大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,实验一 大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定,实验目的：,1,、熟悉蒽醌类成分的提取分离方法。,2,、掌握,PH,梯度提取法的原理和操作技术。,3,、学习用硅胶柱色谱法分离大黄酚和大黄素甲醚。,4,、学习羟基蒽醌类化合物的鉴定方法。,实验原理：,本实验根据大黄中的蒽醌苷类在酸性条件下加热，可水解成游离羟基蒽醌和糖，而游离羟基蒽醌不溶于水，可溶于乙醚、氯仿等亲脂性有机溶剂的性质，从水解物中将游离羟基蒽醌提出。再利用游离羟基蒽醌的酸性不同，采用,PH,梯度萃取法将其分离。,大黄酸,R,1,=H R,2,=COOH,大黄素,R,1,=CH,3,R,2,=OH,芦荟大黄素,R,1,=CH,2,OH R,2,=H,大黄素甲醚,R,1,=CH,3,R,2,=OCH,3,大黄酚,R,1,=CH,3,R,2,=H,实验器材：,试药,：大黄粗粉、牛黄上清丸、含水氯仿（水饱和）、甲醇、乙醚、,20%,硫酸溶液、冰醋酸、,5%,碳酸氢钠溶液、,5%,碳酸钠溶液、,0.25%,氢氧化钠溶液、,5%,氢氧化钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、醋酸镁、柱层析用硅胶（,100,200,目）、硅胶,-CMC,硬板、石油醚（沸程,60-90,）,-,乙酸乙酯（,151,）、石油醚乙酸乙酯甲酸（,1551,）等,仪器,：回流装置一套、蒸发皿、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电炉、薄层板、点样毛细管等,实验内容与方法：,一、游离蒽醌的提取,称取大黄粗粉,50g,，加,20%,硫酸溶液,50ml,，充分搅拌混匀，加氯仿,200ml,，热水浴上回流提取,1,小时，过滤得氯仿滤液。药渣继用氯仿,200ml,回流,1,小时，过滤，合并两次氯仿提取液于圆底烧瓶中，加沸石数粒，水浴上蒸馏回收氯仿至,200,毫升（可减压抽干氯仿）。,二、,PH,梯度萃取分离,1.,大黄酸的分离和精制：将含有总蒽醌的氯仿液放入分液漏斗中，加,5%,碳酸氢钠溶液萃取数次（每次,20,30m1,），至萃取碱水液呈淡红色为止。合并萃取碱液，加盐酸至呈酸性（,PH2,3,），析出黄色沉淀。过滤，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性。干燥后加冰醋酸,10ml,加热溶解，趁热过滤，滤液放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗结晶，得黄色针状结晶为大黄酸。,2.,大黄素的分离和精制：用碳酸氢钠液萃取后的氯仿液加,5%,碳酸钠溶液萃取数次（每次,20,30m1,），（方法同上述碳酸氢钠溶液的处理）。萃取液经酸化后析出棕黄色沉淀，过滤，水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀经干燥后，用,15ml,丙酮热溶，趁热过滤，滤液静置，析出橙色针状结晶，过滤后，用少量丙酮淋洗结晶，得大黄素。,3.,芦荟大黄素的分离和精制：用碳酸钠液萃取后的氯仿液加,0.25%,氢氧化钠溶液萃取数次（每次,20,30m1,），（方法同上述碳酸氢钠溶液的处理）。萃取液经酸化后析出黄色沉淀，过滤，水洗至中性，干燥，用,10ml,乙酸乙酯精制，得黄色针晶的芦荟大黄素。,4.,大黄酚和大黄素甲醚的分离和精制：萃取除去芦荟大黄素后余下的氯仿层，再用,5%,氢氧化钠溶液,200ml,分两次萃取，至碱水液呈无色为止，合并碱水层，加盐酸至呈酸性（,PH2,3,），析出黄色沉淀，过滤，水洗至中性，干燥，为大黄酚和大黄素甲醚的混合物。将此混合物溶于乙酸乙酯，用硅胶柱色谱分离。,5.,柱层析法分离大黄酚和大黄素甲醚,（,1,）装柱 取一玻璃层析柱，垂直固定在铁架台上，在管的下端垫入少量棉花，装入,100,200,目硅胶（约,1/3,高，湿法装柱）。,（,2,）上样 将样品置于小蒸发皿中，用少量石油醚分散，另加用,3,倍量硅胶拌和均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂。然后将含有样品的硅胶装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸。,（,3,）洗脱 将色谱柱活塞打开，洗脱剂为石油醚（沸程,60-90,）,-,乙酸乙酯（,151,）混合液。,（,4,）收集 洗脱液,25ml,一份，分别收集，回收溶剂至小体积，放置，即可析出结晶，合并相同晶形部分。先洗脱下的化合物为大黄酚，后洗脱下的化合物为大黄素甲醚。,三、鉴定,1,、蒽醌类成分化学鉴定,（,1,）碱液试验 分别取各蒽醌结晶数毫克置于小试管中，加,2%,氢氧化钠溶液,1ml,，观察颜色变化。凡有互为邻位或对位羟基的蒽醌呈蓝紫至蓝色，其它羟基蒽醌呈红色。,（,2,）醋酸镁试验 分别取蒽醌结晶数毫克，置于小试管中，各加乙醇,1ml,使溶解，滴加,0.5%,醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化。,2,、薄层层析检识,对照品的处理：取牛黄上清丸制剂（含大黄）,3,克,切碎,加甲醇,50m1,冷浸,24,小时,过滤,取滤液,5 m1,蒸干,残渣加水,10m1,使溶解,加盐酸,1m1,置水浴上加热,30,分钟,冷却,用乙醚,20 m1,分两次萃取,合并乙醚液,蒸干,残渣加乙酸乙酯使溶解成,1m1,为供试品溶液。,吸附剂：硅胶,G-CMC-Na,板,展开剂：石油醚乙酸乙酯甲酸（,1551,）上层溶液,点样：提取的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的醇溶液及处理后的牛黄上清丸的醇溶液,显色剂：自然光下观察，记录黄色斑点出现的位置，然后再用浓氨气熏或喷,5%,醋酸镁甲醇溶液，斑点显红色。,观察记录：记录图谱并计算,Rf,值。,