发酵工艺综合实验

发酵工程实验,发酵工程实验,*,*,*,发酵工程实验,*,*,*,发酵工程实验,*,*,*,发酵工程实验,*,*,*,发酵工程实验,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,发酵工艺综合实验,实验内容,发酵工程实验, -,酵母的液体发酵,发酵工程实验, -,黑曲霉的固体发酵,2,内容,本次实验分酵母的液体发酵和黑曲霉固体发酵两个内容；以实验小组为单位，分发、清洗本小组实验所需要玻璃仪器、完毕后清洗回收；配制本小组所需根本试剂。,准备,每班选出1-2个同学跟着实验室毛会丽教师准备实验，配制试剂，活化菌种，准备时间段在第十五周。选出人员后报与毛会丽教师。,3,分组,每个实验室由班长总负责，分为2大组； 每一大组分2小组，自由组合分别作液体、固体发酵实验；分组名单由班长报给辅导教师，向辅导教师留联系方式。,4,李 端：,周晨妍：,刘振华：,明红：,毛会丽：,辅导教师联系方式：,5,发酵工程实验, -,液体发酵,实验,目的,实验材料和器材,实验内容,作业与思考题,实验一 酵母的液体摇瓶发酵实验,6,掌握液体发酵种子液的制备和摇瓶发酵技术与方法,掌握总糖和复原糖含量的测定方法,掌握常用的比色分析方法的操作技术,熟悉酵母菌的微生物学特性与培养方法,一、实验目的,7,二、实验材料和试剂配制方法,1.,实验菌种：酵母菌,菌丝显微照片,平板照片,8,2.实验仪器：玻璃试管、试管架、吸管1mL，2mL，10mL、吸耳球、容量瓶、烧杯、三角瓶250 mL，500mL、量筒250mL，500mL，1000mL、玻璃棒、试纸、塑料漏斗、电炉、接种铲针、振荡培养箱、恒温箱、台秤等。,9,3.,培养基,(1),斜面培养基,麦芽汁培养基,：,10,o,麦芽汁,100mL,，琼脂,2g(2%),， 加热煮沸溶解，蒸发所失体积用水补足，定容至,100mL,。,PDA培养基：取去皮马铃薯20g，切成小块，加水100mL。微沸30min，用纱布过滤，加2g葡萄糖，加热煮沸后参加2g琼脂，继续加热融化并补足失水，定容至100mL。,10,(2),种子培养基：,10,麦芽汁，,或,葡萄糖,10%,，玉米浆,1%,，尿素,0.2%,，。,(3),发酵培养基：,玉米粉经液化、糖化，折合葡萄糖浓度为,10%,，玉米浆,1%,，硫酸铵,0.4%,，。,装量：,30mL/250mL,11,4.,试剂的配制,(1) 1mg/mL葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖，置于小烧杯中用少量的蒸馏水溶解后，定容转移到100mL的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱保存备用。每小组！, DNS试剂：称取20.00g 3,5-二硝基水杨酸溶解于水，一边不断地搅拌一边逐渐参加，让其溶解。然后逐渐参加苯酚10g，亚硫酸钠10g，酒石酸钾钠600g，加热至45，冷却后在的容量瓶中定容。室温存放在棕色瓶中。已经配制！,12,(3) 酚酞指示剂：称取5g酚酞，溶于250mL 70%乙醇中。,(4)6moL/L HCL: 先于1000mL容量瓶中参加约200mL蒸馏水，然后取540mL浓盐酸沿瓶壁缓慢参加，加水定容至1000mL。,(5)6moL/L NaOH ：称取240g NaOH ，溶于800mL 蒸馏水中，待散热冷却后，加水定容至1000mL。,每个实验室！,13,三、,实验内容,摇瓶酵母的接种与培养,总糖含量的测定,复原糖含量的测定,pH值的测定,14,无菌条件下，从冷藏的产生菌的斜面孢子中，刮取适量孢子涂在,PDA,斜面上，然后置,28-30,的恒温箱培养,2-3d,。,斜面菌种的制备,内容,1,摇瓶酵母的接种与培养,15,斜面培养基,按照,配方,种子培养基,称量,分装,250mL,锥形瓶,(50mL),加封口膜,121,下,灭菌,30min,冷却备用,种子培养基,置于超净工作台上,种子培养基的制备,16,PDA,酵母,斜面,刮取,2-3,环,菌体细胞悬浮液,28,摇床,140rpm,培养,2d,摇瓶接种,参加无菌水,洗下细胞,移液管吸,取孢子液,参加摇瓶,接种量10%,种子液,种子液制备流程,17,发酵培养基,发酵培养物,接种量,10%,种子液,发酵设置与培养,140,rpm,28,Ps,：每个瓶子设一个平行,18,发酵培养物,取样时间：,0,、,8,、,16,、,24,、,32,、,40,、,48h,测定：pH、总糖含量、复原糖含量,注意！,0h,培养液要留一部分放置冰箱作为菌体浓度测定的,对照,。,取样和需测定的指标,19,内容2 总糖与复原糖含量的测定,DNS,法,20,取发酵上清液，参加装有5mL6moL/L HCL与10mL蒸馏水的50mL的三角瓶中，微沸加热水解30min。