实验 植物组织培养

单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第四部分 浅尝现代生物技术,实验,11,植物的组织培养,单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,实验 植物组织培养,实验目的,1,、进行菊花的组织培养,2,、尝试植物激素的应用,通过必修课的学习，我们已经了解到大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？,组织培养,营养繁殖,扦插,嫁接,压条,无性繁殖,一、基础知识分析,（一）组织培养的生殖方式,（二）植物组织培养的基本过程,知识要点,:,1.,细胞分化的概念；,2.,离体植物细胞的脱分化和再分化。,（三）影响植物组织培养的因素,影响植物组织培养的因素有培养基配制、外植体的选取、消毒、接种、培养、移栽和栽培等。,(1),外植体选取：不同的植物组织,同一植物的不同材料,(2),营养,(3),环境条件,(pH,、,温度,、,光照,),(4),植物激素,(5),消毒,（四）生长素与细胞分裂素使用配比对实验结果的影响,使用配比,实验结果,细胞分裂素,生长素浓度,诱导,芽,的生成,细胞分裂素,=,生长素浓度,愈伤组织继续生长而不分化,细胞分裂素,生长素浓度,诱导,根,的生成,二、菊花的组织培养步骤,（一）制备,MS,固体培养基,1,、配制母液,按照,MS,培养基成分表,分别配制培养基的母液。,(1),大量元素母液,(10,倍液,),分别称取,10,倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约,800ml,热的（,60-80,）蒸馏水中。（一种成分完全溶解后再加入下一种，最后加水，定容至,1000ml,后装入试剂瓶中，冰箱内贮存备用）。,(2),微量元素母液,(100,倍液,),(3),铁盐母液（,100,倍液）,(4),有机物质母液,(100,倍数,),(5),生长素母液,(6),细胞分裂素母液,注意,:,配制培养基时，一定要注意调节,pH,。,MS,培养基配制方法,返回,（,1,）把装好的培养基的三角瓶放入高压灭菌锅中，盖好锅盖。,（,2,）设置灭菌温度参数为,121,，,20min,，开始灭菌。,2,、灭菌,无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键,外植体（离体组织）消毒,注意：,对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。,1,、,70,酒精中浸泡,10min,，无菌水冲洗,2,、,5%,次氯酸钠溶液中浸泡，无菌水冲洗,3,、用另一,5%,次氯酸钠溶液浸泡,5min,，无菌水冲洗,4,、超净台中用无菌水多次冲洗,切段后接种,1,、先用肥皂洗手，穿上工作服，戴上口罩和工作帽。,2,、放入培养瓶和灭菌后的接种用具,(,镊子、解剖刀、接种针,),，把镊子、解剖刀、接种针插入内盛,70%,酒精的广口瓶中。,3,、在酒精灯火焰旁，打开三角瓶，把花茎用无菌解剖刀切成几段，每段至少有一张叶片,4,、切段插入培养基，诱导愈伤组织，盖上封口膜。,5,、愈伤组织插入生芽培养基，盖上封口膜。,6,、用记号笔在瓶壁上写明,培养材料,、,培养基代号,、,接种日期,。,注意事项,全部接种操作都是在无菌条件下进行的，所以要特别认真仔细，以防杂菌污染。,培养,接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养。培养期间应定期消毒，温度控制在,5,，并且每日照光小时 。观察记录生长情况，并照相存档。,2,-,3,周后将生长健壮的,丛状苗,在无菌条件下一个个,转入生根培养基,中，在上述条件下继续培养,移栽,栽培,生根后，将苗移至消毒的草炭土或蛭石中，用玻璃罩或塑料布保持,80%,以上湿度，,2,-,3,天后打开玻璃罩低湿度锻炼,转移至土中培养（定植）,五、练习,植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如,一些细菌、真菌等的生长,。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。,外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。,在植物组织培养过程中，为什么要进行一系列的消毒，灭菌，并且要求无菌操作？,在选取菊花茎段的时候，为什么要选取生长旺盛的嫩枝？,3,、不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可以使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度,4,、本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？,5,、如果在自然界取植物样本进行组织培养，你认为应采取什么措施保证样本不被污染？,任何植物物种或品种都不可贸然使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度,，必须要套索使用如何合成激素和何种激素浓度才可以。学习者可以参考已有文献上成熟的经验，也可以自己探索,植物中存在的天然激素有相应的使之分解的酶,，这样，天然激素在植物体内作用和,存在的时间就较短,，而,人工合成的激素在植物中没有相应使之分解的酶,，所以作用和存在时间长，作用效果也更明显。,（,1,）操作环境洁净（,2,）植物样本洁净（,3,）操作过程无菌,因为污染物的来源是操作过程中和植物本身带来的，主要是微生物的污染，要采用各种措施防止微生物污染，具体做法和操作在微生物培养实验中已经介绍。除认真消毒除菌外，操作敏捷迅速，也可以降低污染率,例：（,10,浙江卷）,6, 将无根的非洲菊幼苗转入无,植物激素的培养中，在适宜的温度和光照等条,件下培养一段时间后，应出现的现象是,（ ）,B,6,右图为植物体细胞杂交过程示意图。据图回答：（,1,）步骤是,，最常用的方法是,。（,2,）步骤一般常用的化学试剂是,，目的是,。,(3),在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，运用的技术手段是,，其中步骤相当于,，步骤相当于,。,（,4,）植物体细胞杂交的目的是获得新的杂种植株。使,能够在新的植物体上有所表现，其根本原因是,。,去掉细胞壁，分离原生质体,酶解法,聚乙二醇（,PEG,）,诱导植物原生质体融合,植物组织培养,脱分化,再分化,远缘杂交亲本的遗传特征,杂种植株获得双亲的遗传物质,（,5,）若远源杂交亲本,A,和,B,都是二倍体，则杂种植株为,倍体。,（,6,）从理论上讲，杂种植株的育性,。若运用传统有性杂交方法能否实现？,。,并说明现由,。,因此，这项研究对于培养作物新品种方面的重大意义在于,。,（,7,）利用植物体细胞杂交的方法培育作物新品种过程中，遗传物质的传递是否遵循孟德尔的遗传规律？为什么？,。,四,可育,不能,因为不同种生物之间存在生殖隔离,克服远缘杂交不亲和的障碍，大大,扩展了可用于杂交的亲本组合范围,不遵循。因为在生物进行有性生殖的过程中，才遵循,孟德尔的遗传规律，而植物体细胞杂交育种的过程不属于有性生殖,Thank You !,不尽之处，恳请指正！,