚。溶液显芳香第一胺类（芳伯胺）的鉴别反应，成橙红色沉淀。（附录）。,3. 硫酸荧光反应 地西泮 ChP（2000）,鉴别 （1）取本品约 10mg，加硫酸3ml，振摇使溶解，在紫外灯（365nm）下检视，显黄绿色荧光。,氯氮卓黄色,艾司唑仑亮绿色,硝西泮淡蓝色,4. 分解产物的反应 氯,地西泮与三唑仑 ChP（2000）,鉴别 （2）取本品 20mg，用氧瓶燃烧法（附录 C）进行有机破坏，以 5% 氢氧化钠溶液 5ml 为吸收液，燃烧完全后，用稀硝酸酸化，并缓缓煮沸 2 分钟，溶液显氯化物的鉴别反应（附录 ）。,（二）UV 和 IR,（三）TLC,药物发展快，品种不断增多， TLC方法比较适合。,1 常用5种，稀硫酸喷雾，紫外灯检视荧光。,2 酸水解产物的TLC法,此类药物有的经酸水解可产生二苯甲酮衍生物。有的不产生，可鉴别。,二苯甲酮衍生物对照品的制备：取本类药物25 mg，溶于盐酸，置沸水中1h，用氢氧化钠调pH10，氯仿提。水洗，无水硫酸钠干燥，蒸去溶剂。,TLC法,此类药物溶于甲醇，点样，加点硫酸液。盖上玻璃烘（水解）。滴加氨水，空气吹干。紫外光检测。,三、特殊杂质的检查,（一） 有关物质的检查,1. 地西泮中有关物质的检查,地西泮的原料及片剂中可能引入N-去甲基苯甲二氮卓。,TLC 高低浓度对比法,供试品溶液：取本品，加丙酮100mg/ml溶液，对照品： 0. 3mg/ml乙酸乙酯：己烷展开。供试品的杂质斑点与主斑点比较不得更深。,2. 氯氮卓中有关物质的检查USP（24） TLC 杂质对照品法； 高低浓度对比法,分解产物 氨基物（2-氨基-5-氯-二苯甲酮）（结构式参考P186图）含量不得超过0.01%，中间体 氧化物（ 7-氯-1，3-二氢-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮卓-2-酮-4-氧化物） （结构式参考P186图）含量不得超过0. 1%。,检查方法：,加丙酮振摇，取上清，TLC，与对照品比对，斑点不得更大更深。,3. 氯氮卓中有关物质的反相高效液相色谱法,（二）降解产物的检查,地西泮注射液,分解产生2-甲氨基-5-氯二苯甲酮,HPLC 主成分自身对照法,第六节、含量测定,一 非水溶液滴定法 特别是对弱碱性药物及其盐的含量测定。由于多为弱减，在水溶液中用标准酸直接滴定没有明显的突跃。而冰醋酸可以使碱性增强。使滴定顺利进行。,应用实力之一,硫酸盐类药物测定（P191）,二元酸，再水溶液中完成二次解离，但在非水溶液中只作一次解离。在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定只到硫酸氢盐为止。,硫酸阿托品的测定（只举一个例子）,阿托品是碱性较强的一元碱。,测定方法：0.5g，称定，加冰醋酸与醋酐各10ml溶解，加结晶紫1-2滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/l）至溶液显纯蓝。空白校正。1ml相当于67.68mg的硫酸阿托品。,二 铈量法,是常用的氧化还原的方法之一，硝苯地平和吩噻嗪类可采用。利用这些药物的还原性，在酸性介质中用硫酸铈滴定。硝苯地平用邻二氮菲指示终点，吩噻嗪类用药物的自身变化指示终点。,自身指示终点或电位法、永停法指示终点,（一） 硝苯地平的测定,方法：取本品0 .4 g，称定，加无水乙醇50ml，微热溶解。加高氯酸溶液，邻二氮菲指示液3滴。用硫酸铈滴定。至橙红色消失。每1ml硫酸铈相当于17.32mg的硝苯地平。,（二） 吩噻嗪类药物的测定,原理：滴定开始，先失去一个电子形成红色自由离子，达到化学计量点时，再失去一个，红色消退。,方法：取本品0 .2 g，称定，加水20ml与稀硫酸10 ml溶解，用硫酸铈滴定。至红色消失。每1ml硫酸铈相当于17.77mg。