待三角瓶冷却后，参加1滴酚酞指示剂，以6moL/L NaOH中和至微红色，将水解液全部收集在50mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为总糖待测液。,总糖的水解和提取,注意！,微沸加热水解时一定注意锅内的水不要烧干！,21,CW,定容至,25mL,0mL,0.2mL,0.4mL,0.6mL,0.8mL,1.0mL,1.2mL,1mg/mL,葡萄糖标准液,沸水浴,5min,后冷却至室温,540nm,波长处比色，以,0,管调零,标准曲线的绘制,2.0mL,1.8mL,1.6mL,1.4mL,1.2mL,1.0mL,0.8mL,加入,1.5mLDNS,后混匀,注意！,测定前一定要检查波长是否正确！,22,管 号,总糖测定管号,总糖待测液（,mL,）,1,1,1,蒸馏水（,mL,）,1,1,1,DNS,（,mL,）,1.5,1.5,1.5,管 号,还原糖测定管号,1,2,3,上清液（,mL,）,0.5,0.5,0.5,蒸馏水（,mL,）,1.5,1.5,1.5,DNS,（,mL,）,1.5,1.5,1.5,然后沸水浴5分钟，冷却到室温，于540nm波长处进展测定。,总糖和复原糖的测定,23,计算公式,复原糖g/mL=,总糖（,g/mL,）,=,24,内容,3,pH,值的测定,将发酵液混匀后，用玻璃棒沾取发酵液，用或试纸检测，测出发酵液的,pH,值。,25,四,、,作业与思考题,1.观察记录酵母菌细胞液体发酵过程中发酵液的颜色，粘度，菌丝形态以与气味。,2.测定酵母菌的简单分批发酵中每次取样中菌体细胞生长量、总糖和复原糖含量和pH值，绘制发酵曲线。,26,实验二 木聚糖酶XyLanase固体发酵,实验,目的,实验原理,实验材料和器材,实验内容,作业与思考题,发酵工程实验, -,固体发酵,27,1熟悉实验室固体发酵技术,2观察并记录黑曲霉培养过程中菌种生长变化情况,3掌握xyLanase酶活力的测定方法,一、实验目的,28,在畜禽和水产动物肠道内形成较高的粘度的食糜，不易被动物消化。,同时肠道粘度增加导致营养物质在肠道内蓄积，形成富含养分的食糜，使得微生物增殖，损害肠道黏膜正常形态与功能，还可导致腹泻和死亡率的增加。,导致动物采食量下降，阻碍消化液与底物的混合，从而阻止脂肪的消化吸收,抗营养因子,二、实验原理,29,1.实验菌种：黑曲霉Aspergillus niger,2.实验仪器与设备,玻璃试管、试管架、吸管1mL，2mL，10mL、吸耳球、离心管、容量瓶、烧杯、三角瓶250 mL、电子分析天平、移液枪、玻璃棒、试纸、塑料漏斗、电炉等。,自动灭菌锅、无菌间、超净工作台。,振荡培养箱、分光光度计，,三、实验材料,30,3.,试剂配制,1%W/V木聚糖底物 ：称取木聚糖参加80mL预热至80的蒸馏水中，再加热至沸点，冷却后定容至100mL，4保存备用。 每小组！,10mg/mL木糖母液 ：准确称取分析纯木糖，用适量蒸馏水溶解，定容到100mL， 4保存备用，用时稀释10倍。每小组！,31,每个三角瓶500mL麸皮6g，玉米芯4g，以固水比为的比例参加自来水， pH自然。 121下灭菌30min 装量30ml/500ml,4.,发酵培养基的配制与灭菌,32,四、实验内容,发酵培养基接种,取样与样品处理,Xylanase,酶活测定,33,超净工作台上，制备孢子悬液,(,50mL/250mL,),，混匀后取,5mL,接入三角瓶中，于室温培养,48h,。,发酵培养基接种,34,取样,取样：,0,、,24,、,32,、,40,、,48,、,56,、,64,、,72h,测定：,xyLanase,的活力,酶液浸提：采用四分取样法，准确称量样品2g，40 用25mL蒸馏水浸提4h，过滤，所得滤液作为待测酶样；,样品处理测定,35,序号,木糖标准液,1mg/mL,(mL),蒸馏水,(mL),DNS,(mL),对应木糖含量,（,g,）,0,0,2.0,3.0,0,1,0.2,1.8,200,2,0.3,1.7,300,3,0.4,1.6,400,4,0.5,1.5,500,5,0.6,1.4,600,6,0.7,1.3,700,将试管于沸水浴中沸腾5分钟样品放入重新沸腾时算起，取出后立即参加蒸馏水10mL混匀，冷却后，在分光光度计540nm比色。以0管调零，标线不设0点。,木糖标准曲线的绘制,36,待测酶液,XyLan,底物,40,预热,准确反响300s,参加DNS试剂3mL,沸水浴,5,分钟,10mL, 540nm,比色,冰浴,CK:,将待测酶液换成蒸馏水，做两个平行。,37,计算公式,木聚糖酶u/g =,W:样品质量g ,X：木糖的量g ,V：样品提取时参加水量mL ,N：样品二次稀释的稀释倍数,38,谢谢大家！,39,作业题,1.,测定每次取样中的木聚糖酶活力，并绘出曲线图。,产酶历程中，影响产酶的因素有哪些？,40,发酵历程中各项指标的变化,41,42,43,谢谢大家！,44,汇报结束,谢谢大家,!,请各位批评指正,