植物的组织培养实验指导

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2019/7/14,#,植物组培实验操作指导,技术部,一、培养基制备,配制培养基需要的仪器设备,电子天平、烧杯、电磁炉或微波炉、不锈钢盆、移液器、吸头和吸头盒、高压蒸汽灭菌锅、组培瓶、量筒、药勺、玻璃棒、植物组织培养试剂盒。（见下图）,2,培养基制备所需仪器设备及耗材,1,、称量溶解,称取,42g,的,MS,固体培养基（图,1,）（试剂盒提供的每瓶,42g,），放入不锈钢盆中量取,1L,蒸馏水加入搅拌均匀溶解（图,2,，图,3,）。也可按照相应的比例配制合适体积的培养基。,（图,1,）,（图,2,）,（图,3,）,2,、加热煮沸,将溶解的培养基用电磁炉加热煮沸至琼脂全部溶解，溶液呈澄清态。少量的培养基可用烧杯放于微波炉加热。煮沸溶解后添加蒸馏水补充加热损失的水分。,（图,4,）,（图,4,）,6,3,、添加激素调节,pH,按照培养的不同植物以及不同外植体添加合适的激素（图,5,）（矮牵牛腋芽转接不需加激素），调节,pH,值至,6.0,。（图,6,、,7,）,（图,6,）,（图,7,）,7,4,、分装,待培养基冷却至,50,60,时，分装到组培瓶中，每瓶,25,30mL,，拧上盖子。,（图,8,，,10,，,11,）,注：瓶盖上的固定滤膜装置要拧紧，防止滤膜脱落。（图,9,）,（图,8,）,（图,9,）,8,（图,10,）,（图,11,）,9,5,、灭菌及冷却,把分装好的组培瓶和培养皿放于高压蒸汽灭菌锅中,121,灭菌,20,分钟。（图,12,，,13,，,14,）,灭菌结束后取出放置室温冷却凝固备用。,（图,12,）,10,（图,13,）,（图,14,）,11,二、无菌苗接种培养,超净工作台、光照培养架或恒温光照培养箱、解剖剪、镊子、两面板（试管架）、酒精灯、火柴（打火机）、酒精棉球、无菌培养皿、废液缸。,12,接种培养需要的仪器设备,13,1,、超净台灭菌,打开超净工作台内的紫外灯和风机（开到低速档），把实验用到的相关器械放进超净工作台紫外照射灭菌,20,30min,。灭菌结束后关闭紫外灯，继续吹风,5min,去除臭氧的味道。（图,15,）,（图,15,）,14,2,、双手消毒,点燃酒精灯，使用酒精棉球擦拭双手，尽量擦拭到手指缝和指甲盖位置。（图,16,，,17,）,注：如果用火柴点酒精灯一定要让火柴熄灭后方可放入废液缸，以免点燃使用过的酒精棉球引起火灾。,（图,16,）,（图,17,）,15,3,、接种器械消毒,先使用酒精棉球对解剖剪（解剖刀）和镊子进行擦拭，然后放于酒精灯火焰进行灼烧，剪刀的交叉部位需张开活动以便充分灼烧。灼烧灭菌后放于两面板或试管架上冷却。（图,17,，,18,，,19,，,20,）,（图,17,）,（图,18,）,16,（图,19,）,（图,20,）,17,4,、修剪无菌苗,把装有无菌苗的组培瓶口在酒精灯火焰周围灭菌几秒钟，打开瓶盖，用镊子夹出无菌苗放于无菌培养皿中，盖好培养皿盖子。（图,21,，,22,，,23,，,24,）,（注：瓶口灭菌时间不宜过长，以免烧坏瓶口）,剪去无菌苗的叶子，只留下茎段和叶柄。,把无菌苗按芽剪成“丫”字型，只留一个腋芽和叶柄。（图,25,，,26,，,27,）,18,（图,21,、,22,、,23,、,24,）,19,修剪叶片时先四周剪平，剪出伤口，叶子较大的话再剪开，最后剪成边长,0.5cm,大小即可。,修剪茎段即剪取两个腋芽之间的部分。,注意：使用叶片为材料时，挑选叶片较大植株；使用茎段为材料时挑选茎段较长的植株，方便修剪。,20,（图,25,、,26,、,27,）,21,5,、接种培养,把未接种培养基瓶口在酒精灯火焰灭菌,2,3,秒后打开瓶盖，用镊子夹取腋芽或叶片接种于培养瓶内。叶片平铺在培养基上，页面朝上，腋芽直接插入培养基即可。（图,28,，,29,）,（图,28,）,（图,29,）,22,接种结束后把瓶口和瓶盖在酒精灯火焰灭菌,2,3,秒后盖上瓶盖，放在光照培养架或者恒温光照培养箱内培养。（图,30,，,31,）,培养条件：,25,室温光照培养,12h,，黑暗培养,12h,。,（图,30,）,（图,31,）,23,三、移栽,移栽到花盆或花圃、也可移栽至小型无土栽培系统。,24,1,、炼苗,挑选长势较好而且长出根系的无菌苗，在移栽培养的环境中先闭瓶放置,3,天，再打开瓶盖放置,3,天，让无菌苗适应室内的温度和湿度。（图,32,）,（图,32,）,25,2,、移栽到花盆,炼苗结束后把无菌苗从组培瓶中取出，去净培养基，把组培苗移栽到蛭石和草炭土的混合基质中。（图,33,，,34,，,35,，,36,）,（图,33,）,（图,34,）,26,（图,35,）,（图,36,）,27,3,、成苗开花,在培养的过程中要经常浇水或营养液，温度维持在,25, ,30,，植株容易开花。（图,37,）,（图,37,）,28,实验结束,Thank you!,