植物生物学实验10植物种子生命力的快速测定

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验十、种子生命力的快速测定,植物生物学实验（二）,1,种子生命力,指种子的萌发能力。,种子生命力测定的常规方法,发芽实验、浮力实验,种子生命力快速测定的常用方法,BTB,法,、,TTC,法,、,红墨水法,以及,荧,光法,、,纸上荧光法,、,电导率测定法,、,冷冻测定法,等,二、知识背景,2,三、测定方法,BTB,法,TTC,法,红墨水法,荧光法,3,1,、,BTB,法,原理,凡活细胞必有呼吸作用，吸收空气中的,O,2,，放出,CO,2,。,CO,2,溶于水成为,H,2,CO,3,，,H,2,CO,3,解离成,H,+,和,HCO,3,-,，使得胚周围环境的,pH,值降低，可用酸碱指示剂,溴麝香草酚蓝（,BTB,）,来测定,pH,值的改变。,颜色变化越明显则表明种子活力越强。死细胞没有呼吸作用，也没有,BTB,的颜色变化。,4,BTB,法,试剂,0.1% BTB,溶液：,0.1g,溶解于,煮沸,过的,自来水,100mL,中，用滤纸滤去残渣。溶液若呈黄色，可滴加稀氨水或,NaOH,溶液，使之呈现蓝色或蓝绿色，棕色试剂瓶中保存。,BTB,琼脂凝胶：取,1g,琼脂煎碎后加入,100mL 0.1%BTB,溶液中，用小火加热并不断搅拌。待琼脂完全溶解后，趁热倒在干燥洁净的培养皿中，使之为一均匀的薄层，冷却后备用。,5,BTB,法,材料与设备,恒温箱、培养皿、小麦或绿豆,6,BTB,法,步骤,浸种：,将待测种子在,30,温水中浸种,24h,。,倒平板：取预先加热融化的,BTB,琼脂凝胶倒入培养皿，静置冷却，使之形成凝胶薄层。,显色：取吸胀的种子，整齐地将,胚向下,埋于准备好的,BTB,琼脂凝胶培养皿中，间隔距离在,1cm,左右。然后将培养皿置于恒温培养箱中,30-35,培养,1h,。,7,BTB,法,步骤,1h,后，记数种胚附近出现的黄色晕圈的活种子数，计算活种子的百分率。,8,9,2,、,TTC,法,原理,凡是有生命活力的细胞均具有呼吸作用，从而都有,氧化还原反应,，而死细胞则无此反应。,TTC,（氯化三苯四氮唑）可渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被辅酶（,NADH,2,或,NADPH,2,）上的氢还原，此时无色的,TTC,便转变为,红色的,TTF,（三苯基甲,曁,），并吸附在活细胞的表面，根据活细胞着色的深浅可定性的判断种子活力的有无与大小。,该方法在国际间、地区间交换种子最为常用。,注意：染色部位为,生活种子,的,胚,细胞。,10,TTC,法,试剂,0.5%TTC,溶液,：,0.5gTTC,（,酒精溶解,后）定容至,100ml,，,棕色瓶,4,保存。,若溶液变成红色，表示已被氧化不能再用。,11,TTC,法,材料与设备,恒温箱、培养皿、玉米种子、刀片,12,TTC,法,步骤,浸种：同,BTB,法。,显色：取吸胀的种子适量，用刀片沿胚的中心线纵切为两半，将每一种子的半粒置于培养皿中，另半粒待用。,加入适量的,0.5%TTC,溶液（以浸没种子为度），置于,30,恒温箱中；,1h,后，倒去染色液，观察现象。,计算活种子的百分率。,将待测种子在,30,温水中浸种,24h,。,13,3,、红墨水法,原理,活细胞的原生质膜具有,选择透性,，红墨水中的染色成分大红,G,不能进入细胞；因而胚不被红墨水染色。,死亡的种胚细胞原生质膜丧失选择透性，大红,G,进入胚细胞并染色。,注意：生活种子的胚细胞,不,染色。,14,红墨水法,试剂,5%,红墨水：以市购红墨水为原液，用自来水配制成,5%,的红墨水溶液,红墨水法,材料与设备,恒温箱、培养皿、玉米种子、刀片,15,红墨水法,步骤,浸种：同,BTB,法。,显色：将,TTC,法中剩余待用的一半种子置于另,1,只培养皿中，加入适量的,5%,红墨水液（以浸没种子为度）。,15min,后倒去红墨水，用自来水冲洗多次，直至冲洗液为无色为止。观察现象，判断种子活力的有无和大小。,计算活种子的百分率。,将待测种子在,30,温水中浸种,24h,。,16,红墨水法,17,活种子,死种子,18,4,、荧光法,原理,植物种子中常含有一些物质，能在紫外线照射下产生荧光，如黄酮类、香豆素类、酚类等。在衰老过程中：,荧光物质的结构、成分往往发生变化，因而改变荧光的颜色。可借助直接观察荧光来鉴定种子的生命力。,适用于,禾谷类、松柏纲,等植物的种子。,细胞膜透性增加，导致浸种后荧光物质外泄，可通过观察荧光物质的渗出情况判断种子的生命力。,适用于,十字花科,植物的种子。,19,荧光法,材料与仪器,玉米种子。,紫外光灯，不产生荧光的滤纸。,20,荧光法,步骤,随机取,20,粒种子，用刀片将玉米种子沿中心线切为两半，使其切面朝上放在滤纸上，置于紫外光灯下照射观察。,有生命力的种子将产生明亮的,蓝,色、,蓝紫,、,蓝绿,色荧光。死亡种子往往呈,黄,色、,褐,色，并暗淡无光。,观察、计数，计算活种子的百分率。,21,荧光法,观察孔,紫外分析仪,电源,选择波长,22,思考题,1,、试比较,TTC,法、,BTB,法、红墨水法及荧光法，测定的结果是否相同,?,为什么,?,哪一种方法更准确？它们,与种子的实际萌芽率是否一致？如若有偏差，理论上应为偏高还是偏低？为什么？,23,2,、,BTB,法测定种子发芽率时，若用煮死的种子做比较，有时也发现在种子周围出现黄色晕圈，为什么？,3,、如果用以上各方法来进行实验观察没有完全成熟的种子，将会有怎样的结果,？,思考题,24,纸上荧光法,原理：,凡有生活力的种子和已经死亡的种子，它们的种皮对物质的透性是不同的，而许多植物的种子中又都含有荧光物质。利用对荧光物质的不同透性来区分种子的死活，方法简单，特别是对十字花科植物的种子，尤为适用。,25,死种子,活种子,26,冷冻测定法,打破种子休眠,27,