缺血性脑卒中

,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,第四军医大学唐都脑科医院神经外科,电刺激对大鼠缺血性脑卒中保护作用研究,硕 士 生,：,导 师：,辅导老师：,Stroke,200,万,150,万,700,万,200,亿,2007,年中国脑血管防治指南,Chinas battle with stroke,Fuelled by the spread of unhealthy western lifestylessuch as poor diet, physical inactivity, and tobacco smokingchronic diseases cause about 80% of deaths in China each year, a third of which are due to stroke.,Lancet Neurol. 2008 Dec;7(12):1073,脑卒中鏖战中国,Ratio,67%,33%,Ischemic stroke,美国卒中协会溶栓治疗指南推荐,Intravenous rtPA (0.9 mg/kg, maximum dose 90 mg) is recommended for selected patients who may be treated within,3 hours,of onset of ischemic stroke.,(Class I, Level of Evidence A),Intra-arterial thrombolysis is an option for treatment of selected patients who have major stroke of,6 hours,duration due to occlusions of the MCA and who are not otherwise candidates for intravenous rtPA.,(Class I, Level of Evidence B),狭窄的溶栓时间窗是溶栓治疗的瓶颈,临床的实际使用率,3-5%,谷氨酸损伤机制,谷氨酸,神经毒性,脑缺血期谷氨酸显著升高,谷氨酸浓度与神经损伤呈正相关,升高机制,一次升高：缺血后突触前膜去极化，,ATP,合成不足，再摄取障碍。,二次升高：胞浆膜完整性受到损害，加重谷氨酸释放。,损伤作用,非,NMDA,受体：,Na,、,H,2,O,进入细胞；,Cl,失衡，导致细胞水肿。,NMDA,受体：,Ca,2,进入细胞，钙超载，血脑屏障破坏。,神经营养因子保护机制,BDNF,促进中枢神经存活、增殖和分化,促进突触生长和重塑,脑创伤后,BDNF,的表达显著提高,如能有效增加缺血区域,BDNF,的表达可显著降低梗死比，促进功能恢复。,神经营养因子保护机制,增加血脑屏障的渗透性，加重脑损伤,促进神经、血管再生；神经保护作用,急性期,晚期,VEGF,谷氨酸,VEGF,超急性期,急性期,VEGF,BDNF,缺血损伤后期,电刺激,肌张力障碍 特发性震颤 癫痫 精神性疾病 帕金森,高频,低频,高频刺激可减少谷氨酸释放,低频刺激可增加神经营养因子表达,第一部分：深部电刺激对急性缺血性脑,卒中保护作用及机制研究,第二部分：皮层电刺激对急性缺血性脑,卒中保护作用及机制研究,第一部分：深部电刺激对急性缺血性脑卒中保护作用及机制研究,双极电极,旁前囟右侧,深度为距颅平面,电极植入部位,实验分组,250,280g,雄性,SD,大鼠,对照,2Hz,20Hz,100Hz,100/2Hz,技术路线,TTC,染色,行为学评分,建立大鼠,MCAO,模型,缺血,24,小时,处死大鼠,提取脑组织,保护效果观察,机制研究,免疫印迹法测定,VEGF,的表达,免疫印迹法测定,BDNF,的表达,植入电极，于缺血,3h,开始电刺激,2h,筛选成功的大鼠模型,深麻醉取脑,冰盐水,10min,冠状面切片,(2mm),2,TTC,染色,10,福尔马林固定,37,30min,拍照并进行图象分析,TTC,染色,借,助,于,鼠,脑,槽,TTC,染色,*,P0.05, vs,Control group;,#,P0.05, vs other,group,Garcia,评分标准,测试,得分,0,1,2,3,自主运动（笼中活动,5,分钟）,没有活动,几乎不能活动,能活动，但活动范围没有达到鼠笼中的,3,面,活动范围至少在能达到鼠笼中的,3,面,四肢活动对称性,左侧：没有活动,左侧肢体有轻微的活动,左侧肢体缓慢活动,双侧肢体活动对称,前肢的对称性（提起尾巴时前肢的伸展情况）,左侧：不活动无法伸展,左侧能活动，肢体能轻微的伸展,左侧活动和肢体伸展的不如右侧,双侧前肢对称伸展,金属丝鼠笼中的攀援情况,不能攀援,左侧稍弱,攀援正常,触摸双侧躯干反应,左侧无反应,左侧反应减弱,反应对称,触须反应,左侧无反应,左侧反应减弱,反应对称,Garcia,行为学评分,a,P0.05, vs,Control group;,b,P0.05, vs,2Hz group,免疫印迹法测定,BDNF/VEGF,的表达,*,P0.05, vs,Control group;,小 结,2Hz,血管内皮生长因子,VEGF,降低了梗死比,显著提高了行为学表现,抑制了血脑屏障通透性的升高？