,方法：盐酸氯丙嗪片的测定,取本品20片，称定，严细，称出适量（相当于盐酸氯丙嗪0.2g），加水20ml与稀硫酸10 ml溶解，按上述方法测定。,优点：,硫酸铈作滴定剂具有高的氧化电位，且为一价还原；不存在对环取代基的副反应，专属性高。,本法既可用于原料，亦可用于片剂的测定。,（二） 钯离子比色法,反应在 pH20.1 的缓冲液中进行,测定方法：,盐酸氯丙嗪含量测定：,取氯化钯溶液，光比色。,优点： 钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪类药物的测定。,四 紫外分光光度法,（一）直接分光光度法 不需提取分离，溶于适当溶剂中即可测定。,1 奥沙西泮测定 取本品15 mg，精 密称定，置200ml量瓶中，加乙醇溶后（温热），定溶。取5ml，稀释至100ml，299nm，测。另取对照品15ml，测定，计算。,2 盐酸异丙嗪片剂测定,盐酸异丙嗪片剂10片。去糖衣，称定严细。称取适量（相当于盐酸异丙嗪12.5g），在200ml量瓶中。加盐酸适量，溶解后至刻度。片剂测定波长为249nm，吸收系数为910。,3盐酸异丙嗪注射液测定,（1）测定波长选择 为了消除抗氧剂维生素C（,max,243nm）对测定的干扰，测定波长由249改为299nm吸收系数为108）。,同理，盐酸氯丙嗪片剂测定波长为254nm，吸收系数为915；注射液测定波长改为306nm，吸收系数为115。,（2）测定方法,：取本品2ml，100ml容量瓶稀释，精取10ml， 100ml容量瓶稀释。299下测。按标准,吸收系数为108计算。,（二） 萃取后分光光度法,盐酸氯丙嗪注射液的含量测定，除上述采用选择299nm波长，直接法消除处方中维生素C的干扰外，还可用萃取后测定法。,（2）测定方法：取本品适量，相当于盐酸氯丙嗪100ml，盐酸稀释至500ml，加氨水，用乙醚提取。再用盐酸液提乙醚，并测定。254nm，按标准吸收系数为915计算。,（三） 萃取双波长分光光度法,（1）原理 在待测组分（a）的最大吸收波长（测定波长，,1,）处测定待测组分和干扰组分。（b）吸收度的总和；另选一适当波长（参比波长，,2,）测定吸收度，并使干扰组分在测定波长和参比波长处的吸收度相等，即 ，而待测组分在这两个波长处吸收度的差值足够大。,（2）定量依据 样品在二波长下吸收度差值（,A,）：,即，吸收度差值（,A）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，干扰组分的干扰被消除。,（3）必要条件, 干扰组分在两个波长处吸收度相等, 待测组分在两个波长处吸收度相差足够大,（4）应用,萃取 除去抗氧剂的干扰,双波长分光光度法测定,排除氧化产物的干扰,测定波长 254nm,参比波长 277nm,对照法定量,（2）测定方法：取本品适量，相当于盐酸氯丙嗪100ml，盐酸稀释至500ml，加氨水，用乙醚提取。再用盐酸液提乙醚，并测定。254nm，按标准吸收系数为915计算。,（四）. 二阶导数分光光度法,盐酸氯丙嗪注射液,抗氧剂维生素C的二阶导数光谱近似为接近基线的一条直线，不干扰盐酸氯丙嗪的测定P197。,因此盐酸氯丙嗪可从其二阶导数光谱量取峰,266nm,谷,254nm,距离，标准曲线法定量,五 气相色谱法,六 液相色谱法（,HPLC）,1. 地西泮注射液的 HPLC 法,内标法加校正因子定量,2. 三唑仑的 HPLC 法,内标法加校正因子定量,复习题,盐酸氯丙嗪的含量测定方法有,A. 中和法,B. 非水滴定法,C. 紫外法,D. 旋光法,E. 铈量法,中国药典（1995年版）对盐酸异丙嗪注射液的含量测定，选用299nm波长处测定，其原因是,A. 299nm处是它的最大吸收波长,B. 为了排除其氧化产物的干扰,C. 为了排除抗氧剂的干扰,D在299nm处，它的吸收系数最大,E. 在其他波长处，因其无明显吸收,有氧化产物存在时，吩噻嗪类药物的鉴别或含量测定方法为,A. 