2011分光光度计性能检查

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,哈尔滨医科大学,实验一 可见分光光度计性能检查,1,一、实验目的,二、,实验原理,三、试剂与器材,四、仪器的使用方法,五、实验步骤,主要内容,2,1,、掌握,T6,新悦,-,可见分光光度计主要性能的检定方 法和仪器的使用。,2,、熟悉仪器的主要性能和技术指标。,3,、了解仪器的基本结构。,一、实验目的,3,紫外可见分光光度法（,ultraviolet-visible spectro-photometry, UVS,）是根据物质的分子对紫外可见光区辐射的吸收特征和吸收程度，对物质的组成进行定性或定量及结构分析的方法。,Lambert-beer,定律是分光光度法定量分析依据。,A=b c,可见光区,400,760nm,紫外光区,200,400nm,二、实验原理,4,结构示意图：光源单色器样品池检测器信号显示装置,一、主要部件,（一）光源：可见分光光度计钨灯,=320-2500nm,紫外分光光度计氢灯，氘灯,=150-400nm,（二）单色器：将光源连续光谱按波长顺序色散并选出所需单,色光。,（三）吸收池：普通玻璃和石英玻璃。,（四）检测器：光信号变成电信号（光电管、光电倍增管）。,（五）信号显示装置：将输出信号经处理转换成透光度或吸光,度再显示或记录下来。,二、实验原理,5,1,、试剂：氯化钴溶液,2,、,6,、,10,mg/ml,。,2,、器材：,T6,新悦可见分光光度计,玻璃吸收池；,100ml,烧杯；,镜头纸；滤纸；一次性吸管,三、试剂与器材,6,四、仪器的使用方法,1,、开机：打开电源，仪器初始化，约,3min,完成。,预热,1h,。,2,、选择测量模式：在初始化完成之后，系统默认进入吸光度测量界面。如果要进行透光度或定量测量，可以按,MODE,键进行切换。,7,3,、设置测量波长：,在测量界面下，按,GOTO ,键 在数字,键盘上键入波长数值 按,ENTER,键,4,、设置吸收池模式和个数：,按,SHIFT/RETURN,键，切换至系统应用界面。,（,1,）按上翻键，设置吸收池类型：,1CELL,固定池，只有一个吸收池可用于测量。,5CELL,五联池，最多有五个吸收池可用于测量。,8CELL,八联池，最多有八个吸收池可用于测量。,8,（,2,）按下翻键，设置吸收池个数。,例如：如果实验需要,6,个吸收池进行测量，,那么吸收池类型应设置为,8CELL,，吸收池个数设为,6,。,注意：,1,、设定的吸收池个数不应大于实际中所用到的吸收池个数，因为：多余的吸收池位置，仍然会有入射光通过，此时光线直接进入到检测器中，强度比较大，容易使检测器疲劳。,2,、,设置吸收池个数的正确操作是按下翻键进行选择，而非在数字键盘上键入。如键入,2,，钨灯将被关掉。,9,5,、自动校零：,按,SHIFT/RETURN,键，切换到测量界面。,在,1,号吸收池中放入空白溶液，按,ZERO,键进行空白校正。,注意：空白校正这一步骤，一定要在各参数设置完成之后，样品测量之前进行；同理，如果在测量过程中需要改变参数，那么在参数设置完成后，要再次进行空白校正。,10,6,、测量样品：从,2,号吸收池开始，,依次放入样品，按,START,键，仪器测量,全部样品，然后显示出最后一个样品的吸光度值。,读数：用上翻键可查看其他样品吸光度值。,7,、打印结果：在已连接打印机的情况下，按,PRINT,键打印数据。,8,、结束测量：按,SHIFT/RETURN,键，从读数界面返回测量界面，关闭电源。,注意：关电源后，系统中存储的数据结果将丢失。,11,测量全部完成后，切换到测量界面，然后关闭仪器电源。,用蒸馏水清洗吸收池，倒扣于滤纸上晾干；如果吸收池污染严重，冲洗后置于,70,80,的酒精中浸泡。,将用过的仪器、试剂等放回原位。,12,五、实验步骤,1,、仪器外观检查,2,、稳定度检测,3,、波长准确度（校正）与波长重复性,4,、线性误差检查,5,、透光度重现性检定,6,、杂散辐射率,7,、吸收池的配套性检定,13,1,、仪器外观检查,2,、稳定度检测,零点,稳定度,：波长设置,500nm,，将吸收池推杆推 至最顶端，按“,zero,”,键，调节,吸光度为,0,，,观察,3min,，记录读数。示值的最大漂移量，即为零点稳定度。,技术指标：,0.002 /3min,四、实验步骤,14,3,、波长准确度（校正）与波长重复性：,（,1,）波长准确度（校正）,系统自动检测内置镨钕玻璃片,808.0nm,的,特征波长，时间大约,1min,。,检测完成后，系统显示实测波长值。,=,示,-,808,1nm,时，按,enter,键校正，,=,示,-,808,1nm,时，不需波长校正，按键，再按,enter,，系统返回系统应用界面。,开机，预热,按,SHIFT/RETURN,按数字键,9,15,（,2,）波长,重现性检定,以蒸馏水为参比，,测定,CoCl,2,溶液,(6mg/ml),在,510nm,处的,吸光度,（英文缩写为,A,或,ABS,）。逐一作,3,次,测量，记录吸光度值。代入公式计算波长重复性,并绘制波长吸收曲线。,结果分析：重现性应小于,0.4nm,。,注意：吸收池不得有气泡。倒溶液至三分之二处即可。,16,4,、线性误差检查：,测量界面。,（,1,）设置波长键：,=510nm,（,2,）设置吸收池个数：,（,3,）空白校正：,（,4,）测量：将,2,、,6,、,10mg/ml,的,CoCl,2,溶液分别倒入,2,、,3,、,4,号吸收池中，按,START,键开始测量，记录吸光度读数。测量三次。,17,计算并分析结果：,线性误差计算公式：,结果分析：,吸光度值范围,允许线性误差,0.1,0.3,6,0.3,0.6,3,0.6,0.8,4,18,5,、透光度重现性检定,以蒸馏水为参比，测定,6mg/mlCoCl,2,510nm,处的,透光度,（英文缩写,T,），分别测定,3,次，记录读数。,结果分析：重现性应小于,0.15,。,19,6,、杂散辐射率,以蒸馏水为参比，测定,50g/L,NaNO,2,在,360nm,处的,透光度,，即为仪器在此波长处的杂散辐射率。,技术指标,：,杂散辐射率,0.1,20,7,、吸收池的配套性检定,检查方法：,700nm,分别测定蒸馏水透光度，空气调零，其中最大读数与最小读数之差，应不超过规定值。,0.5%,。,21,注意事项,1,、吸收池为光学玻璃制造，其透光面不能与硬物接,触，也不得用手触摸，池外溶液只能用擦镜纸将,毛面摺里面，沾去溶液或顺一个方向轻拭，不允,许用力来回擦试，以免有灰尘磨损透光面。测定,时透光面上不得留有水珠或纤维。,2,、不同型号的仪器其技术指标要求会有一定的差别。,22,预习,实验二 荧光分析法测定尿中维生素,B,2,的含量,预习重点：,1,、方法原理,2,、标准曲线,23,