,第二部分：皮层电刺激对急性缺血性脑卒中保护作用及机制研究,旁前囟右侧,电极置于硬脑膜外,电极植入部位,单级电极,anodal/cathodal,实验分组,250,280g,雄性,SD,大鼠,假手术组,sham group,对照组,vehicle group,阳极刺激组,anodal,阴极刺激组,cathodal,建立大鼠,MCAO,模型,技术路线,TTC,染色,缺血,24,小时,处死大鼠,提取脑组织,保护效果观察,机制研究,免疫印迹法测定,VEGF,的表达,免疫印迹法测定,BDNF,的表达,植入电极，于缺血,3h,开始电刺激,3h,筛选成功的大鼠模型,行为学评分,TUNEL,染色,伊文氏蓝灌注测定,血脑屏障渗透性,TTC,染色,*,P0.05, vs,Vehiclel group;,#,P0.05, vs cathodal,group,Garcia,行为学评分,*,P0.05, vs,Vehiclel group,TUNEL,染色,P0.05 vs sham,group; *,P0.05, vs,Vehiclel group;,#,P0.05, vs cathodal,group,免疫印迹法测定,VEGF,的表达,P0.05 vs sham,group; *,P0.05, vs,Vehiclel group;,#,P0.05, vs cathodal,group,免疫印迹法测定,BDNF,的表达,P0.05 vs sham,group;,伊文氏蓝染色实验,P0.05 vs sham,group; *,P0.05, vs,Vehiclel group;,#,P0.05, vs cathodal,group,小 结,皮层电刺激,血管内皮生长因子,VEGF,降低血脑屏障的渗透性,降低了梗死比,提高了行为学表现,减少了细胞凋亡,讨论与分析,100Hz,刺激组与对照组相比其行为学表现、梗死比差异无统计学意义，其可能与刺激的开始时间有关。,2,Hz,刺激组与对照组相比,BDNF,的表达无统计学差异，其可能与刺激持续时间较短有关。,电刺激对缺血性脑卒中的保护机制除急性期降低,VEGF,表达外是否存在其他因素尚有待进一步实验验证。,在大鼠永久性脑卒中模型，电刺激有明显的保护作用。且以频率为,2Hz,的阳极电刺激保护作用最显著。,在大鼠永久性脑卒中模型，低频短时电刺激可降低,VEGF,的表达，且,VEGF,表达水平与神经保护作用呈负相关。,电刺激为临床治疗脑卒中提供了新的思路。,小 结,1.,刘竞辉 等。电刺激对大鼠缺血性脑卒中的保护作用,中华神经外科疾病研究杂志,，,2013,，,12(1),：,8-11.,2. Jinghui Liu, Jiang Li, Zhenwei Zhao,et al.,Protective effect,of,cortical electric stimulation,on cerebral ischemia injury,in rats.,（,submission,）,论文发表,衷心的感谢恩师赵振伟教授，在我求学期间给予了我无私的关怀和帮助。导师高尚的医德，精湛的医术，严谨的治学态度，让我能够成为他的学生而倍感自豪。所有的一切，无不深深的影响着我，激励着我，使我受益终身。,衷心的感谢高国栋教授，在我求学期间给予的无私帮助和深切关怀，为我在今后的学习过程中树立了更高更远的志向，为我今后的工作中注入了认真严谨，不断创新，勇攀高峰的精神。,衷心的感谢辅导老师李江副教授对我实验工作的指导和帮助，使我受益匪浅。衷心的感谢杨倩教授，在我实验期间给予了我很多关键性的指导。衷心的感谢朱俊玲讲师，李毅老师，逯芳芳老师，李晨老师，李珍珍老师，王强老师，李敏博士，李建博士，赵天智博士，马劼博士，崔颖博士在我本次实验研究过程中给予的悉心指导，大力支持和无私帮助。,最后衷心的感谢我的父母，我的家人以及亲朋好友对我的理解和支持，使我得以在学校安心顺利的完成学业。,致 谢,Thank You,！,衷心感谢各位评委和专家,!,