非水溶液滴定法,B. 紫外分光光度法,C. 荧光分光光度法,D. 钯离子比色法,E. pH指示剂吸收度比值法,中国药典(2000年版)中地西泮原料药中2-甲氨基-5-氯二苯酮的检查法为,A. TLC,B. HPLC,C. GC,D. 沉淀法,E. 显色法,检查盐酸氯丙嗪中“有关物质”时，采用的对照溶液为,A. 杂质的标准溶液,B. 标准“有关物质”溶液,C. 供试品溶液,D. 供试液的稀释溶液,E. 对照溶液,某药物于酸性溶液中，加硫酸铈试液则产生红色，继续滴加硫酸铈试液，红色由浅变深，继由深又变浅直至红色消失，该药物应为,A. 雌二醇,B. 氯丙嗪,C. 诺氟沙星,D. 硫酸镁,E. 苯巴比妥钠,吩噻嗪类药物与钯离子反应，需在以下哪种酸性条件下进行,A. pH4,D. pH1,E. pH5,A. 氯氮卓（利眠宁）B地西泮（安定）,C两者均能 D. 两者均不能,分子母核属于苯并二氮杂卓,用氧瓶燃烧法破坏后，显氯化物反应,水解后呈芳伯胺反应,与三氯化锑反应生成紫红色,溶于硫酸后，在紫外光下显黄绿色荧光,(C),（C）,（A）,（D）,（B）,硫酸荧光反应为地西泮的特征鉴别反应之一。地西泮加硫酸溶解后，在紫外光下显,A. 红色荧光 B. 橙色荧光,C. 黄绿色荧光 D. 淡蓝色荧光,E. 紫色荧色,某药物经酸水解后呈茚三酮反应，溶液显紫色，该药为,A. 氯氮卓,B. 地西泮,C. 盐酸普鲁卡因,D. 阿司匹林,E. 尼可刹米,某药物经酸水解后可用重氮化偶合反应鉴别，此药物是,A. 盐酸氯丙嗪,B. 氯氮卓,C. 地西泮,D. 醋酸氢化可的松,E. 维生素C,能和硫酸铜及硫氰酸铵反应，生成草绿色沉淀的药物为,A. 对乙酰氨基酚,B. 异烟肼,C. 尼可刹米,D. 地西泮,E. 维生素E,经高锰酸钾或溴水氧化后，可发生开环形成戊烯二醛反应的药物为,A. 葡萄糖,B. 皮质酮,C. 维生素C,D. 土酶素,E. 异烟肼,溴酸钾法测定异烟肼含量的方法是,A. 属于氧化还原滴定法,B. lmol溴酸钾相当于3/2mol的异烟肼,C. 采用永停滴定法指示终点,D. 在HCl酸性条件下进行滴定,E. 还可以用于异烟肼制剂的含量测定,异烟肼可由原料反应不完全或贮藏中的降解反应而引入哪种杂质,A. 间氨基酚,B. 水杨酸,C. 对氨基苯甲酸,D. 游离肼,E. 其他甾体,可用于异烟肼鉴别的反应有,A. 与氨制硝酸银的反应,B. 戊烯二醛反应,C. 坂口反应,D. 硫色素反应,E. 二硝基氯苯反应,下列药物中，哪一个药物加氨制硝酸银能产生银镜反应,A. 地西泮,B. 阿司匹林,C. 异烟肼,D. 苯佐卡因,E. 苯巴比妥,用于吡啶类药物鉴别的开环反应有,A. 茚三酮反应,B戊烯二醛反应,C坂口反应,D. 硫色素反应,E二硝基氯苯反应,ChP（2000）异烟肼的测定方法为,A. 溴酸钾滴定法,B. 溴量法,C. TLC,D. NaNO,2,E. 比色法,能和2,4一二硝基氯苯发生呈色反应的药物是,A. 异烟腙,B. 硫酸奎宁,C. 阿莫西林,D. 四环素,E. 炔孕酮,参考素材,比色法,（一） 酸性染料比色法,（三）比色法,1. 地西泮经水解后氯仿提取液的比色测定法,2,. 地西泮水解产物甘氨酸与茚三酮反应后比色测定法,3,. 氯氮卓经酸水解后的重氮化偶合比色测定法,（2）弱酸性 非水酸量法,鉴别或氧化还原滴定法含量测定,鉴别或比色法含量测定,酰胺键易水解引入特殊杂质游离肼，可用于吡啶类药物的鉴别,（3）,丙硫异烟胺,位上硫代甲酰胺基,易水解，,加酸水解后，释放出硫化氢，能使湿润的醋酸铅试纸显黑色，故可以此进行鉴别。,3. UV和IR,1. 峰面积归一化法,取一定量供试品溶液进样，测定各杂质及药物的峰面积，计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积的百分率，不能超过限量。注意溶剂峰不应计算在总峰面积内。,优点：不需杂质对照品，简便易行。,缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，控制杂质峰面积百分率不一定就是杂质限量，准确度差。,2. 主成分自身对照法,杂质峰面积与主成分峰面积相差悬殊时应用。,方法,分别进样，测定供试品溶液中各杂质峰面积及其总和，与对照溶液主成分峰面积比较，控制供试品中杂质的量。,缺点：检测波长处，各杂质和药物的吸收强度可能有差异，准确度差,优点：不需杂质对照品，可同时控制各个杂质及其总量限度,3. 内标法测定供试品中杂质的总量限度,方法,供试品供试品溶液,1,图1,供试品+内标供试品溶液,2,图2,判断,若图1无与内标峰保留时间相同的杂质峰，则图2中各杂质峰面积之和应小于内标物质峰面积（溶剂峰不计在内）,若图1有与内标峰保留时间相同的杂质峰，则将图2上的内标峰面积减去图1中此杂质峰面积，,得内标物质峰的校正面积,；图2中各杂质峰面积加上图1此杂质峰面积，得各杂质峰的校正总面积；各杂质峰校正总面积应小于内标物质峰的校正面积。,4. 内标法加校正因子测定供试品中某个杂质的含量,准确测定杂质含量,方法,内标+杂质对照品溶液，进样，测定，计算校正因子,供试品+内标供试品溶液，进样，测定杂质和内标峰面积或峰高，计算杂质量,5. 外标法测定供试品中某个杂质的量,供试品供试品溶液,杂质对照品对照品溶液进样，测定，计算杂质的含量,缺点：不易准确控制进样量，宜用定量环进样,3. 水解后呈茚三酮反应 地西泮,2. 丙硫异烟胺 ChP（2000）,【鉴别】（1）取本品约 50 mg，加盐酸溶液（9100）3 ml ，缓缓加热，发生的气体可使湿润的醋酸铅试纸显黑色。,四、含量测定,（一）异烟肼的含量测定,1. 氧化还原滴定法,（1）溴酸钾法,ChP（2000）原料及制剂,反应摩尔比 32,6,H,7,N,3,O。,（2）溴量法 反应摩尔比 14,（3）剩余碘量法 反应摩尔比 14,2. 非水溶液滴定法,（1）非水酸量法,（2）非水碱量法,（二）尼可刹米的含量测定,1. 非水溶液滴定法,ChP（2000）原料,2. 紫外分光光度法,ChP（2000）注射液,内容量移液管,用内容量移液管精密量取本品1m1，置 100ml 量瓶中，用 0.5 硫酸溶液分次洗涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，加,0.5硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，加0.5硫酸溶液稀释成每1ml中约含尼可刹米20g的溶液，在263nm的波长处测定吸收度，按C,10,H,14,N,2,O的吸收系数（ ）为292计算，即得。,（三）异烟腙的含量测定,非水溶液滴定法 电位法指示终点,ChP（2000）原料及片剂,（四）丙硫异烟胺的含量测定,1. 非水溶液滴定法,ChP（2000）原料,2. 银量法,ChP（2000）片剂,取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于丙硫异烟胺0.3g）置具塞锥形瓶中，加丙酮20ml使丙硫异烟胺溶解，精密加入硝酸银滴定液（0.1mo1/L）50m1，摇匀，放置15min，加水50m1、硝酸3m1、硝基苯5ml与硫酸铁铵指示液2m1，用硫氰酸铵滴定液（0.1mo1/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硝酸银滴定液（0.1mo1/L）相当于,9,H,12,N,2,S。,四、含量测定,（一） 非水溶液滴定法 原料药,HClO4在冰醋酸溶液中，具强氧化性，可氧化吩噻嗪类药物产生红色的氧化物，干扰指示剂终点的观察。排除方法：,（1）改用中性溶剂,（2）加抗坏血酸,（3）电位法指示终点,3. 含卤素,